乙肝五項操作規(guī)程

乙肝五項操作規(guī)程乙肝五項操作規(guī)程乙肝五項操作規(guī)程xxx公司乙肝五項操作規(guī)程文件編號：文件日期：修訂次數(shù)：第1.0次更改批準審核制定方案設計，管理制度乙肝五項（乳膠法）操作規(guī)程1.檢測目的乙型肝炎病毒標志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)檢測。2.測定原理HBsAg檢測采用雙抗體夾心法原理，試劑含有被事先固定于膜上測試區(qū)（T區(qū)）的抗體。檢測時，標本滴入試劑加樣處，標本與預包被的乳膠顆粒（即標記物）結合的HBsAb（即標記抗體）反應，該結合物隨之在毛細效應下向上層析。如是陽性，乳膠抗體（標記抗體）在層析過程中先與標本中的HBsAg結合，隨后結合物會被固定在T區(qū)膜上的HBsAb捕獲，形成HBsAb標記抗體-HBsAg-HBsAb復合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則T區(qū)沒有紅杠。HBsAb檢測采用雙抗原夾心法原理，試劑含有事先固定于膜上測試區(qū)（T區(qū)）的HBsAg。檢測時，標本滴入試劑加樣處，標本與預包被的乳膠顆粒結合的HBsAg反應（即標記抗原）反應，該結合物隨之在毛細效應下向上層析。如是陽性，乳膠抗原（標記抗原）在層析過程中先與標本中的HBsAb結合，隨后結合物會被固定在T區(qū)膜上的HBsAg捕獲，形成HBsAg標記抗原-HBsAb-HBsAg復合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則T區(qū)沒有紅杠。HBeAg檢測采用雙抗體夾心法原理。試劑含有事先固定于膜上測試區(qū)（T區(qū)）的HBeAb。檢測時，標本滴入試劑加樣處，標本與預包被的乳膠顆粒結合的HBeAb反應（即標記抗體）反應，該結合物隨之在毛細效應下向上層析。如是陽性，乳膠抗體（標記抗體）在層析過程中先與標本中的HBeAg結合，隨后結合物會被固定在T區(qū)膜上的HBeAb捕獲，形成HBeAb標記抗原-HBeAg-HBeAb復合物，從而在T區(qū)形成一條紅杠。如為陰性，則T區(qū)沒有紅杠。HBeAg、HBcAb采用競爭抑制法原理，試劑含有事先固定于膜上測試區(qū)（T區(qū)）的抗體。檢測時，標本滴入試劑加樣處，隨之標本在毛細效應下向上層析。如標本中含有相應的抗體，則同膜上測試區(qū)(T)的單克隆抗體競爭，與預包被在乳膠顆粒上的相應抗原反應。如標本中沒有相應的抗體，則預包被在乳膠顆粒上的相應抗原與膜上測試區(qū)(T)的單克隆抗體全部結合。陽性標本，測試區(qū)(T)將沒有紅色條帶；陰性標本，測試區(qū)(T)會出現(xiàn)明顯的紅色條帶。3.標本采集樣本采集后應盡快分離血清或血漿以避免溶血。檢測進應盡量使用新鮮的樣本。樣本若不能及時送檢，可在2-8℃冷藏3天。長期保存需冷凍于-20℃，忌反復凍融。發(fā)臭、溶血等異常樣本請勿使用。4.試劑艾博生物醫(yī)藥有限公司5.操作步驟使用前將試劑板和血清／血漿標本恢復至室溫(20～30％)。從原包裝鋁箔袋中取出試劑盒(注意：在扣開鋁箔前應先恢復至室溫)，在1小時內應盡快地使用。將試劑盒置于干凈平坦的臺面上，用吸管吸取血清／血漿標本，逐滴垂直加入于試劑板的五個加樣子L中(每孔2-3滴)。加樣后立刻開始計時，等待紅色條帶的出現(xiàn)，在15分鐘時讀取測試結果。在20分鐘后讀取的結果無效。6.結果判定由于前三個項目HBsAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗體(原)夾心法原理，后兩個項日HBeAb、HbcAb使用競爭法原理。因此前一：個項日與后兩個項目判讀方法是不同的，請注意區(qū)別。.HBsAg、HBsAb、HbeAg陽性(+)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)(T)內，另一條位于質控區(qū)(C)。陽性結果表明：標本中含有待測物質。陰性(-)：質控區(qū)(c)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)(T)內無紅色條帶出現(xiàn)。陰性結果表明：標本中檢測不出待測物質。

