大學(xué)《微生物檢驗技術(shù)》考點精要、各章核心知識點及習(xí)題庫

大學(xué)《微生物檢驗技術(shù)》考點精要、各章核心知識

點及習(xí)題庫整理目錄TOC\o"1-5"\h\z《微生物檢驗技術(shù)》考試考點精要 1\o"CurrentDocument"《微生物檢驗技術(shù)》各章核心知識點（詳細完整版） 42\o"CurrentDocument"《微生物檢驗技術(shù)》名詞解釋、填空、問答選擇題 150《微生物檢驗技術(shù)》考試考點精要.生物學(xué)按界門綱目科屬種分類，種是最小單位。病毒分類：目、科、亞科、屬、種。屬名一VRirus結(jié)尾的單詞，亞科名一VRirinae結(jié)尾的單詞,科名一VRiridae結(jié)尾的單詞。目名一VRirales。2004年ICTV公布病毒分為：73個科、11個亞種、289個屬。.結(jié)核菌可利用甘油為碳源，梭狀芽胞菌可以氨基酸為碳源，流感嗜血桿菌要V,X因子才能生長。.藥物敏感試驗：紙碟法、小杯法、凹孔法、試管法。常用單片紙碟法、試管稀釋法（以抗菌藥物的最高稀釋度仍能抑制細菌生長或殺菌管為終點，該管含藥濃度為最低抑菌濃度MIC或最低殺菌濃度MBC）,兩值越低則表示越敏感。MIC與抑菌圈呈負相關(guān)，即抑菌環(huán)直徑越大，MIC越小。各藥敏紙片間距不少于24mm,距平板內(nèi)緣不小于15mm。藥物敏感實驗判定標準：抑菌圈直徑（毫米）：20以上極敏、15~20高敏、10~14中敏、10以下低敏。不同的菌株、不同的抗生素紙片需參照NCCLs的標準或者CLS1標準。多黏菌素抑菌圈；在9毫米以上為高敏，6-9毫米為低敏，無抑菌圈為不敏。.常用的免疫技術(shù)：醐免疫技術(shù)（EIA）、協(xié)同凝集試驗、免疫熒光技術(shù)（IF）、對流免疫電泳（CIE）、免疫印跡技術(shù)。.病原菌核酸的檢測：核酸雜交、PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)。PCR技術(shù)一是選擇DNA或RNA體外擴增技術(shù)，用標本提取DNA為擴增模板，選用一對特異寡核昔酸為引物，PCR一般要經(jīng)歷三十多次循環(huán)，經(jīng)不同溫度變性93-94C（作用Imin氫鍵斷裂形成單鏈DNA）、退火40-60℃（迅速冷卻30-60s引物與DNA模板結(jié)合，形成局部雙鏈）、延伸70-75P（在TaqDNA聚合酶作用下，以A、T、G、C四種脫氧核甘酸為原料，從引物5'-3'端延伸，合成與模板互補的DNA鏈。），擴增產(chǎn)物用溪乙咤染色的凝膠電泳。其具有特異、快速、靈敏、特異性強、操作簡便、能夠定量。引物是PCR特異性的決定因素，PCR反應(yīng)中TaqDNA聚合酶、引物加量過多，可引起非靶序列擴增。變性DNA常發(fā)生一些理化及生物學(xué)性質(zhì)的改變：1）溶液粘度降低。2）溶液旋光性發(fā)生改變。3）增色效應(yīng)。熱變性DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，此過程稱之為"退火"，Tm低25℃左右的溫度是復(fù)性的最佳條件。核酸實驗中經(jīng)常以迅速冷卻至4℃以下方式保持DNA的變性（單鏈）狀態(tài)?；蛐酒夹g(shù)（DNA芯片、DNA微陣列）一主要過程：DNA微陣列的制備、樣品的制備、靶分子和探針之間的雜交、雜交信號的檢測與分析。具有快速、敏感、高通量檢測平臺。核酸雜交（基因探針雜交技術(shù)）一是指單鏈RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA,根據(jù)堿基配對原則，借氫鍵相連而形成雜交分子的過程。雜交百分率＞70%（269%）為高度同源性，同源性在60%以上是一個種，同源性在60%—70%是同一種內(nèi)不同亞種，同源性在20%--60%同一屬內(nèi)不同菌種，同源性20%〈不同屬的菌種。AFLP的含義是一一擴增片段長度多態(tài)性。有很大功能的DNA指紋技術(shù)。一種是罕見切割酶，一種是常用切割酶。具有RFLP技術(shù)的可靠性和PCR技術(shù)的高效性。.細菌診斷流程有：雙岐索引法，表解法，數(shù)字編碼鑒定法。致病性島：由基因編碼決定的一團與致病性相關(guān)的基因組。.病原細菌確定原則：（郭霍Koch原則）1、從一種疾病病人中能有規(guī)律地發(fā)現(xiàn)一種細菌2、能夠分離這種細菌獲得純培養(yǎng)3、把這種細菌的培養(yǎng)物引入易感動物體內(nèi)，可以引起與病人類似的疾病4、在實驗感染引起的疾病中仍然能夠分離同一種細菌。.桿菌肽用于A（敏感）與非A群鏈球菌的鑒定。0/129抑菌試驗對弧菌有用而對氣單胞菌無用。.奧普托欣試驗：肺炎鏈球菌敏感。.雜交分：斑點，菌落原位，Southern（DNA）印跡，Northern（RNA,DNA）印跡。.L型細菌：細胞壁缺陷（形態(tài)多樣，染色不定，可過濾，滲透壓敏感，生化減弱等）培養(yǎng)應(yīng)高滲透壓（3-5%氯化鈉、20%蔗糖），瓊脂濃度0.5以下半固體培養(yǎng)基。染色多為G染陰性，形態(tài)不一（巨球形是特征），固定要用10g/L糅酸不能用火焰。增殖：以二分裂、出芽、巨形體釋放顆粒方式。一般菌落有：油煎蛋樣（L）,顆粒型（G）,絲狀菌落（F）,鑒定要點：染色易變多形性，生長在增菌液中微渾，顆粒樣沉淀或沿試管壁生長，返祖現(xiàn)象。致病特點：慢性和反復(fù)發(fā)作性感染，致病物質(zhì)是毒素。L型細菌在體內(nèi)體外都可形成。原生質(zhì)體與原生質(zhì)球都是細胞壁缺陷的細菌。.細菌的突變：基因突變（又稱點突變；有堿基對的置換、插入、或缺失、錯碼）、染色體畸變（易位、倒位、重復(fù)、缺失）。突變：自發(fā)突變、誘發(fā)突變。質(zhì)粒在細菌的自發(fā)突變中起重要作用。細菌質(zhì)粒在重組DNA技術(shù)中常用的載體。質(zhì)粒的分離提純使用酚處理，用乙醇沉淀。.噬菌體一是感染細菌、真菌、放線菌或螺旋體等微生物的病毒，具有病毒的基本特性，專性胞內(nèi)寄生，有嚴格的宿主特異性。由核酸和蛋白質(zhì)組成。大多數(shù)DNA噬菌體的DNA為線狀雙鏈（有尾噬菌體的核酸）；RNA噬菌體的RNA為線狀單鏈（無尾噬菌體的核酸為環(huán)狀單鏈DNA或線狀單鏈RNA）o對紫外線敏感10-15分鐘失去活性。噬菌體分毒性噬菌體、溫和噬菌體（溶原性噬菌體）；毒性噬菌體以復(fù)制方式增殖，過程吸附、穿入、生物合成、成熟與釋放，少脫殼。在液體培養(yǎng)基中使混濁菌液變澄清，在固體培養(yǎng)基上形成噬斑。溫和噬菌體--是噬菌體基因組整合于宿主菌染色體中，有溶原性周期、溶菌性周期。噬菌體可以根據(jù)不同細菌的表面受體來裂解目標菌--是判定某些種類病原體的重要依據(jù)。.肽聚糖的結(jié)構(gòu)由聚糖骨架，四肽側(cè)鏈和五肽交聯(lián)橋（G一無交聯(lián)橋）。磷壁酸為G+特有，分壁和膜兩種。外膜層由脂多糖，脂質(zhì)雙層，脂蛋白組成。細胞質(zhì)內(nèi)有核蛋白體（蛋白合成地），核質(zhì)（主要遺傳物質(zhì)）質(zhì)粒，胞質(zhì)顆粒，是細菌蛋白質(zhì)和酶類合成的重要場所。鞭毛是由細胞質(zhì)伸出的蛋白性絲狀物。性菌毛僅有1?10根，毒力和耐藥質(zhì)粒都能通過它轉(zhuǎn)移，有致病性。.免疫器官：骨髓、胸腺、脾、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾和黏膜免疫系統(tǒng)。免疫細胞：淋巴細胞、單核吞噬細胞、中性粒細胞、嗜酸嗜堿性粒細胞、肥大細胞、血小板。免疫分子：補體、免疫球蛋白、細胞因子中樞免疫器官：骨髓、胸腺、鳥類法氏囊。外周免疫器官：淋巴結(jié)、脾和粘膜相關(guān)淋巴組織特異性免疫：體液免疫、細胞免疫。體液免疫：（B淋巴細胞介導(dǎo)，CD4'Th輔助，Th2細胞能分泌細胞因子IL-4、IL-5、IL-6、IL-10）；效應(yīng)是抗體（Ab）；1、病毒中和抗體（不能直接滅活病毒，IgG、IgM、IgA）2、血凝抑制抗體（HLAb）3、補體結(jié)合抗體。IgG在體液中含量最多，分子量小是唯一能通過胎盤的抗體。IgM分子量大，是最早產(chǎn)生的抗體，中作早期診斷。IgA存在黏膜分泌液中，在局部可阻止病毒侵入，能抵抗蛋白酶的水解作用，具局部抗體。IgE可與肥大細胞膜上的Fc受體結(jié)合。補體C：存在血清中，不耐熱，可輔助特異性抗體介導(dǎo)的溶菌作用，是抗體發(fā)揮溶細胞作用的必要補充條件。由9種成份，11種蛋白組成。補體激活兩個途徑：傳統(tǒng)途徑（一）-一被Ag-Ab免疫復(fù)合物IC活化，順序Cl,C4、2C、3C、5C、6C、7C、8C、C9.旁路途徑（二）--被細胞的脂多糖激活。補體激活-一酶促級連反應(yīng)。細胞免疫（T淋巴細胞介導(dǎo)，效應(yīng)細胞：細胞毒性T細胞（CTL）、CDlThl細胞、CD8.毒性T細胞CTL）。Thl細胞誘導(dǎo)產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應(yīng)（DTH）.