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文檔簡介

競爭ELISA法測萊克多巴胺的殘留11/19/20221

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA），它是使抗原或抗體吸附于固相載體，使隨后進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)均在載體表面進(jìn)行，提高了靈敏度，即可檢測抗原，也可檢測抗體。實(shí)驗(yàn)方法包括間接法、夾心法及競爭法等。

11/19/20222競爭ELISA：

先將抗原包被在酶標(biāo)板上，然后再加入競爭物（都能和一抗發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)），然后加入一抗，這樣競爭物抗原就會(huì)和包被抗原一同競爭性的和一抗結(jié)合，所以競爭物濃度越高，就會(huì)與一抗的結(jié)合幾率越大。相反包被抗原就會(huì)越少的與一抗結(jié)合，這樣在最后顯色中OD值也就越低。注意：為了保證競爭物與包被抗原都有同樣的機(jī)會(huì)與一抗結(jié)合，不能先加一抗再加競爭物。11/19/20223通過競爭ELISA先得到一條線性關(guān)系比較好的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出關(guān)系方程。然后再將測得的樣品值帶入其方程從而求出樣品中萊克多巴胺的含量。11/19/20225實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌握競爭ELISA的原理和操作方法；2、了解影響ELISA反應(yīng)的條件。11/19/20226實(shí)驗(yàn)材料抗原：萊克多巴胺，抗體：萊克多巴胺單抗(1:10000)，梯度濃度標(biāo)準(zhǔn)競爭物（萊克多巴胺），底物顯色A液、B液，PBS洗滌液，HRP標(biāo)記兔抗鼠二抗，終止液，96孔聚苯乙烯反應(yīng)板、移液器、恒溫箱（37℃）。包被液：0.01MpH9.6碳酸鹽緩沖液洗滌液：0.015MpH7.4PBS+0.5%Twen20封閉液：洗滌液+3%BSA底物液：A：Tris.cl+H2O2B：TMB終止液：2MH2SO411/19/20227實(shí)驗(yàn)方法1、取兩排已經(jīng)包被好的板孔放入板架中2、按順序加入競爭物各50μl。3、再取兩個(gè)包被好的孔放入板架中，分別向兩板孔中加入兩種樣品50μl。4、向所有板孔中加入稀釋好的一抗50μl。5、放入37度溫箱中孵育30min。6、甩掉板中的液體后，用PBS-T洗液洗3遍，每次3分鐘。11/19/20228獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品1樣品2100A50B25C12.5D6.25E3.125F1.5625G0

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