細(xì)胞化學(xué)染色法

關(guān)于細(xì)胞化學(xué)染色法第1頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五一、概念

細(xì)胞學(xué)和化學(xué)相結(jié)合的一門(mén)科學(xué)。以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合運(yùn)用化學(xué)反應(yīng)原理對(duì)血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)物質(zhì)（酶類(lèi)、脂類(lèi)、糖類(lèi)、鐵、蛋白質(zhì)、核酸等）作定性、定位、半定量分析的方法。第2頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五二、臨床應(yīng)用輔助判斷急性白血病的細(xì)胞類(lèi)型僅從細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀(guān)察白血病的診斷正確率約50-70%，如結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色則可提到90%以上。輔助血液系統(tǒng)等疾病的診斷和鑒別診斷觀(guān)察疾病療效和預(yù)后發(fā)病機(jī)制的探討第3頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五三、基本步驟固定顯示復(fù)染第4頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五固定目的：保持細(xì)胞結(jié)構(gòu)及化學(xué)成分不變。方法：物理法干燥、火焰固定化學(xué)法蒸汽固定、液體固定（甲醛、乙醇、丙酮等）第5頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五顯示偶氮偶聯(lián)法聯(lián)苯胺法普魯士藍(lán)反應(yīng)雪夫反應(yīng)金屬沉淀法第6頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五復(fù)染目的：使各種細(xì)胞顯示出來(lái)便于觀(guān)察染核：中性紅、甲基綠、蘇木精、核固紅、沙黃等染漿：伊紅、剛果紅、光綠等第7頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五四、種類(lèi)過(guò)氧化物酶染色、蘇丹黑染色、中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)α-醋酸奈酚酯酶染色酸性磷酸酶染色鐵染色第8頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五過(guò)氧化物酶染色(POX)過(guò)氧化物酶：是中性粒細(xì)胞含量最多的一種酶主要存在于線(xiàn)粒體和溶酶體中主要功能是破壞生物氧化過(guò)程中有劇毒的過(guò)氧化物，使其放出氧，參加細(xì)胞內(nèi)氧化還原過(guò)程。第9頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五原理Washburn法四甲基聯(lián)苯胺法改良pereira染色法第10頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五四甲基聯(lián)苯胺法H2O2

溶酶體顆粒中的ＰＯＸ

H2O＋O2四甲基聯(lián)苯胺O2聯(lián)苯胺藍(lán)聯(lián)苯胺藍(lán)＋亞硝基鐵氰化鈉O2藍(lán)色物質(zhì)

（沉淀）第11頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五正常細(xì)胞的染色反應(yīng)粒細(xì)胞系統(tǒng)原粒（可為陰性）分葉（陽(yáng)性程度逐漸增強(qiáng)）嗜酸陽(yáng)性最強(qiáng)嗜堿陰性單核細(xì)胞系統(tǒng)陰性或弱陽(yáng)性，（顆粒少而細(xì)）其他細(xì)胞陰性第12頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第13頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第14頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五臨床評(píng)價(jià)：輔助診斷急性白血病細(xì)胞類(lèi)型首選、最重要的細(xì)胞化學(xué)染色。第15頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五１、幫助鑒別診斷急性白血病的類(lèi)型急性粒細(xì)胞白血?。涸？沙赎?yáng)性(粗大，局限性分布），陰性不可排除。急性淋巴細(xì)胞白血?。海疲粒乱?guī)定陽(yáng)性率〈３％。急性單核細(xì)胞白血?。涸瓎慰蔀殛幮?，少數(shù)可弱陽(yáng)性，（少而細(xì)小，常彌散分布）。第16頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第17頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第18頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五急性早幼粒細(xì)胞白血病與急性單核細(xì)胞白血病鑒別

AML-M3強(qiáng)陽(yáng)性組織細(xì)胞白血病、惡性組織細(xì)胞病與急單前兩者陰性第19頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五2.成熟中性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶活性的變化活性增高：再生障礙性貧血、感染、急性淋巴細(xì)胞白血病和慢性淋巴細(xì)胞白血病活性減低：急粒、慢粒、急單、MDS、放射病、退化性中性粒細(xì)胞第20頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五蘇丹黑染色原理：能溶解于細(xì)胞內(nèi)含脂結(jié)構(gòu)中，使脂類(lèi)物質(zhì)顯示出來(lái)，呈棕黑色或深黑色。正常細(xì)胞的染色反應(yīng)同（ＰＯＸ染色）臨床評(píng)價(jià)ＰＯＸ染色特異性高于ＳＢＢ染色ＳＢＢ染色敏感性高于ＰＯＸ染色第21頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（ＮＡＰ）

原理：中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中的堿性磷酸酶在PH9.6的堿性條件下能水解磷酸奈酚鈉底物，生成奈酚，后者與偶氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀定位于胞質(zhì)中的酶活性處。第22頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色

（ＮＡＰ）原理：磷酸奈酚鈉底物

PH9.6

堿性磷酸酶

(中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中)

奈酚+偶氮鹽

(有色沉淀)第23頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五正常血細(xì)胞染色反應(yīng)

NAP主要存在于中性成熟粒細(xì)胞(桿狀\分葉)

第24頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第25頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第26頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第27頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五參考值：成人NAP陽(yáng)性率10%-40%；