測特異性抗原最常用實驗：凝集試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗、免疫熒光試驗、膠體金免疫吸附試驗.細菌營養(yǎng)轉(zhuǎn)運的方式有：離子，透性醯，磷酸酶。營養(yǎng)物質(zhì)進入機體的方式：易化擴散、主動運轉(zhuǎn)（由透性能完成）、基團移位（糖類由磷酸酶磷酸化進入胞內(nèi)，不能再透出菌體）。.細菌生長繁殖的條件:充足的營養(yǎng)、適宜的溫度、合適的酸堿度、必須的氣體環(huán)境。細菌生長的溫度極限-7—90℃：嗜冷菌最適溫為10?20"C,嗜溫菌為20?40℃,嗜熱菌為50~60℃o適宜的酸堿度PH7.2—7.6。細菌生長繁殖分為四期：遲緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期.（腸道桿菌）細菌的四種生化反應(yīng)：呀跺（I）、甲基紅（M）、VP（V）、枸椽酸鹽利用（C）,合稱為IMViC。大腸桿菌呈++一，產(chǎn)氣桿菌呈一++。還需做糖發(fā)酵試驗，KIA產(chǎn)酸產(chǎn)氣，MIU+一一，有菌體（0）莢膜（K）鞭毛（H）三抗原。腸桿菌科分型多采用苯丙氨酸脫氨醒和葡萄糖酸鹽試驗。可疑菌分別接種克氏雙糖鐵（KIA）尿素靛基質(zhì)動力（MIU）來定屬。細菌代謝所需能量主要以生物氧化作用而來。細菌新陳代謝的產(chǎn)物:熱原質(zhì)、毒素與酶、色素、抗生素、細菌素。熱原質(zhì)除去的最好方法--蒸儲。內(nèi)毒素（G-脂質(zhì)A）、外毒素（G+產(chǎn)生的毒性蛋白質(zhì)產(chǎn)物，具有抗原性強、毒性強、作用特異性強、不耐熱、人工化學(xué)可脫毒性，0.4%甲醛脫毒后形成類毒素進行人工免疫）。據(jù)親和性及作用靶點分為:神經(jīng)毒素、細胞毒素、腸毒素。細菌的內(nèi)毒素一般由：脂質(zhì)A（主要成份），非特異性核心多糖，菌體特異性多糖。一般7?10天后機體產(chǎn)生特異性免疫。IgG和IgM能在血中直接中和病毒。熱原質(zhì)：脂多糖，多由G-產(chǎn)生，耐高溫，可引起發(fā)熱反應(yīng)，高壓蒸氣滅菌（⑵。C20分鐘）使其破壞。.細胞壁的作用：承受胞內(nèi)高滲壓、支持細胞膜、維持細菌形態(tài)；是鞭毛運動的支點。細胞壁的主要成份：肽聚糖（又稱黏肽、胞壁質(zhì)），是原核生物特有的成份，能破壞肽聚分子結(jié)構(gòu)或抑制其合成的物質(zhì)，都有抑菌和殺菌作用。G-菌細胞壁的主要成份：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（類脂A、核心多糖、特異性多糖），菌體脂多糖（LPS）能引起發(fā)熱故稱熱原質(zhì)，又稱為細菌的內(nèi)毒素。細胞膜的主要功能：物質(zhì)納泄、生物合成、呼吸作用、形成中介體。細胞質(zhì)中的異染顆粒主要成份：RNA、多偏磷酸鹽.有芽胞破傷風(fēng)菌需沸水煮3h才殺死。水中加入2%碳酸鈉能將沸點提到105'C又能防止金屬生銹。.紫外線波長265~266nm時殺菌力最強。日光燈波長約0.5即1。.濾菌器用于除菌的孔徑是0.22即1,另外以石棉板為濾板的金屬濾器稱Seitz濾器（蔡氏濾器）按濾孔大小分K：最大，澄清用，EK-S最小，可阻止大病毒通過EK：居中，除去一般細菌。玻璃濾菌器分G1?G6,G5,G6兩型能阻止細菌通過。.高壓滅菌指示物：嗜熱脂肪芽胞桿菌（ATCC7053）,紫外線殺菌指示物：枯草芽胞桿菌黑色變種（ATCC9372）。.細菌遺傳物質(zhì)主要在于染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子中。質(zhì)粒：不依賴染色體而復(fù)制，不相容性，轉(zhuǎn)移性，指令性，大多數(shù)質(zhì)粒在自然狀態(tài)下是一種閉合環(huán)狀雙鏈DNA。主要有耐藥質(zhì)粒，Col質(zhì)粒（編碼腸毒素）Vi質(zhì)粒（編碼細菌與致病性有關(guān)的蛋白）。轉(zhuǎn)位因子為存在于細菌染色體或質(zhì)粒上的一特異的核昔酸序列可在DNA中移動，主要有三類：插入順序（最小的轉(zhuǎn)位因子），轉(zhuǎn)座子，轉(zhuǎn)座噬菌體。質(zhì)粒載體具有特點：復(fù)制起點、抗菌素抗性基因、多種限制酶的單一切點、較高的拷貝數(shù).病毒的特性：1、只含一種核酸2、基因組復(fù)制3、缺乏完整的酶系統(tǒng)4、RNA病毒的RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成互補DNA（CDNA）?甘油（10%）或10%二甲基亞颯的血清作懸浮細胞的液體在液氮中保存細胞，在干冰溫度（-70℃）和液態(tài)氮溫度（T96C）下長期保存其感染性：將凍存在小管或安甑里的細胞以較慢的冷凍速率（1℃/分鐘）冷凍，直至一150℃,再將這些小管貯存在一150?一196℃的液氮中，解凍做法是：將封口的小管迅速放入37C的水中，直至所有的冰融化，然后打開管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)基。PH5-9穩(wěn)定；射線和紫外線、X線、r線能滅活病毒。病毒學(xué)上常用的細胞類型：原代細胞、二倍體細胞、傳代細胞。.超凈工作臺應(yīng)采用層流技術(shù)凈化空氣、選擇垂直氣流通風(fēng)方式。潔凈度可達百級，只保護樣品。.菌體蛋白電離后帶負電荷；而堿性染料電離時染料離子帶正電。29.染色程序及方法：制片一固定一媒染一染色一脫色一復(fù)染一水洗一干燥一鏡檢。革蘭染色法：初染（草酸銃結(jié)晶紫）、媒染（碘液）、脫色（95%酒精）、復(fù)染（番紅）?？顾崛旧ǎ?%石炭酸復(fù)紅、5%鹽酸酒精脫色、美蘭復(fù)染。芽胞染色：菌懸液一孔雀綠一水浴15-20分鐘一涂片f干燥f固定一水洗脫色一番紅或稀釋石炭酸復(fù)紅復(fù)染f水洗f晾干莢膜染色：（負染色法、墨水法）。負染色法：制片（蒸儲水+菌）—干燥（晾干）一染色（復(fù)紅）一水洗一干燥（晾干）一涂墨素。背景灰色、菌體紅色、莢膜無色透明鞭毛染色--鍍銀法：媒染A液一10%單寧酸10ml+5ml飽和硫酸鉀鋁水溶液+lml苯胺飽和水溶液+5%氯化鐵水溶液成墨色。銀染B液一5%硝酸銀+濃氨水（比重0.88）成薄霧狀。制片（蒸儲水+菌）一干燥（晾干）一染色（A液3—5分鐘）一水洗一干燥（晾干）一染色（B液稍加熱分30—60秒）一水洗~干燥（晾干）。菌體深褐色、鞭毛褐色。.病毒吸附蛋白（VAP）；血凝素（HAs）。病毒的復(fù)制周期：吸附、穿入、脫殼、生物合成及組裝、成熟和釋放.病毒突變株分：條件致死性突變株，空斑和宿主依賴性。遺傳型變異機制有突變，基因轉(zhuǎn)移，重組。突變：突變率由復(fù)制的準確度，DNA發(fā)生損傷的機會，及對損傷DNA修復(fù)程度來決定。.非特異性免疫：干擾素（IFN）、NK細胞。干擾素（IFN）一具有廣譜抗病毒作用，只能抑制病毒，即通過誘導(dǎo)細胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應(yīng)。.小淋巴細胞分為：T細胞、B細胞、K細胞。T細胞來自骨髓，在胸腺成熟。在人體血液中T細胞占淋巴細胞總數(shù)的60—70%,；在胸導(dǎo)管則占95%以上。B細胞第一個合成產(chǎn)物是u鏈。.堿基的置換：喋吟換口票吟，喀哇換喀咤為轉(zhuǎn)換，喋吟換喀咤為顛換。影響基因表達的因素有：調(diào)控部位，調(diào)節(jié)蛋白，效應(yīng)分子。.轉(zhuǎn)化：受體菌直接攝取供體菌提供的游離DNA片段，整合重組（與染色體重組）使受體菌的性狀發(fā)生變異。一般有鏈，嗜血，芽胞菌有此功能。.G+菌等電點pl=2?3,G—菌等電點pl=4?5。RNA主要存在于細胞質(zhì)中占細菌干重的10%,DNA存在于染色體和質(zhì)粒中。G+菌的感受態(tài)是由感受態(tài)因子（CF）的胞外信號誘導(dǎo)的。.轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為媒介，將供體菌的基因轉(zhuǎn)移到愛體菌內(nèi)而致受體菌基因改變，分普遍和局限。.接合：受體菌和供體菌直接接觸，供體菌通過性菌毛所帶的F質(zhì)?；蝾愃七z傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到受體菌。.溶源性轉(zhuǎn)換：是噬菌體的DNA與細菌染色體重組，使宿主遺傳結(jié)構(gòu)發(fā)生變異。.原生質(zhì)融合：兩種經(jīng)過處理失去細胞壁的原生體混合和可發(fā)生融合后的雙倍體可發(fā)生染色體間的重組。.基因重組可使基因再激活表現(xiàn)為：交叉復(fù)活和多重復(fù)活。.粘附素是細菌表面的蛋白質(zhì)有菌毛和非菌毛。進入宿主：黏附，定植，侵入，轉(zhuǎn)歸。毒力有侵襲力和毒素。.侵襲力：菌體表面結(jié)構(gòu)，菌毛，侵襲性酶（凝固酶，透明質(zhì)酸酶，鏈激酶，膠原酶等）。是指病原突破宿主機體的防御功能，并能在體內(nèi)定居、繁殖和擴散的能力。.細菌種的科學(xué)命名采用拉丁文種屬雙命名法，前一字為屬名，名詞，后一為種名，形容詞。目前國際上普遍采用伯杰分類系統(tǒng)，也有用CDC（USA）。