酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn) 2課件

酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆誆LISA方法的原理和類(lèi)型熟練ELISA方法檢測(cè)乙肝五項(xiàng)操作

ELISA的原理

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活又保留酶的活性。

在測(cè)定，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)，用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開(kāi)；再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過(guò)反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。再次洗滌此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。

4競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗原

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭(zhēng)與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，最后的顯色也愈淺。

小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。

5捕獲包被法測(cè)抗體

實(shí)驗(yàn)材料1.疑似乙型肝炎患者待檢血清。2.檢測(cè)HBV“兩對(duì)半”的ELISA試劑盒：

（1）已包被抗原或抗體的固相載體（免疫吸附劑）

（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體（結(jié)合物）（3）洗滌液

（4）酶反應(yīng)終止液

（5）酶的底物、顯色劑

（6）陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品3.加樣器、溫浴箱

非競(jìng)爭(zhēng)法

目測(cè)法以顯色孔為陽(yáng)性；比色法是以吸光度A值>0.5N（陽(yáng)性對(duì)照值）為陽(yáng)性，標(biāo)本吸光度A值≤0.5N者判為陰性

競(jìng)爭(zhēng)法

結(jié)果觀(guān)察需反看：目測(cè)法以不顯色（無(wú)色）孔為陽(yáng)性；比色法是以吸光度A值>0.5N（陰性對(duì)照值）為陰性，標(biāo)本吸光度A值≤0.5N者判為陽(yáng)性。結(jié)果判斷：

1、HBsAg-------------------雙抗體夾心法（兩步法）2、HBsAb-------------------雙抗原夾心法3、HBeAg-------------------雙抗體夾心法4、HBeAb----