NAP積分40-80分第28頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五ＮＡＰ積分增加：

細(xì)菌性感染、再生障礙性貧血、骨髓增殖性疾病、慢性粒細(xì)胞白血?。铀倨?、急變期）、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病、惡性淋巴瘤、骨髓轉(zhuǎn)移癌、腎上腺糖皮質(zhì)激素及雄激素治療后等。第29頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五ＮＡＰ積分下降：慢性粒細(xì)胞白血?。云冢?、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿、骨髓增生異常綜合癥、惡性組織細(xì)胞病等。第30頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五疾病的鑒別類(lèi)白血病反應(yīng)慢性粒細(xì)胞性白血病細(xì)菌性感染病毒性感染急粒急淋惡性淋巴瘤惡性組織細(xì)胞病第31頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五5.惡性組織細(xì)胞病反應(yīng)性組織細(xì)胞增多癥6.真性紅細(xì)胞增多癥繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥原發(fā)性血小板增多癥繼發(fā)性血小板增多癥8.再生障礙性貧血陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿第32頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五過(guò)碘酸-雪夫反應(yīng)原理：乙二醇基（多糖類(lèi)物質(zhì)中）過(guò)碘酸雙醛基＋無(wú)色品紅紫紅色化合物第33頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五正常血細(xì)胞染色反應(yīng)粒細(xì)胞系統(tǒng)原粒（可為陰性）分葉（陽(yáng)性程度逐漸增強(qiáng)）嗜酸胞質(zhì)呈紅色,顆粒不著色嗜堿反之紅細(xì)胞系統(tǒng)陰性單核細(xì)胞系統(tǒng)原單（可為陰性）,其他為陽(yáng)性。第34頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第35頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第36頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五淋巴：大多陰性，少數(shù)陽(yáng)性。巨核及血小板：陽(yáng)性第37頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五臨床評(píng)價(jià)紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中幼紅細(xì)胞可陽(yáng)性（均勻紅色或塊狀）白細(xì)胞系統(tǒng)疾?。杭绷埽海ㄔ琢芗?xì)胞陽(yáng)性率升高，呈粗顆?；驂K狀）急粒：少數(shù)原粒呈陽(yáng)性急單：可呈陽(yáng)性第38頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第39頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五M5PAS(+)第40頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五AML-M6第41頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第42頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五AML-M7第43頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五M7PAS(+)第44頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第45頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第46頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第47頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五α-醋酸萘酚酯酶染色原理

α-醋酸萘酚PH中性α-醋酸萘酚酯酶α-萘酚+重氮鹽(堅(jiān)牢藍(lán)B)(黑色或灰黑色)

第48頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)單核細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞（均可+）單核細(xì)胞的陽(yáng)性可被氟化鈉抑制。氟化鈉抑制率=抑制前的陽(yáng)性率/積分-抑制后的抑制前的陽(yáng)性率/積分

×100%第49頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五臨床評(píng)價(jià)：1、鑒別白血病類(lèi)型急單急粒急性早幼粒細(xì)胞白血?。◤?qiáng)陽(yáng)性，不被抑制）急性粒單細(xì)胞白血病第50頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五其他脂酶染色氯乙酸AS-D奈酚脂酶染色幾乎僅出現(xiàn)在粒細(xì)胞、特異性高。臨床意義：急性粒細(xì)胞白血病有一定數(shù)量白血病細(xì)胞陽(yáng)性，可以肯定白血病細(xì)胞中有粒系成分，陰性不排除急粒。

第51頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五醋酸AS-D萘酚酯酶染色染色結(jié)果、臨床意義基本同α-NAE染色。α-丁酸萘酚酯酶染色臨床意義同α-NAE染色，特異性低于α-NAE染色第52頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五酸性磷酸酶染色原理：偶氮偶聯(lián)法：Gomori硫化鉛法抗酒石酸酸性磷酸酶染色第53頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第54頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第55頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五臨床評(píng)價(jià)：診斷多毛細(xì)胞白血病毛細(xì)胞呈陽(yáng)性，陽(yáng)性反應(yīng)不被L-酒石酸抑制。

第56頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第57頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五鐵染色1、原理：鐵+亞鐵氰化鉀酸性環(huán)境亞鐵氰化鐵（蘭色）第58頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五2、正常血細(xì)胞的染色反應(yīng)貯存鐵部位：巨噬細(xì)胞和幼紅細(xì)胞細(xì)胞外鐵：骨髓小粒的巨噬細(xì)胞中呈彌散藍(lán)色、顆粒狀、小珠狀或塊狀可將細(xì)胞外鐵分為（-）、（+）、（++）（+++）、（++++）。第59頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五細(xì)胞內(nèi)鐵：指存在于中幼紅、晚幼紅、成熟紅細(xì)胞中的鐵。鐵粒幼紅細(xì)胞：胞質(zhì)中出現(xiàn)藍(lán)色鐵顆粒的幼紅細(xì)胞。環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞：幼紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)藍(lán)色顆粒在10(6)顆以上，圍核周2/3(1/2)以上者。第60頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第61頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五第62頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五細(xì)胞外鐵第63頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五細(xì)胞內(nèi)鐵第64頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞第65頁(yè)，共69頁(yè)，2022年，5月20日，19點(diǎn)0分，星期五結(jié)果判讀：細(xì)胞外鐵：可分五級(jí)標(biāo)準(zhǔn)