目前以細菌細胞壁的結(jié)構(gòu)特點作最高一級分類依據(jù)將原核界分為薄，堅，軟，疵壁四門?？?，屬，種分類主要依靠生化特性和抗原結(jié)構(gòu)。.顯微鏡的分辯率為波長一半。熒光顯微鏡的光源為超高壓汞燈（50—200W）。.油浸物鏡的工作距離一般是0.2mm。普通光學(xué)顯微鏡不能觀察細胞和細菌的亞結(jié)構(gòu)。相差顯微鏡特殊裝置一一環(huán)狀光闌、相板，利用光干涉現(xiàn)象。適用于對活體細胞生活狀態(tài)下的生長、運動、增殖情況、及細微結(jié)構(gòu)的觀察。用綠色濾光片。.不能立刻接種的血應(yīng)用SPS（氯化鈉溶液）抗凝。懷疑細菌性心內(nèi)膜炎時血培養(yǎng)不少于三次。.腸桿菌科的強選擇（SS瓊脂）弱選擇（EMB,麥康凱）。.直接鏡檢2h報告，最后鑒定和藥敏一般不過3天，除血外，必須在24h內(nèi)預(yù)報.a溶血是草綠色，B溶血是透明環(huán)，Y溶血紅細胞不溶解，雙環(huán)。.細菌數(shù)量達106~107CFU/ml時培養(yǎng)肉湯才見混濁。.血培養(yǎng)中有105菌落形成單位（CFU）/ML時才能通過革蘭氏染色檢出細菌。.AMS系統(tǒng)是目前微生物鑒定中最常用的自動化儀器。.突變種純系動物：實驗動物正常染色體中某個基因發(fā)生了變異的具有各種遺傳缺陷的突變品系動物。.純***動物：無計劃隨意交配的動物。近交系動物：采用兄妹交配（或親子交配）繁殖20代以上的純品系動物。無菌動物：體表腸道內(nèi)無菌、體內(nèi)無抗體。悉生動物：給出無菌動物引入已知的5?17種正常腸道菌的動物。.小白鼠對肺鏈，破傷外毒素敏感，豚鼠對結(jié)核白喉易感，貓對金葡萄菌腸毒敏感。測定病原體的感染性最好選用無菌動物或悉生動物。.菌種保存：“凍干”保存一穩(wěn)定劑（脫脂乳、蔗糖）。凍干菌種只能使用一次，凍干菌種打開后需要以傳代保存形式保留工作菌種。凍干菌種在使用時須“復(fù)蘇”且須傳代才能恢復(fù)原生長特性。低溫保存：-20C或-80C+甘油作穩(wěn)定劑。菌種取出須置于干冰或預(yù)冷的鉛質(zhì)容器內(nèi)，用完立即放回不可菌種解凍。冷凍干燥保存法是最有效的方法，利用各種斜面和半固體加石蠟油是最常用和最簡便的方法，一般不含糖，不用液體。.在細菌生長到足夠量時加入抑制蛋白質(zhì)合成的抗生素，在細菌停止繁殖后質(zhì)粒還在復(fù)制，可以提高質(zhì)粒的收獲量。.糞便嘔吐物應(yīng)接種高鹽卵黃或高鹽甘露醇瓊脂，觸酶陽性，凝固酶陽性玻片法篩選，試管法確證。必須做苯嚶西林的敏感試驗。.真菌，霍亂，銅綠及糞堿需在室溫保存，而腦膜炎，淋球，初次分離的流感嗜血菌保存于37"C。每轉(zhuǎn)種三代要鑒定一次。.葡萄球菌：產(chǎn)生脂溶性色素，多數(shù)分解甘露醇產(chǎn)酸液化明膠和產(chǎn)生血漿凝固酶。蛋白抗原（A蛋白）種屬特異無型特異，多糖抗原（A,B,C）是半抗原，有型特異。是抵抗力最強的無芽胞菌。.布魯司菌：無鞭無芽G-呈散沙狀，S型有莢膜，專性需氧，抵抗力強，37°C,PH6.6-6.8,血液、血清、肝浸液可促進生長，48小時形成微小，無色透明光滑凸起菌落。6個種19個生物型，對人致病是羊、牛、豬種。血清凝集試驗（SAT）是常用診斷實驗，虎紅平板凝集試驗（RBPT）,補體結(jié)合試驗（CFT）、免疫熒光試驗（IFT）等。靜脈血3—5毫升。用肝浸液瓊脂培養(yǎng)基、蛋白陳、土豆浸液瓊脂等。動物分離一豚鼠。生化特征：分解尿素、產(chǎn)生硫化氫。診斷標準：血清試管凝集試驗（SAT）1：100++以上，補體結(jié)合試驗（CFT）：1；10++.萊姆病原：伯道疏螺旋體引起萊姆病，細胞結(jié)構(gòu)：原生質(zhì)柱、表層、外膜、鞭毛。微嗜氧G-,能自身合成類脂化合物、主要脂肪酸，并將噂吟堿結(jié)合到核酸中，但不能合成長鏈脂肪酸，發(fā)展酵代謝產(chǎn)物--乳酸。蟀傳播媒介，鼠主要宿主動物，標本在-20—4℃運送。標本制成懸液，暗視野顯微鏡20X10或40X10下檢查。病原分離：接種BSK培養(yǎng)基33℃培養(yǎng)。用兔抗B31特異性多克隆抗體進行間接免疫熒光抗體試驗（IFA）,或ELISA、WB--最終確診方法。.鉤端螺旋體：原核細胞型微生物，雙股DNA。需氧或微需氧，是致病性螺旋體中唯一能人工培養(yǎng)的。其中鼠類和豬為主要的傳染源和儲存宿主，通過人的皮膚黏膜侵入。常用柯夫培養(yǎng)基或EMJH培養(yǎng)基，需加入10%兔血清或牛血清，培養(yǎng)液透明有輕度乳光，搖動時有云霧狀混濁。G-Fontana鍍銀染色成棕色。對酸堿敏感，最適是PH7.2?7.5,低于6.8,高于7.7生長不良，最適溫28?30℃,12h分裂一次。電鏡下基要本結(jié)構(gòu)：柱形原生質(zhì)體、內(nèi)鞭毛、外膜標本：血液、腦脊液在發(fā)病后10天內(nèi)，出現(xiàn)發(fā)熱但未用藥前，不能即時送檢，血液用不含枸椽酸鈉抗凝5-20'C保存，1周內(nèi)接種。2周取尿液則用1%牛血清白蛋白保存，用磷酸鹽緩沖液稀釋取50微升接種到5毫升培養(yǎng)基中每個稀釋度2管，每管中先加入30微克新霉素濾紙片或每毫升培養(yǎng)基加5-氨尿喘咤200-400微克。暗視野顯微鏡檢查每周1次連5周，陰則每月2次連4月。病原鑒定：血清群用顯微凝集試驗（MAT）,血清型用交叉凝集吸收試驗，分子生物學(xué)技術(shù)。69.致病性鏈球菌：沉淀生長（肺鏈為混濁），在含腹水的培養(yǎng)物上生長良好，溶血株呈絮狀或顆粒狀生長，不溶血株呈均勻混濁生長。（一）化膿性鏈球菌：標本1天內(nèi)送，不超過2天。THB增菌肉湯、5%脫纖維羊血的胰酶消化大豆瓊脂培養(yǎng)基，血液和腦脊液應(yīng)先增菌后接種平板，膿液、咽拭子直接種于血平板。A群鏈對桿菌肽敏感青霉素G為首選，抑環(huán)＞10cm敏感。（90%對人致?。〣群鏈CAMP試驗陽性（鑒定指標35℃卵育），馬尿酸鈉水解試驗陽性D群鏈七葉甘水解試驗變黑色為陽性，6.5%氯化鈉生長試驗（黃色）快速檢測：酶標免疫測定法、PCR（A群鏈致熱外毒素A,B,C基團speA,speB,speC各溶血素0基團slo）o抗溶血素0抗體--溶血法、膠乳凝集法。（二）肺炎鏈球菌：37.5℃pH7.4—7.6初次C02卵育，在含3%?5%的兔血清中生長良，血平板上草綠色a溶血環(huán)。如G+具有矛頭狀雙球菌可初步診斷。培養(yǎng)時間過長會自溶管底澄清，以奧普托欣試驗、分解菊糖，膽汁溶菌陽性區(qū)別于甲型溶血性鏈球菌。主要抗原有：蛋白質(zhì)抗原、多糖抗原、核蛋白抗原。膽汁溶菌試驗一0.5ml生理鹽水細胞懸液制成相當(dāng)于0.5麥氏單位的密度標準。取細胞懸液0.25ml+0.25nli2%的脫氧膽酸35—37℃培養(yǎng)2小時，管液清澈或濁度消失為陽性。氨基糖昔類合用，B溶鏈致病性最強，a溶鏈為條件致病菌。幾乎所有的肺鏈對Optochin敏感。（三）豬鏈球菌：人感染致病：腦膜炎、心內(nèi)膜炎、敗血癥、中毒性休克。35個血清型。2型致病其屬于R群，屬特異基團tuf、種特異基團16SrRNA.腸球菌屬：能在高鹽（6.5%NaCl）高堿（pH9.6）40%膽汁培養(yǎng)基上和10?45℃生長，是G+菌中僅次于葡萄球菌的重要院內(nèi)感染病菌。臨床上分離最高的是糞腸球菌，可分慶霉素高耐藥和低耐藥，一般用內(nèi)酰胺類和氨基糖首類聯(lián)合。.腦膜炎奈瑟菌：腦液中位于中性細胞內(nèi)，大多能分解葡萄糖、麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，具有氧化酶和觸酶。能產(chǎn)生自溶菌不宜冰箱應(yīng)立即保溫送檢，冬末春初為流行高峰，青霉素G為首選。依據(jù)莢膜分13個血清型，主要是ABC三個血清型及用35、Y。通常采3管腦脊液（化學(xué)、微生物、細胞學(xué)）含添加劑的巧克力平板（CAP）和血瓊脂平板（BAP）,如不能立即接種，，則接種至預(yù)熱35C的轉(zhuǎn)運一分離（TI）培養(yǎng)基中保溫通氣，可保存7天，血液采集后1分鐘內(nèi)注入肉湯中。鏡檢：腦脊液2000r/min離心20分鐘，沉淀物鏡檢腦膜炎雙球菌常在多核白細胞內(nèi)或細胞外。病原鑒定：Kovac氧化酶實驗10秒內(nèi)呈紫色陽性反應(yīng)?？焖贆z測：乳膠凝集試驗測抗原。上清液可一20度凍存長時間。.淋球奈瑟菌：G-人類是唯一天然宿主和傳染源。不耐干燥，35—36℃,2.5—5%C02生長，最適PH7.5,對糖類生化最低只能發(fā)酵葡萄糖，主要有菌毛蛋白，脂多糖，外膜蛋白抗原。細菌培養(yǎng)是目前世衛(wèi)推薦的唯一方法，用培養(yǎng)法查女病人宮頸口表面分泌物。培養(yǎng)基中應(yīng)含萬古霉素、多粘菌素B。標本接種在巧克力血瓊脂平板或T-M培養(yǎng)基。急性期淋病菌常在白細胞內(nèi)，慢性期淋病菌常在白細胞外，在中性粒細胞內(nèi)有G-性雙球菌具有診斷價值。73.梅毒病原：菌體形似彈簧，運動活潑，兩端尖直，有細胞壁和膜，原生質(zhì)圓柱體且有3-4根周漿鞭毛，G-抵抗力極弱，對青霉素、四環(huán)素、紅霉素、碑劑敏感。標本：I期梅毒取下疳滲出液（20分鐘內(nèi)查）；H梅毒取梅毒疹滲出液或局部淋巴結(jié)抽出液；先天性梅毒取臍血；神經(jīng)梅毒取腦脊液。