DB15T 2593-2022冰草組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20CCSB21ICS65.020.20CCSB21內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標(biāo)準(zhǔn)DB15/T2593—2022冰草組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程Technicalcodeofpracticefortissuecultureofagropyroncristatum2022-06-242022-06-242022-07-24內(nèi)蒙古自治區(qū)市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)林業(yè)和草原局提出并歸口。本文件起草單位：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院草原研究所、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)。本文件主要起草人：徐春波、王勇、趙海霞。冰草組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程范圍本文件適用于冰草組織培養(yǎng)育苗。（GB/T603化學(xué)試劑試驗(yàn)方法中所用制劑及制品的制備NY/T2306-2013花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程DB15/T1940-2020西部沙櫻組織培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T2306界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。NY/T2306界定的術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。冰草agropyroncristatum(L.)gaertn屬于禾本科（Gramineae）冰草屬（Agropyron）多年生草本植物。幼穗youngear生長(zhǎng)2至5年、長(zhǎng)度1cm～3cm的冰草孕穗。種子seed有生活力、飽滿的包含內(nèi)外稃的冰草種子。成熟胚matureembryo完熟期冰草種子的胚。4環(huán)境與器具滅菌參照DB15/T1940執(zhí)行。5培養(yǎng)基MS培養(yǎng)基、1/2MS、改良MS培養(yǎng)基見(jiàn)附錄A。配制將常用試劑配制成50～100倍的母液，按照GB/T603規(guī)定方法配制。所用激素均配制濃度為mg/mLB保存4℃的冰箱35.3.1配制蔗糖，攪拌溶解后再分別加入母液，攪拌均勻，加蒸餾水定容至1L。pH蔗糖，攪拌溶解后再分別加入母液，攪拌均勻，加蒸餾水定容至1L。pH用1mol/L的NaOH將配制好的培養(yǎng)基調(diào)到pH值5.8～6.0，用酸度計(jì)或精密pH試紙測(cè)定。1/4～1/31220mi6外植體幼穗或成熟胚。幼穗在超凈臺(tái)上用75%酒精脫脂棉球擦洗葉鞘表面消毒，剝出幼穗，切成0.3cm～0.5cm的小段。成熟胚h(yuǎn)～447530s，30.25min7愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)幼穗培養(yǎng)基幼穗愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為改良MS+2.0mg/L2，4-D。接種2.5cm2～3cm2124℃～26℃暗培養(yǎng)。培養(yǎng)20d～30d。成熟胚成熟胚培養(yǎng)基成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS＋0.2mol/L甘露醇+2.0mg/L2，4-D。接種1.5cm2～2cm21見(jiàn)本文件7.1.3。培養(yǎng)14d～20d。8增殖培養(yǎng)幼穗培養(yǎng)基幼穗增殖培養(yǎng)基為改良MS+2.0mg/L2，4-D+0.2mg/L6BA。接種4cm2～5cm21見(jiàn)7.1.3。培養(yǎng)40d～50d；每20d換1次培養(yǎng)基。成熟胚培養(yǎng)基成熟胚增殖培養(yǎng)基為MS＋0.2mol/L甘露醇+2.0mg/L2，4-D+0.3mg/LABA。接種3cm2～4cm21見(jiàn)7.1.3。8.2.4培養(yǎng)時(shí)間8.2.4培養(yǎng)時(shí)間培養(yǎng)40d～60d；每20d換1次培養(yǎng)基。9分化培養(yǎng)幼穗培養(yǎng)基幼穗分化培養(yǎng)基為MS+3.0mg/LKT+0.5mg/LNAA。接種5cm2～6cm2124℃～26℃，全天光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度3000Lux～4000Lux。培養(yǎng)40d～60d；每20d換1次培養(yǎng)基。成熟胚9.2.1培養(yǎng)基成熟胚分化培養(yǎng)基為MS＋3.0mg/LKT＋1.0mg/LNAA。接種每5cm2～6cm2接種124℃～26℃，每天光照時(shí)間16h，光照強(qiáng)度3000Lux～4000Lux。培養(yǎng)60d～90d；每20d換1次培養(yǎng)基。10生根培養(yǎng)幼穗培養(yǎng)基幼穗生根培養(yǎng)基為改良1/2MS+0.1mg/LNAA。接種在超凈工作臺(tái)上，將長(zhǎng)至3cm～4cm的小苗逐一轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，每器皿接種1苗，封好瓶口，標(biāo)在超凈工作臺(tái)上，將長(zhǎng)至3cm～4cm的小苗逐一轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基，每器皿接種1苗，封好瓶口，標(biāo)明名稱和日期。見(jiàn)9.1.3。培養(yǎng)20d～30d。成熟胚培養(yǎng)基成熟胚生根培養(yǎng)基為1/2MS＋0.5mg/LNAA。接種在超凈工作臺(tái)上，將長(zhǎng)至3cm～4cm的小苗逐一轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，每器皿接種1苗，封好瓶口，標(biāo)明名稱和日期。見(jiàn)9.2.3。培養(yǎng)20d～30d。11煉苗與移栽煉苗選擇生長(zhǎng)健壯的組培苗，打開(kāi)封口膜，放在自然光、室溫下2d～3d?；|(zhì)營(yíng)養(yǎng)土與蛭石1:1混合。經(jīng)高壓滅菌后裝入花盆備用。移栽20cm～30cm附錄A（）基本培養(yǎng)基成分見(jiàn)表A.1。表A.1基本培養(yǎng)基成分類型組分MS培養(yǎng)基MS大量元素KNO31900.01900.0NH4NO31650.0956.0MgSO4·7H2O370.0370.0KH2PO4170.01160.0CaCl2·2H2O440.096.0微量元素MnSO4·4H2O22.3022.30ZnSO4·7H2O8.6008.600H3BO36.2006.200KI0.8300.830Na2MoO4·6H2O0.2500.250CuSO4.5H2O40.0250.025CoCl2.6H2O0.0250.025鐵鹽Na2-EDTA37.3037.30FeSO4.7H2O27.8027.80有機(jī)物甘氨酸2.0002.000鹽酸吡哆辛0.5000.500鹽酸硫銨素0.1002.000煙酸0.5001.000肌醇100.0100.0尼克酸--------附錄B（規(guī)范性）激素的配制激素配置方法見(jiàn)表B.1。表B.1激素配置方法類別名稱配制方法滅菌方式存儲(chǔ)方式生長(zhǎng)素2，4-二氯苯氧乙酸（2，4-D）用適量無(wú)水乙醇溶解后加入去離子水定容。高溫滅菌