無效：質控區(qū)(c)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經變質損壞。在此情況下，應再次仔細閱讀說明書，并用新的試劑盒重新測試。如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產品，并與當?shù)毓搪?lián)系。注意：在進行HBsAg、HBsAb、HbeAg測試時，測試區(qū)(T)內的紅色條帶可顯現(xiàn)出顏色深淺的現(xiàn)象。只要在規(guī)定的觀察時間內，不論該條帶顏色深淺，即使只有非常弱的色帶也應該判為陽性結果。、HBcAb陽性(+)：僅質控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紅色條帶．在測試區(qū)(T)內無紅色條帶出現(xiàn)。陽性結果表明：標本中含有待測物質。弱陽性(+)：質控區(qū)(C)出現(xiàn)一條紅色條帶，在測試區(qū)(T)內有非常弱的紅色條帶出現(xiàn)。陽性結果表明：標本中含有待測物質。陰性(-)：兩條紅色條帶出現(xiàn)。一條于測試區(qū)(T)內，另一條位于質控區(qū)(C)。陰性結果表明：標本中檢測不出待測物質。無效：質控區(qū)(C)未出現(xiàn)紅色條帶，表明不正確的操作過程或試劑盒已經變質損壞。在此情況下，應重新測試。如果問題仍然存在，應立即停止使用此批號產品，并與當?shù)毓搪?lián)系。7.質量控制請控制判讀時間，測試結果應在測定開始后20分鐘左右讀取，30分鐘后讀判定無效。質控區(qū)內(C區(qū))一條紅色條帶的出現(xiàn)是試驗結果可靠的前提。質控內(C)所顯現(xiàn)的紅色條帶是判定標本是否足夠，層析過程是否正常的標準，同時也作為試劑的內控標準。8.注意事項乳膠法乙肝五項檢測試劑板(血清／血漿)只是定性的篩選乙肝病毒血清標志物的存在，不能確定血樣中病毒的含量。由于在技術上和操作上可能出現(xiàn)的失誤，同時也由于標本中存在的干擾物質，檢測結果可能有錯誤。對可疑結果應作相應的進一步檢測。8.生物安全防護在檢測前，所有標本均應視為“陽性”標本即生物危險品。如操作中不慎灑落血液，要及時對污染臺面消毒處理。操作前一定要做好自身防護(穿白大衣、帶口罩、白帽、膠皮手套)。HBV對低溫、干燥、紫外線、70％乙醇均有耐受性。煮沸100℃10分鐘、高壓蒸汽滅菌121℃15分鐘或加熱160℃2小時均可滅活HBV。5～10g／L次氯酸鈉30分鐘，1：4000福爾馬林37℃72小時，％過氧乙酸15分鐘均可破壞其傳染性。9.臨床意義HBsAg陽性：血清HBsAg陽性，表示受檢者處于HBV的感染狀態(tài)。HBsAg也可從許多乙肝檢驗對象體液和分泌物中測出，如唾液、精液、乳汁、陰道分泌物等。HBsAb陽性：多見于乙型肝炎處于恢復期或既往曾感染過HBV，現(xiàn)在已恢復，而且對HBV有一定的免疫力；同時，HBsAb陽性是對接種乙肝疫苗后產生效果，即接種免疫成功的指標。HBeAg陽性：見于HBV感染的早期，表示血液中含有較多的病毒顆粒，提示肝細胞有進行性損害和高度傳染性；乙型肝炎加重之前，HBeAg即有升高，有助于預測肝炎病情，HBeAg持續(xù)陽性，易轉為慢性乙型肝炎；HBeAg和HBsAg均為陽性的孕婦，可以將乙型肝炎傳播病毒給新生兒，其感染的陽性率為70％～90％。HBeAb陽性：多見于HBeAg轉陰的檢驗對象，意味著HBV部分被清除或抑制，病毒復制減少，傳染性降低；部分慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌檢驗對象可檢出HBeAb；在HBsAg和HBsAb陰性時，如能檢出HBeAh和HBcAb，也能確診為乙型肝炎近期感染。HBcAb陽性：說明既往感染過乙肝病毒。它是感染病毒后最早呈陽性,也是最晚轉陰性的一項，而且有些人一輩子都是陽性。附：HBcAb-lgG陽性：高滴度表示正在感染HBV，低滴度則是既往感染過HBV的指標，具有流行病學的意義。HBcAb-IgM陽性：抗-HB