鏡檢：新鮮標本加蓋片暗視野顯微鏡下檢查，漿液不能含有紅細胞、微生物、組織碎片。熒光標記、ELISA普光下查，鍍銀染色螺旋體染成棕褐色光鏡下查。病原分離：人工培養(yǎng)基上不易生長，接種兔睪丸或眼前房內(nèi)繁殖，并能保持毒力。34-35℃,分裂為30-33小時?？贵w檢測：產(chǎn)生特異性抗體、反應(yīng)素抗體（表面脂質(zhì)引起），有非密螺和密螺抗原試驗。初篩試驗和療效觀察-一非密螺抗原試驗，正常牛心肌心脂質(zhì)為抗原測患者血清中反應(yīng)素，判斷是否復(fù)發(fā)及再感染。最常用VDRE、RPR試驗。VDRE以膽固醇為載體。玻片凝集可定性和半定量，低倍觀察。RPR用未處理活性炭顆粒吸附VDRE抗原。專用紙片圈內(nèi)（18mm）可定性和半定量。密螺抗原試驗（證實試驗）--FTA-ABS作為診斷梅毒“金標準”試驗。它是間接熒光抗體檢測方法，.腸產(chǎn)毒型（ETEC）：作用小腸，霍亂樣腸毒腹瀉，是5歲以下嬰幼兒和旅游者腹瀉的重要病原菌；腸毒素有耐熱和不耐熱，LT-1是引起人類主要的致病物質(zhì)，對熱不穩(wěn)定，65℃30分鐘被破壞，A亞單位是毒素的活動部位。耐熱腸毒素（ST）是通過激活腸黏膜細胞上的鳥甘環(huán)化酶，使胞內(nèi)CGMP量增多而導(dǎo)致腹瀉。腸致病型（EPEC）：作用小腸，水樣腹瀉，是嬰兒腹瀉主要病原菌。腸侵襲性型（EIEC）：作用大腸，志賀樣腹瀉，很像菌痢，發(fā)熱腹痛膿血便及里急后重。腸出血型（EHEC）：其中0157：H7可引起出血性腹瀉和溶血性尿毒癥，是4歲以下兒童急性腎功能衰的主要病原，6、7、8三月最高，北美多見。毒力因子：志賀樣毒素、溶血素、LEE毒力島、Vero毒素。腸集聚型（EAggEC）：嬰兒和旅游者腹瀉持續(xù)性水樣腹瀉。76.志賀氏菌分：痢疾（A群），福氏（B群），鮑氏（C群）（半透明、光滑型菌落），宋內(nèi)（D群）（扁平粗糙型菌落）四群，我國以福氏和宋內(nèi)常見，無莢無芽無鞭，KIA：K/A,產(chǎn)氣+/一，H2S-,MIU-+/一一，最后可用診斷血清作群型鑒定群血清型葡萄糖乳糖甘露醇鳥氨酸脫竣酶痢疾志賀菌A1-10+一--福氏B1-6十一十-鮑氏C1-18+-+-宋內(nèi)I)1+一++只有一個血清型，I相和n相加熱60℃10分鐘殺死，有強烈的內(nèi)毒素，作用于腸黏膜，使其通透性增高。糞-口傳播，只局限于腸道，一般不進侵入血，發(fā)熱、腹痛、水樣腹瀉，后轉(zhuǎn)為膿血黏液便，伴有里急后重、下腹部疼痛。急性中毒性痢疾多見小兒。糞便不能即時送檢，需保存在30%甘油緩沖鹽水中。志賀菌表達黏附、穿透上皮細胞、胞內(nèi)繁殖、及擴散等活性的基因存在于大質(zhì)粒上。測志賀菌的侵襲力用Sereny試驗，接種于豚鼠眼結(jié)膜囊內(nèi)?？焖僭\斷：1、免疫染色法2、免疫熒光菌法3、協(xié)同凝集試驗4、膠乳凝集試驗5、分子生物學(xué)方法.傷寒與副傷寒菌：無芽無莢有鞭毛（除雞沙門）多數(shù)有菌毛，112s可陽性，傷寒菌產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，菌體抗原有58種，鞭毛抗原有兩相即特異性和共同，表面抗原有Vi,M,5三種,變異有:S-R,H-0,v-w,相位。傷寒沙門菌、甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌、希氏沙門菌。所致疾病4類型：（1）、腸熱癥：第一次菌血癥，發(fā)熱、不適、全身痛，與菌的感染劑量有關(guān)，通常潛伏期為2周，第二次菌血癥，高熱7-10天，緩脈、肝脾腫大，皮膚出現(xiàn)玫瑰疹，外周白細胞明顯下降，嚴重者有出血或腸穿孔等并發(fā)癥。（2）、胃腸炎（食物中毒）：由攝入大量＞108被鼠傷寒沙門菌（常引起食物中毒）、豬霍亂沙門菌、腸炎沙門菌污染的食物引起。致病機制：細菌釋放的內(nèi)毒素。發(fā)熱、惡寒、嘔吐、腹痛、水樣腹瀉。（3）、敗血癥：4、無癥狀帶菌者：標本：第『2周采血，接種于室溫＞20℃平衡血培養(yǎng)瓶，不能超過2小時送樣，不能即時送樣放在室溫，切勿放冰箱；第3-4周取糞便；第3周起還可取尿液；整病程均可取骨髓液。病原分離：血液和骨髓須按1：10加入血液需氧培養(yǎng)瓶或膽鹽葡萄糖肉湯增菌后接種于血瓊脂平板或營養(yǎng)瓊脂平板，SS一雙糖或三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基。糞便接種麥康凱（MaC）/DHL、SS平板上，或SF增菌。病原鑒定：凡符合克氏雙糖鐵（KIA）斜面或三糖鐵（TSI）：不發(fā)酵乳糖、蔗糖，發(fā)酵葡萄糖、麥芽糖甘露醇，產(chǎn)氣+/-，H2S+,口引噪尿素V-P均一，硝酸鹽還原陽性，多價血清陽性的為沙門屬。尿素酶試驗與變形桿菌區(qū)別。胞內(nèi)寄生菌，臨床上主要為不明原因持續(xù)發(fā)熱。尿素半固體（MIU）.A-F群沙門菌（0）多價血清作玻片凝集，陽性則選用02、04、07、09因子定群。血清學(xué)診斷：肥達試驗，一般傷寒沙門菌0凝集效價＞1：80、H＞1：160,副傷寒H＞1：160具有診斷意義。新一代疫苗：傷寒Vi莢膜多糖疫苗。.變形桿菌屬：普通，奇異，產(chǎn)黏。普羅威登斯屬有：產(chǎn)堿，斯氏，雷極，摩根菌只有摩氏摩根菌。有明顯多形性，呈球狀或絲狀，生長于10?439，在固體培養(yǎng)基上普通和奇異呈遷徙生長現(xiàn)象，三屬氧化酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶陽性G-桿菌，加入1%石炭酸或苯乙醇使終濃度為lg/L和0.25%可抑制變形菌遷徒樣生長。能迅速分解尿素以區(qū)別沙門菌，外斐試驗輔助診斷立克次體.耶爾森氏菌（鼠疫）：有7種，鼠疫，假結(jié)核，小腸與致病有關(guān)。帶有3種質(zhì)粒，主要的致病決定基因由質(zhì)粒和染色體上的毒力島編碼。鼠疫耶爾森：有莢無芽無鞭，兩極濃染，28?30℃,pH6.9?7.1,液體中培養(yǎng)好，底部可有鐘乳石樣，常用現(xiàn)溶血的胰酶消化肉瓊脂（赫氏瓊脂）加入亞硫酸鈉或脫纖維血有刺激生長，用腐敗材料分離，培養(yǎng)基中加入甲紫、膽酸鈉抑制雜菌，龍膽紫亞硫酸鈉為其選擇性培養(yǎng)基，3%氯化鈉上生長呈多形性。小腸耶爾森：無動無芽無莢G-,25℃有動力，有周鞭毛，最適溫20?28℃,VP試驗25℃陽性，37℃陰性，KIA只利用葡萄糖，MIU22C動力陽性37℃陰性。假結(jié)核：25℃有周鞭毛有動力37C無動力，最適溫30℃,pH6-8o血清檢測的抗體是Fl經(jīng)典鼠疫“四步檢驗”：顯微鏡檢查（美蘭染色）、培養(yǎng)、鼠疫噬菌體裂解試驗（早期為暗黃的灰色表面粗糙的顆粒樣突起，在血培養(yǎng)上有花邊狀薄而透明不整齊的邊緣菌落。48小時為灰白色中央突起菌落，）、動物實驗（小鼠、豚鼠）?？焖贆z測；PCR（高度特異性基因：fra、pla、inu、hms）、免疫檢測（Fl抗原）所有疑似鼠疫病人都需采取血標本，疑似腺鼠疫病人取腫大淋巴結(jié)穿剌液；肺鼠疫病人取咳痰、咽拭子標本。.枸椽酸桿菌：有弗勞地，異型，無丙二酸鹽。只有弗勞地靛基質(zhì)一，H2S+,僅異型的丙二酸鹽+,B-半乳糖甘酶，賴氨酸脫陵酶，枸椽酸利用三試驗：枸檬酸菌+一+,沙門一/+++,愛德華一+一。.膠體金標記技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域：免疫層析技術(shù)。其優(yōu)點-一標記物非常穩(wěn)定。.細菌明膠液化試驗原理--某些細菌產(chǎn)生胞外酶-明膠酶，能使明膠分解為氨基酸而液化。氧化酶試驗一用于腸桿菌科與假單胞菌的鑒別。膽汁溶菌試驗一用于肺炎鏈球菌與甲型鏈球菌鑒別0NPG試驗一遲緩分解乳糖的細菌試驗為陽性。.沙雷菌：最適溫10?36℃,4%氯化鈉下可長，產(chǎn)生靈紅霉素（非水溶）和此撥酸（水溶），關(guān)鍵生化是DNA+和葡萄糖酸鹽+。.霍亂菌：呈弧狀或逗點狀，米淚樣糞便作懸滴觀察，細菌呈穿梭樣或流星狀運動;糞便涂片鏡檢見排列如“魚群”狀G一菌，耐堿不耐酸，可繁殖pH6.0-9.2。最適宜生長pH7.2-7.4.血清分型可分為AB的小川型，AC的稻葉型，ABC的彥島型病原分離：水樣便直接接種在硫代硫酸鹽一檸檬酸鹽一膽鹽一蔗糖平板（TCBS）上37℃形成較大黃菌落，在含亞礴酸鉀或慶大霉素平板選擇性平板上呈灰褐色。食品及水樣常用堿性蛋白陳水增菌培養(yǎng)后再接種，鈉離子可剌激生長，但在＞8%NaACI中不生長。常用的保存或運送及增菌用堿性蛋白陳水，文-臘二氏，卡-布。病原鑒定：01群無芽胞，無莢膜，單一鞭毛；0139群菌體周圍有一層比較薄的莢膜。測定耐熱的特異性0抗原，用玻片凝集或ELISA鑒定，血清效價1：40-1：50o不耐熱的非特異性H抗原，有兩個環(huán)狀染色體，即染色體1、染色體2。深入鑒定：流行株與非流行株依靠噬菌體--生物分型法。噬菌體（VP1-VP5）將埃爾托型霍亂弧菌分成32個噬菌體型。根據(jù)溶原性、溶原噬菌體的敏感性、山梨醇發(fā)酵試驗、溶血試驗，將埃爾托型霍亂弧菌分成a-1共12個生物型。常見的流行株為噬菌體1-3型，生物型a-d型，常見的有：la、lb、Id。產(chǎn)毒基因鑒定：用PCR檢測ct基因，流行株常帶有霍亂腸毒素。免疫檢測：霍亂為腸為非侵襲性細菌，主要剌激局部黏膜產(chǎn)生分泌性AgA抗體，同時大量毒素及細菌脂多糖體的產(chǎn)生使機體產(chǎn)生抗毒和抗菌抗體?；謴?fù)期帶菌者是指臨床癥狀消失后3個月內(nèi)帶菌者，恢復(fù)期帶菌的時間一般不超過2周，健康帶菌者的排菌時間一般不超過7天。.副溶血弧菌：嗜鹽性弧菌（與霍亂顯著區(qū)別），是我國沿海地區(qū)最常見的食物中毒病原菌，兩極濃染，NaCl最適35g/L,無鹽不長，pH7.0?9.5,最適pH7.7.不耐熱，不耐酸，在TCBS上不發(fā)酵蔗糖菌落綠色，＞80g/L鹽內(nèi)不長，神奈川現(xiàn)象（B溶血），KP’是致病株能使人或兔紅細胞發(fā)生溶血對馬紅細胞不溶血為陽性。.氣單胞菌最適生長溫度30°C,但在。?45℃皆可生長。.彎曲菌屬是一類微需氧菌，不分解糖，氧化酶+,菌體彎曲逞豆點狀，S狀或螺旋狀有動力G—菌，5種5亞種，對人致病的主要是空腸彎曲菌（人類腹瀉最常見之一，43℃生長，25℃不生長）.幽門螺桿菌（HP）：常用布氏培養(yǎng)基或腦心浸液血瓊脂加入5?10%羊血和馬血，在（85%N、10%C02、5%02）條件下，37℃3—7天，長成針尖狀的半透明菌落，加入萬古霉素、TMP、兩性霉素B等組成抑菌劑防止雜菌生長。與十二脂腸潰瘍、胃癌、胃淋巴瘤發(fā)病有關(guān)。傳染源主要是人，糞-口途徑。標本：胃黏膜活檢組織；病原鑒定：生物特性是具有大量高活性的尿素酶，迅速分解尿素，氧化酶+、觸酶+,具有堿性磷酸酶、r-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性，硝酸鹽還原+,可生長于5%甘氨酸、0.04%氯化三苯四氮P坐培養(yǎng)基中，三糖鐵中不產(chǎn)生硫化氫，微需氧5?8%,37℃生長，25℃和42℃均不生長的G-菌，初次分離要3?4天?？焖贆z測：尿素呼吸試驗--簡單快捷，可以特異地診斷HP現(xiàn)癥感染，敏感性高。主要采用13C,14C（放射性同位素）標記尿素，13C用于兒童和孕婦。.《伯杰系統(tǒng)細菌學(xué)分類》的標準：G染特性，形態(tài)，鞭毛，芽胞，莢膜，代謝產(chǎn)物。.有芽胞的厭氧菌：只有梭菌屬包括83個種。厭氧菌每克糞中高達1012個，標本絕不能被正常菌污染，應(yīng)盡量避免接觸空氣。最理想的標本是組織，送到實驗室后20-30min內(nèi)處理完不超過2h。應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基，應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸l(wèi)Omin以驅(qū)氧并立即冷卻。每份標本至少接種三個血平板，置于有氧，無氧，5%~10%C02環(huán)境中培養(yǎng)。厭氧手套箱培養(yǎng)法是迄今最佳厭氧培養(yǎng)儀器之一。.厭氧狀態(tài)的指示劑有：美藍和刃天青，無氧時白色，有氧時美藍藍色，刃天青粉紅色。紫外線下出現(xiàn)熒光也是厭氧菌參考之一，卡那霉素用于梭桿菌與類桿菌的區(qū)分，甲硝喋用于厭氧菌和非厭氧菌的區(qū)別。氣液相色譜已成為鑒定厭氧菌及其分類比較可靠的方法。.破傷風(fēng)桿菌：鼓槌狀，早期培養(yǎng)G+,48h后特別是芽胞形成后G-,的0和H抗原，主要癥狀為骨骼肌痙攣，不發(fā)酵糖類，能液化明膠產(chǎn)H2S。產(chǎn)生兩種外毒素：破傷風(fēng)溶血素、破傷風(fēng)痙攣毒素.產(chǎn)氣莢膜梭菌：G+,20?50C均能生長，最適為45C,雙層溶血，可分解糖類產(chǎn)酸產(chǎn)氣，出現(xiàn)洶涌發(fā)酵現(xiàn)象，分5型，主要是A型，外毒素以A毒素為主，本質(zhì)是卵磷脂酶（a毒素），在蛋黃瓊脂平板上菌落周圍出現(xiàn)乳白色渾濁圈。所致疾病為氣性壞疽，有捻發(fā)感，青霉素為首選，萬古為次選。.肉毒梭菌：G+,芽胞膠囊于次極端呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀，嚴格厭氧，8型，以A,B多見，毒素不耐熱，Imin煮沸即死。.無芽胞厭氧菌是一大類正常菌群，引起感染是內(nèi)源性感染。.白喉棒狀桿菌：為放線菌，G+,無莢無芽無鞭無毛，奈瑟（Neisser）染色成黃褐色，一端或兩端染成藍色或深藍色顆粒即異染顆粒，阿培特（Albert）染色菌體呈藍綠色,異染顆粒成藍黑色。分離培養(yǎng)：棉拭子取咽喉部、鼻腔、皮膚病變部位，血平板，呂氏血清斜面（生長迅速，乳白色，S型，形態(tài)典型），哥倫比亞血培養(yǎng)基及亞硫酸鉀血瓊脂（48小時以上，菌落黑色，篩選鑒別）。白喉毒素是一種毒性強、抗原性強的蛋白質(zhì),B-棒狀桿菌噬菌體毒素基因（tox+）編碼的蛋白質(zhì)，PCR擴增tox+基因輔助診斷不能確診。免疫沉淀試驗（EleK平板試驗）檢測產(chǎn)生白喉外毒素，是診斷白喉的關(guān)鍵試驗。細菌一般不侵入血，但外毒素可入血引起毒血癥，不能立即送檢時應(yīng)浸于無菌生理鹽水或15%甘油鹽水中。出現(xiàn)各種心肌炎，軟腭麻痹是白喉晚期死亡的主要原因。（白喉類毒素、百日咳菌苗、破傷風(fēng)類毒素的混合疫苗DPT）.百日咳鮑特菌：專性需氧，常用包-姜培養(yǎng)基（含青霉素G）細小S銀灰色不透明珍珠狀菌落，在加血培養(yǎng)基上,周圍有放毛狀狹窄溶血環(huán)，液體培養(yǎng)基中混濁生長。菌落常S-R相變異，I相S型，II、III相過渡型，IV相R型。有百日咳毒素，絲狀血細胞凝聚素和腺噤玲環(huán)化毒素。細菌不進入血流。臨床分為3個期：1、卡他期2、痙咳期3、恢復(fù)期。依據(jù)菌落性狀及凝集試驗確診?？乖蠵T、FHA,主要用ELISA方法。可獲持久免疫力咳碟法：包-姜培養(yǎng)基（含青霉素G）置10cm使飛沫直射于培養(yǎng)基上，37℃2-3天鼻咽拭子法：如不能及時接種可放入0.3毫升PH7.2-7.4的1%蛋白陳生理鹽水中2小時內(nèi)檢.TBE-Tris硼酸緩沖液，長時間電泳選用。MIC-最小抑菌濃度.決定細菌的形態(tài)因素：培養(yǎng)基的成份、PH、培養(yǎng)時間、溫度。直接觀察細菌的超微結(jié)構(gòu)：超薄切片技術(shù)、電子顯微鏡。.芽胞：在80℃水中迅速死亡，在100℃水中能耐受2小時以上，在70%乙醇中能存活20年。高壓蒸氣滅菌殺死細菌牙芽胞最有效。莢膜的重要功能：抗吞噬。是構(gòu)成細菌毒力的因素之一。衛(wèi)生毒理學(xué).外源化學(xué)物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)運：吸收、分布、代謝、排泄四階段。化學(xué)毒物在體內(nèi)的代謝分為兩相：I反應(yīng)--氧化、還原、水解；II反應(yīng)--與體內(nèi)源性物質(zhì)結(jié)合亞慢性毒性試驗?zāi)康模鹤畲鬅o作用劑量、最大耐受劑量估測閾劑量。（選用兩種種屬及嚙齒類、非嚙齒類，初斷乳動物）慢性毒性試驗?zāi)康模鹤钚∮凶饔脛┝?、閾劑量、最大未觀察到有害作用劑量（選用兩種種屬及嚙齒類、非嚙齒類，初斷乳動物）危害性評價組成：認定、描述、接觸評定、特征分析毒理學(xué)試驗項目：第一階段：急性毒性試驗。第二階段：遺傳毒性試驗。第三階段：亞慢性毒性試驗。第四階段：慢性毒性試驗和致癌試驗GB19489-2004《實驗室生物安全通用要求》分級：危害等級I、II、HI、IV。生物安全防護水平（BSLT、2,3,4）o生物安全柜一級：可保護工作人員和環(huán)境。生物安全柜二級：分Al、A2、Bl、B2可保護工作人員、環(huán)境、樣品。生物安全柜三級：.普通光學(xué)顯微鏡：最高分辨率0.2um,不能觀察細菌的亞結(jié)構(gòu).暗視野顯微鏡：分辨率0.02-0.04um,載玻片厚度1.0mm、蓋玻片0.17mm.熒光顯微鏡：5.滴定管精度為0.2—0.1ml,微量滴定管精度為0.005ml。微量吸管5—lOOOul。培養(yǎng)皿分：5、7.5,9、10cm蛋白質(zhì)、核酸提取及相關(guān)設(shè)備一、蛋白質(zhì)分離純化一一實驗室常用鹽析法(硫酸鍍)O核酸純化一一酚、氯仿抽提制備細胞外膜蛋白一一超聲波細胞粉碎機。大多數(shù)限制內(nèi)切酶使用溫度37℃,保存溫度是-20℃。二、層析凝膠過濾法(分子篩層析法)--主要用于蛋白或核酸分離。介質(zhì)：葡聚糖。過濾中先洗脫的是大分子物質(zhì)，后小分子物質(zhì)。原理：纖維素或凝膠介質(zhì)帶電荷不同。三、檢測儀1、分光光度計及檢測物質(zhì)分光光度計波長nm比色皿檢測細菌濃度可見分光光度計600玻璃測定顏色可見分光光度計450檢測蛋白紫外分光光度計280石英檢測核酸紫外分光光度計260石英2、紫外透射儀：暗室紫外線下看DNA條帶。3、測序儀：蛋白測序儀--測定氨基酸排列順序DNA測序儀-一測核首酸排列順序。物質(zhì)是；質(zhì)粒、噬菌體、PCR產(chǎn)物4、擴增儀：能做PCR稱DNA擴增數(shù)5、酶標儀：二、電泳類：用于原理聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)蛋白質(zhì)、核酸分離用垂直電泳槽，凝膠介質(zhì)形成立體多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，過硫酸鏤起催化聚合作用，Tris-甘氨酸緩沖液。分離DNA片段最佳范圍5-500bp十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)蛋白分離聚丙烯酰胺濃度越大，線性分離范圍越小。十二烷基硫酸鈉作用是解離蛋白，常用蛋白染料一考馬斯亮藍，甘氨酸一緩沖瓊脂免疫電泳蛋白分離和鑒定脈沖電場凝膠電泳（PFGE）核酸分離用瓊脂糖作介質(zhì)。為正交的交變脈沖電場；條帶靠近負極為大片段DNA,靠近正極為小片段DNA。DNA染色用溟化乙錠（EB）或硝酸銀。（分析大分子物質(zhì)）瓊脂糖凝膠電泳核酸分離與純化1%瓊脂糖作支持介質(zhì)，有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。用水平電泳槽，充分分離DNA片段最佳范圍200bp-50kb等電聚焦電泳（IFE）蛋白質(zhì)分離以兩性電解質(zhì)制造凝膠有不同PH,使帶不同電荷的多肽在電泳條件下于等電點停留。用聚丙烯酰胺制備等電聚焦電泳凝膠。濃縮效應(yīng)、分辨率高、重復(fù)性好、用時少對流免疫電泳（CIE）測定抗體或抗原緩沖液是PH8.6巴比妥液，使抗原抗體均帶負電，抗原向正泳，抗體電滲作用向負泳?；鸺娪緶y抗原量交叉定量免疫電泳醋酸纖維膜電泳免疫球蛋白鑒定變性聚丙烯酰胺凝膠單鏈（DNA或RNA）片段分離與純化四、快速斑點免疫金滲濾法（滴金免疫法）：屬于常用的膠體金技術(shù)。方法是--以硝酸纖維素膜（NC膜）為載體，將試劑和標本滴加在膜上，通過滲濾而逐步反應(yīng)，全程可于數(shù)分鐘內(nèi)完成，陽性在膜上呈紅色斑點?；驹硎情g接法或夾心法免疫膠體金技術(shù)用于檢測：抗原、半抗原、抗體ATCC是指美國典型培養(yǎng)物保藏中心。MPS--單核-吞噬細胞系統(tǒng)，又稱巨噬細胞系統(tǒng)。玻片凝集反應(yīng)--2-3分鐘看結(jié)果；試管凝集反應(yīng)--18—24小時看結(jié)果；沉淀反應(yīng)一72小時看結(jié)果；補體結(jié)合試驗（CFT）-30分鐘看結(jié)果過濾式微生物采樣器根據(jù)過濾材料不同有：薄膜過濾器、玻璃纖維過濾器、凝膠過濾器、谷氨酸堿過濾器。病毒的分子生物學(xué)鑒定：病毒核酸和蛋白質(zhì)測定。蛋白質(zhì)使用一免疫測定技術(shù)、電泳技術(shù)、質(zhì)譜技術(shù)；核酸使用一探針技術(shù)、雜交技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)構(gòu)建基因組文庫，初始DNA長度須在90kb以上。純化的mRNA在70%的乙醇中可保存1年以上。絕大多數(shù)II類限制酶識別長度為4或6個核甘酸。為獲得條帶清晰的DNA電流圖譜DNA用量為0.5—1.Oug.在酶切圖譜制作過程中，分離鑒定和純化DNA片段的標準方法--聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）、瓊脂糖凝膠電泳。普通水平電泳制備染色體DNA酶切圖譜時，DNA電泳遷移率的對數(shù)與凝膠濃度成線性關(guān)系，分離＜0.5kbDNA片段所需膠濃度是1.2%7.5%,分離＞10kbDNA片段所需膠濃度是0.3%-0.7%,在低電壓時，線狀DNA片段的遷移率與所加電壓成正比，電壓增加，瓊脂糖凝膠的有效分離范圍將縮小。要使＞2kbDNA片段的分辯率達到最大，所加電壓不得超過5V/cm?細菌的培養(yǎng)技術(shù)一、培養(yǎng)基：1、營養(yǎng)物質(zhì)：蛋白陳、肉浸汁和牛肉膏、糖醇類、血液、動物血清與雞蛋、無機鹽類、生長因子。二、水分。三、凝固物：瓊脂、明膠、卵蛋白及血清瓊脂：成份為多糖，賦形物。固培養(yǎng)基2—3%,半固培養(yǎng)基0.2—0.5%明膠:主含蛋白質(zhì)，24℃以上溶解,20℃以下凝固四、抑制劑：五、指示劑：酚紅、漠甲酚紫、中性紅、甲基紅、漠香草酚藍、中國藍、酸性復(fù)紅等酸堿指示劑；美藍氧化還原指示劑。一般培養(yǎng)基高壓121C,1.05kg30分鐘。含糖培養(yǎng)基高壓滅菌0.56kg15分鐘。培養(yǎng)螺旋體常用培養(yǎng)基一Korthof,溫度28℃,含有10%兔血清。MPN法-一稀釋培養(yǎng)測數(shù)法。適宜測定土壤中微生物中的特定生理群。活菌計數(shù)最準確的方法--傾注平板計數(shù)法。最快的細菌計數(shù)方法-一顯微鏡直接計數(shù)法。空斑形成數(shù)一PFU我國最早實驗室生物安全衛(wèi)生行業(yè)標準是：微生物實驗室生物安全通用守則。2003年8月1日實行。我國第一部實驗室生物安全國家標準是：《實驗室生物安全通用要求》。2004年10月1日執(zhí)行。WHO制定的生物安全指南：《實驗室生物安全手冊》2004年11月出版第3版。細菌的生化反應(yīng)試驗糖醇類代謝試驗：糖發(fā)酵試驗、甲基紅試驗、V-P試驗、葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗（0/F試驗）、七葉背水解試驗、B-半乳糖甘滲透酶試驗。糖發(fā)酵試驗原理：多糖一單糖一丙酮酸一酸性產(chǎn)物（或產(chǎn)酸產(chǎn)氣）-PH下降一指示劑呈酸性變色。蛋白質(zhì)類代謝試驗：靛基質(zhì)試驗、硫化氫試驗、苯丙氨脫氨試驗、尿素酶試驗雙糖：葡萄糖、乳糖：三糖：葡萄糖、乳糖、蔗糖：雙糖高層斜面發(fā)酵管：葡萄糖/乳糖=1：10三糖鐵與雙糖鐵區(qū)別：蔗糖。糖類發(fā)酵是鑒定細菌最常用的生化反應(yīng)。需氧芽胞菌除炭疽外均有鞭毛。TI-Ag的特點：非胸腺依靠性抗原，不需T細胞輔助即可刺激機體產(chǎn)生抗體。少數(shù)Ag屬此類。如細菌多糖、聚合鞭毛蛋白等。共同特點：TI-Ag刺激機體產(chǎn)生的Ab僅是免疫球蛋白M,不引起回憶應(yīng)答，不引起細胞免疫。鑒定腸桿菌科基本條件；發(fā)酵葡萄糖、氧化酶陰性、還原硝酸鹽。核酸檢驗基本技術(shù)轉(zhuǎn)錄--在生物體內(nèi)，DNA指導(dǎo)的RNA合成過程。合成RNA時DNA雙鏈要解旋，解旋部位稱為啟動子。大腸菌的RNA聚合醐有5個亞基，其。亞基有啟動子作用。反轉(zhuǎn)錄病毒基因組一般不具感染性。2.變態(tài)反應(yīng)（超敏反應(yīng)）-―-是指機體對某些抗原初次應(yīng)答后,再次接受相同抗原刺激時，發(fā)生的一種以機體生理功能紊亂或組織細胞損傷為主的特異性免疫應(yīng)答。在合成DNA時限制性核酸內(nèi)切酶不是合成DNA的必要條件。DNA多聚酣只能結(jié)合在一長段DNA單鏈的一小段局部雙鏈結(jié)構(gòu)上，才能順利開始DNA合成。DNA在合成中單核甘酸分子必須順序以共價鏈連接在已形成核酸鏈3'末端的羥基上。在合成發(fā)生錯誤時，DNA多聚酶會切除錯誤核甘酸，于此處加上正確的核甘酸。與人工合成DNA區(qū)別。大腸桿菌DNA損傷修復(fù)時填補缺口最重要的酶一DNA聚合酶1。復(fù)制最主要的DNA聚合酶一DNA聚合酶III,該酶的核心聚合酶中，具有3'-5'外切酶活性的亞基是e亞基。大腸桿菌DNA聚合酶【的Klenow片段沒有5'-3'外切酶活性。逆轉(zhuǎn)錄酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具備的。在體內(nèi)DNA復(fù)制必須有RNA引物。合成中tRNA搬運氨基酸作用、rRNA構(gòu)成核糖體骨架、mRNA直接決定蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。I型變態(tài)反應(yīng)：即速發(fā)型，又稱過敏反應(yīng)。特點：過敏原進入機體后,誘導(dǎo)B細胞產(chǎn)生IgE抗體。由IgE介導(dǎo)，肥大細胞和嗜堿粒細胞等效應(yīng)細胞以釋放生物活性介質(zhì)的方式參與反應(yīng)；發(fā)生快，消退亦快；II型變態(tài)反應(yīng)：細胞毒型/細胞溶解型，抗體（多屬IgG、少數(shù)為IgM、IgA）首先同細胞本身抗原成分或吸附于膜表面成分相結(jié)合，然后通過四種不同的途徑殺傷靶細胞HI型變態(tài)反應(yīng)：即免疫復(fù)合物型，又稱血管炎型超敏反應(yīng)。特點：游離抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物（IC）,若IC不能被及時清除，即可在局部沉積，通過激活補體，并在血小板、中性粒細胞及其他細胞參與下，引發(fā)一系列連鎖反應(yīng)而致組織損傷。IV型變態(tài)反應(yīng)：即遲發(fā)型(細胞介導(dǎo)型)，IV型是由特異性致敏效應(yīng)T細胞釋放的LF介導(dǎo)的。分泌型IgA(SIgA)分布于呼吸道、消化道、泌尿生殖道黏膜表面。是機體黏膜防御感染的重要因素。免疫原性含義：剌激機體免疫系統(tǒng)，有誘生抗體和致敏淋巴細胞的能力。產(chǎn)生抗體的細胞是B細胞，本質(zhì)是免疫球蛋白(Ig)o免疫球蛋白(Ig)的分類主要依據(jù)一重鏈恒定部份CH的結(jié)構(gòu)特點。T細胞是：細胞毒性T細胞。漿細胞來源于活化B細胞。特異性B細胞經(jīng)過抗原識別、活化、增殖、分化成為漿細胞。可以保持蛋白質(zhì)活性的蛋白質(zhì)沉淀方法是：硫酸鏤、聚乙二醇、免疫沉淀法。可用于檢測致瀉大腸埃希菌腸毒素的方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測LT和ST、雙向瓊脂擴散試驗檢測LT、乳鼠灌胃試驗檢測ST.瓊脂糖凝膠電泳緩沖液通常用：1*TAE或0.5*TBE,澳化乙錠是誘變劑。鑒別宋內(nèi)志賀菌與其他志賀菌的生化反應(yīng)是：鳥氨酸試驗?？ń槊绾喎Q為：BCG鉤瑞螺旋體可以引起肺部感染Vero細胞毒素是0157：H7大腸桿菌的最主要致病物質(zhì)耐熱直接溶血素屬于副溶血弧菌的主要致病物質(zhì)Ag與Ab結(jié)合的部位是：VH+VLAg決定基是：決定Ag特異性最小化學(xué)基團HIV造成免疫系統(tǒng)的多種功能發(fā)生缺陷的主要原因是:T4淋巴細胞耗竭EBV除引起人類皮膚和黏膜的皰疹樣病變外，還與下列人類鼻咽癌疾病密切相關(guān)核衣殼是病毒粒子的主要結(jié)構(gòu)，核衣殼是由衣殼和核酸成分組成的做補體結(jié)合試驗前血清加熱滅活以破壞它所含有的補體，通常羊血清用58℃溫度滅活我國于1981年開始用地鼠腎細胞疫苗，近幾年又開始應(yīng)用更為先進的狂犬病疫苗，這種疫苗是:Ver。細胞狂犬病疫苗當(dāng)進行抗球蛋白試驗查不完Ab時，其中一個重要試劑是第二Ab,在抗球蛋白試驗中第二抗體是一-雙價抗體在CFT反應(yīng)中有5種成份：Ag、被檢血清、補體、溶血素和SRBC,CFT反應(yīng)中補體的作用是：非特異性結(jié)合。在CFT反應(yīng)中為了查Ag,常常降低反應(yīng)溫度，稱為冷CFT,冷CFT反應(yīng)溫度通常是：4℃目前已知的可以在臨床上造成出血熱的病毒如下：布尼亞病毒科：流行性血熱、克里米亞剛果出血熱黃病毒科：登革出血熱絲狀病毒科：艾博拉出血熱。病毒在胞漿內(nèi)繁殖，芽生釋放。急性期標本接種于Vero細胞培養(yǎng)或藤鼠腹腔與小兒頑固性腹瀉有關(guān)的是：腸集聚粘附性大腸埃希氏菌引起旅游者腹瀉的最主要的是：腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌鉤體病的主要傳染源是：鼠類動物。發(fā)病一周內(nèi)取血液，第二周以后取尿，有腦膜炎型癥狀者取腦脊液進行檢查。病毒檢驗基本技術(shù).組織培養(yǎng)用玻璃器皿：硫酸、重銘酸鉀液浸泡。.人工綜合組織培養(yǎng)營養(yǎng)液：氨基酸、糖類、無機鹽、維生素、輔助生長因子。MEM、RPMI1640.細胞培養(yǎng)液分生長液、維持液，兩者區(qū)別在血清含量不同。EDTA、胰蛋白酶分散作用。.細胞病變(CPE)、二甲亞碉(DMSO)細胞保護劑、.半數(shù)致死量(LDQ-導(dǎo)致半數(shù)動物死亡的細菌感染量。是評價化學(xué)毒物急性毒性大小最重要的參數(shù)。(大小鼠、雌雄各半，初成年，受試后14天內(nèi)總死亡數(shù))最小全數(shù)致死量(MLD)一引起全部動物死亡的最小感染劑量。半數(shù)感染量(IDG一導(dǎo)致半數(shù)組織培養(yǎng)細胞發(fā)生感染的細菌數(shù)量或毒素劑量。TCI%一半數(shù)細胞培養(yǎng)物感染量。一、致死劑量LD:(1)絕對致死劑量LD100 (2)最小致死劑量LDoi(3)最大耐受劑量LDo二、效應(yīng)、反應(yīng)、劑量一效應(yīng)、劑量一反應(yīng)、關(guān)系曲線.超過濾法：用不同孔徑的火棉膠濾膜過濾病毒懸液。.中和抗體抗病毒機制：改變病毒表面的構(gòu)型，阻止病毒吸咐、穿入易感細胞進行繁殖。.遲發(fā)感染的特點：又稱慢發(fā)病毒感染。潛伏期很長可達數(shù)月、數(shù)年或數(shù)十年之久。一旦癥狀出現(xiàn)，多為亞急性、進行性，并造成死亡。包涵體病毒在增殖過程中使寄主細胞內(nèi)形成一種蛋白質(zhì)性質(zhì)的病變結(jié)構(gòu)，在光學(xué)顯微鏡下可見，多為圓形、卵圓形或不定形。.引起腦膜炎的腸道病毒：腸道病毒70型、腸道病毒71型、柯薩奇A組16型、脊髓灰質(zhì)炎病毒。.C6/36是白蚊伊蚊細胞：分離登革熱、乙腦病毒。.蓄積系數(shù)經(jīng)值：VI高度、1—3明顯、3—5中度、＞5輕度。.協(xié)同作用一一種物質(zhì)的存在能促進其他物質(zhì)效應(yīng)的作用。.病毒病的常規(guī)實驗室診斷指--病毒的分離和鑒定、形態(tài)學(xué)檢查、免疫學(xué)鑒定、分子生物學(xué)鑒定。.空斑試驗一用于測定病毒的感染力。.Versen—又稱EDTA.病毒的形態(tài)學(xué)檢查方法一電子顯微鏡（EM）、光學(xué)顯微鏡、超速離心法、超過濾法、X射線晶體衍射法。.Alsever液一是一種紅細胞保存液，含有抗凝劑檸檬酸鈉和細胞需要的養(yǎng)分葡/糖。pH值調(diào)到6.1,經(jīng)過69千帕，15分鐘的高壓滅菌，放置在4℃的環(huán)境內(nèi)，保存?zhèn)溆谩?常用的細胞培養(yǎng)液：MEM、1640。加入HEPES具有較強的緩沖能力。.中和試驗--必須制備高效價免疫血清或取高滴度病人恢復(fù)期血清。.原位雜交--可直接檢測或定位細胞內(nèi)毒基因。.乙腦病毒主要存在于血清中，用一于分離病的血清一般不加抗凝劑。.麻疹病毒主要吸附在白細胞上，加抗凝劑可提高分離率。.鼻咽拭子的除菌處理：加抗生素終濃度20000U/ml,4℃作用4小時，2000轉(zhuǎn)/min,離心20分鐘。.大便標本的除菌處理：加抗生素終濃度10000U/ml,4℃過夜或1000轉(zhuǎn)/min,離心20分鐘。將含病毒的懸液2000-6000轉(zhuǎn)/min,離心30-40分鐘，可除去90%以上的細胞碎片和雜質(zhì)。.流式細胞術(shù)：（1）一種細胞分選或分析技術(shù)。即以熒光素標記抗體結(jié)合相應(yīng)細胞，用激光束激發(fā)單行流動的細胞，根據(jù)細胞所攜帶熒光（強度或類別）進行分選或分析。（2）一種對懸液中細胞、微生物或細胞器等進行單個快速識別、分析和分離的技術(shù)。用以分析細胞大小、細胞周期、DNA含量、細胞表面分子以及進行細胞分選等。（3）用熒光劑對細胞特定成分染色，利用流式細胞儀對處在快速、直線、流動狀態(tài)中的單細胞或生物顆粒進行多參數(shù)、快速定量分析，并能對特定群體加以分選的現(xiàn)代細胞分析技術(shù)。.病毒RNA的堿基序列與mRNA完全相同，稱為正鏈RNA病毒，這種病毒RNA可直接起病毒mRNA的作用。病毒RNA堿基序列與mRNA互補者，稱為負鏈RNA病毒，負鏈RNA病毒的顆粒中含有依賴RNA的RNA多聚酶，可催化合志互補鏈。.蠟樣桿菌能耐受100℃30min。檢驗技術(shù)資格考試考點精要一一微生物學(xué)檢驗（中級下）.炭疽桿菌：最大的致病G+桿菌，菌落灰白色，表面干燥呈“毛玻璃”狀，稍隆起，低倍鏡下菌落邊緣呈明顯卷發(fā)狀如（獅鬃），人工培養(yǎng)呈竹節(jié)狀長鏈，不分解乳糖，對碘和氧化劑敏感，有菌體多糖，莢膜多肽，芽胞，炭疽毒素四抗菌素原，質(zhì)粒編碼：毒力因子毒素、莢膜。毒素基因位于大質(zhì)粒pXOl上，莢膜基因位于小質(zhì)粒PXO2上，二者是致病必須的。各型均應(yīng)采血液標本。鏡檢：革蘭、莢膜染色。毒力鑒定：1、質(zhì)粒電泳圖譜分析2、PCR擴增其選擇培養(yǎng)基是戊烷瞇血平板，鑒定試驗有：青霉素敏感試驗、串珠試驗，噬菌體裂解試驗（AP631株），重碳酸鹽毒力試驗（有毒力形成芽胞呈M型）。用1:1000的升汞固定5min。.產(chǎn)單核李斯特菌：有鞭毛，無牙胞對人致病，在羊血平板上B溶血環(huán)，25℃有動力，37℃動力緩慢（此特征可作為初步判定），能在4c進行冷增菌，在半固體中可現(xiàn)倒傘狀，致病物質(zhì)為李斯特菌溶素O,通過胎盤或產(chǎn)道感染新生兒是重要特點，常伴EB病毒引起傳單。.結(jié)核分枝桿菌：人型和牛型，專性需氧，曾發(fā)現(xiàn)G+非抗酸顆粒稱Much顆粒，無芽無鞭無莢，燭缸法不適，應(yīng)用二氧化碳培養(yǎng)皿，常用羅一琴或米氏7H10培養(yǎng)基，35?40℃可長，35?37最適，pH6.5?6.8,18h分裂一代，2?6周才能長出菌落，不發(fā)酵糖類，人型的煙酸，硝酸鹽還原，煙酰胺酚試驗均陽性?？沙霈F(xiàn)Koch現(xiàn)象（初次不發(fā)生速發(fā)型過敏反應(yīng)），是Koch在1891年觀察到。結(jié)核菌素試驗紅腫硬結(jié)：50IU/ml制劑，《5nun陰性，25mm陽性；215mm強陽性。結(jié)核菌素-一舊結(jié)核菌素（OT）與結(jié)核菌素純蛋白衍化物（PPD）的通稱。結(jié)核病的診斷依據(jù)：臨床表現(xiàn)、X線檢查特征的肺結(jié)核表現(xiàn)、結(jié)核菌的痰涂片檢查、以及結(jié)核菌素試驗為主要手段的免疫測試。依賴細胞免疫，遲發(fā)超敏反應(yīng)伴隨細胞免疫存在而存在。結(jié)核病動物接種的鑒別診斷所接種的敏感動物豚鼠，腹股溝皮下。每油鏡視野1—9條抗酸菌3+結(jié)核分枝桿菌，無內(nèi)外毒素，致病性與其索狀因子，蠟質(zhì)D,分枝菌酸有關(guān)。蠟質(zhì)D為細胞壁主要成份，是一種肽糖脂與分枝菌酸復(fù)合物，能引起遲發(fā)性過敏反應(yīng)，并具有佐劑作用。.麻風(fēng)病原：Hamsen在1937年發(fā)現(xiàn)麻風(fēng)分枝桿菌。具有多形性、抗酸性、聚集性，典型胞內(nèi)菌。G+,無動力無芽無莢，人是唯一的宿主和傳染源，分瘤型和結(jié)核型。免疫功能決定了感染后是否發(fā)病及臨床類型。麻風(fēng)菌的有效保護性免疫取決于細胞介導(dǎo)的免疫，沒有體液免疫缺陷。主要用涂片染色顯微鏡檢查，鼻黏膜或皮損處取材，用抗酸性染色后檢查。除臨床檢查外，皮膚切刮法涂片查菌及組織病理學(xué)檢查可有助于麻風(fēng)診斷的確定。一般瘤型和界線類患者標本中可找到細菌在細胞內(nèi)存在，有診斷意義。結(jié)核樣型患者中很少找到細菌。.空腸彎曲菌：菌體輕度彎曲似逗點狀，菌體一端或兩端有鞭毛，運動活潑，在暗視野鏡下觀察似U蠅。有莢膜，不形成芽胞。微需氧菌，在含2.5?5%氧和10%CO2的環(huán)境中生長最好。最適溫度為37?42℃。內(nèi)毒素能侵襲小腸和大腸粘膜引起急性腸炎，致病因素：粘附、侵襲、產(chǎn)生毒素和分子模擬機制（并發(fā)癥一格林一巴利綜合征），產(chǎn)生細胞緊張性腸毒素、細胞毒素和細胞致死性膨脹毒素而致病臨床：腹痛、腹瀉、發(fā)熱，多見散發(fā)，是夏秋季腹瀉和旅行者腹瀉的主要病因之一。主要是污染水、食物。標本采0—5日內(nèi)用藥前，于運送培養(yǎng)基中4小時內(nèi)檢。分離培養(yǎng)：采樣棉拭子涂于萬古霉素、多粘菌素的肉湯增菌培養(yǎng)，再接種于哥倫比亞血（5%脫纖維綿羊血）平板上,42℃培養(yǎng)微需氧（85%N、10%CO2>5%O2）2-3天，不溶血、灰色扁平、濕潤光澤、像水滴，邊緣完整發(fā)亮。病原鑒定：氧化酶、過氧化酶陽性，G一呈S型、螺旋狀、紡錘形可初步確定為彎曲菌。再做42℃、25'C生長試驗（布氏桿菌肉湯），H2s試驗陽性（排除胎兒彎曲菌）、馬尿酸鹽水試驗陽性（排除結(jié)腸彎曲菌）。多引物一步PCR擴增法一一空腸彎曲菌mapA基因特異彩片段等。.銅綠假單胞菌：條件致病菌，需氧，G一桿菌，有鞭毛，20?42C長，最適產(chǎn)毒溫度是26℃,是35℃,4℃不長，液面可形成菌膜，色素有：綠膿素（溶于水和氯仿），氧化酶陽性，液化明膠、還原硝酸鹽，在42c條件下能生長。熒光素是綠色熒光素（溶于水不溶于氯化）。O抗原有兩種：1、內(nèi)毒素脂多糖2、原內(nèi)毒素蛋白OEP（類屬抗原），選擇培養(yǎng)基：NAC（乙酰氨基半乳糖）。.流感嗜血桿菌：寄生人體鼻咽部，抵抗力弱，嬰幼兒易感，G一球桿菌，用石碳酸復(fù)或美藍單染呈現(xiàn)兩端濃染。要新鮮血液（含X和V因子）培養(yǎng)基，不溶血，可生長在接種于血平板上的金黃色葡萄球菌的周圍，流感嗜血桿菌菌落較大，越遠越小，即衛(wèi)星現(xiàn)象。在含1%蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露并加有X和V因子的酚紅肉湯培養(yǎng)基中進行發(fā)酵試驗，是鑒別所有嗜血桿菌菌株的方法。莢膜是本菌的主要毒力因子，根據(jù)莢膜多糖抗原分為a-f6個血清型，b型致病力最強；依據(jù)口引噪試驗、胭素反應(yīng)、鳥氨酸代謝分為：8個生物型，大部分為I、II、HI型，其中以I、in型為主，血清型b型生物型為I型。副流感嗜血桿菌生長只要v因子。接種于巧克力色、含腦心浸液的血瓊脂平板。病原鑒定方法： 標本：腦脊液、血液、胸水。.軍團菌：1976年，USA費城，G一為胞內(nèi)寄生菌。無芽胞、無莢膜、有鞭毛，需氧菌（5%CO2剌激生長）常規(guī)不易著色，最適為36℃,初次分離要L-半胱氨酸，含鐵鹽可促進生長，主要可用活性碳一酵母浸出液平板（BCYE）,不分解糖。水解馬尿酸是嗜肺軍團菌特征?；钚蕴拷湍附鲆涵傊ê沽姿徼F、L-半胱氨酸），菌落呈灰白色，如加漠甲酚紫，菌落呈淺綠色。有雜菌用選擇培養(yǎng)基（GVPC）,是在BCYE中加入甘氨酸、多粘菌素B、萬古霉素及放線酮。試管凝集法抗體的陽性標準：12320水是人類感染的主要來源，水樣1L,樣本采集到濃縮培養(yǎng)最長不超過14天，最好不超過2天。血液、痰、尿6-8℃避光、隔熱運送。并取3份，一份酸處理，一份熱處理50℃水30分鐘。證實試驗：免疫熒光方法。感染臨床主要有2種形式：1、軍團菌病LD（肺炎型）2、龐提阿克熱PF.克雷伯桿菌：又稱肺炎桿菌，以肺炎克雷伯菌多見，G一有較厚莢膜，多數(shù)有菌毛，無芽抱和鞭毛，菌體呈卵圓形或球桿狀成雙排列，有時菌落出現(xiàn)黏液型用接種環(huán)可成絲。具有O抗原和K抗原。是人呼吸道及腸道定殖菌，條件致病菌。主要采痰液，用無菌鹽水洗3次+等量PH7.61%胰酶37度水中90分鐘使痰液均質(zhì)化，該菌產(chǎn)生胞外毒性復(fù)合物（ETC）,主要成分為莢膜多糖（63%）、脂多糖（30%）和少量蛋白質(zhì)（7%）。有些菌株還可產(chǎn)生LT和ST腸毒素。莢膜也與致病力有關(guān)。動力和鳥氨酸脫撥酶陰性是本菌最大特點。血瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱，菌落大呈黏液型，光亮黏稠，菌落易融合，發(fā)酵乳糖，呈現(xiàn)有色菌落。利用莢膜腫脹試驗分型，3型和12型，magA基因作該菌診斷。rmpA基因作該菌輔助診斷。三亞種區(qū)別：IMViC試驗：肺炎亞種一一++,臭鼻亞種一十-d,鼻硬結(jié)亞種一+一—.衣原體：嚴格真核細胞內(nèi)寄生的原核細胞型微生物，非運動性的細菌，多少呈球形、堆狀，G-,一般寄生在動物細胞內(nèi)。有獨特發(fā)育周期，能通過細菌濾器。沙眼，鸚鵡熱嗜衣原體，肺炎嗜衣原體。專性細胞內(nèi)寄生。6-8日齡雞胚卵黃囊中繁殖，有包涵體。衣原體的兩種形態(tài)：原生小體（EB,小而致密的顆粒結(jié)構(gòu)，具感染性，姬染紫紅色，無繁殖力）。始體（網(wǎng)狀體）（RB,大而疏松的結(jié)構(gòu)，衣原體發(fā)育中的繁殖體，不具感染性，具增殖力色，絲狀分裂增，姬染蘭殖），產(chǎn)生類似于G-桿內(nèi)毒素。培養(yǎng)物中抑制劑二乙氨基葡聚糖。.立克次體：以節(jié)肢動物為傳播媒介，嚴格細胞內(nèi)寄生的原核細胞型微生物。人畜共患，立克次體的致病物質(zhì)主要有內(nèi)毒素（脂多糖）和磷脂酶Ao免疫是以細胞免疫為主，體液免疫為輔。培養(yǎng)特性：動物接種是最常用的培養(yǎng)方法，采用豚鼠、小鼠可對多種病原性立克次體進行繁殖。雞胚卵黃囊常用于立克次體的傳代。目前常用的細胞培養(yǎng)系統(tǒng)有雞胚成纖維細胞、L929細胞、Vero細胞，用PCR方法進行鑒定。WHO推薦金標方法-一間接免疫熒光方法（IFA）孵育最適溫度為37℃。常用姬姆尼次、姬姆薩染色，多形性，無芽無鞭。標本保存一80或-160C。雄性豚鼠腹腔接種，39.5以上為特異發(fā)熱,觀察陰囊紅腫（流一，地+）抗原結(jié)構(gòu)：一、可溶性群特異性抗原，與細胞壁表層的脂多糖構(gòu)成，耐熱。另一種為種特異性抗原，與外膜蛋白構(gòu)成，不耐熱。但恙蟲病立克次體的細胞壁結(jié)構(gòu)和抗原成分不同，無粘液層、無微莢膜、無肽聚糖和脂多糖，故另立為東方體屬。斑疹傷寒、恙蟲病立克次體的脂多糖與普通變形桿菌某些菌株（如0X19、X2、OXk等）的菌體抗原有共同的抗原成分。交叉凝集試驗稱外斐反應(yīng)（Weil-Felixreaction）,用于立克次體病的輔助診斷。補體結(jié)合試驗是立克次體最常用的方法。（-）普氏立克次體（P.prowazekii）：是流行性斑疹傷寒的病原體。病人是唯一的傳染源，體虱傳播媒介，在人與人之間傳播（二）莫氏立克次體（R.typhi）：又名斑疹傷寒立克次體，是地方性斑疹傷寒的病原體。鼠、蚤傳播媒介，又稱鼠型斑疹傷寒。（三）恙蟲病立克次體（R.tsutsugamushi）：恙蟲病立克次體是恙蟲病的病原體。嚙齒類動物、兔類、鳥類為傳染源。人類通過恙螭幼蟲叮咬而感染.支原體：無細胞壁，僅有細胞膜（外，中，內(nèi)，中間是磷脂，內(nèi)外是蛋白質(zhì)及糖）呈高度多形性，能通過濾菌器，最小原核細胞微生物。采樣黏膜組織，初次培養(yǎng)最適pH7.6?8.0,在95%N2,5%CO2中生長好，菌落呈“油煎蛋”）樣菌落，取樣：黏膜組織。分離培養(yǎng)是確診支原體感染的可靠方法之一，接種平板后用膠紙封保濕，培養(yǎng)基中加入膽固醇、血清蛋白和酵母浸液，加酚紅，醋酸鉉及抗生素抑菌。Giemsa染色呈淡紫色，Dienes染色呈藍色不易褪色。40倍鏡下可見油滴狀菌落，100倍下可見桑根狀菌落。16種支原體中，肺炎、解胭、人型、生殖器、發(fā)酵支原體對人致病，肺炎支原體引起間質(zhì)性肺炎，其它4種引起泌尿生殖道感染?？焖贆z測：雙抗體夾心ELISA法--檢測外膜蛋白、免疫印跡技術(shù)--檢測抗原.肝炎病毒：甲型（HAV）、乙型（HBV）、丙型（HCV）、丁型（HDV）、戊型（HEV）o甲型（HAV）：正鏈小RNA病毒科，球形正十二面體，病毒顆粒無包膜，基因組長約7.5kb的正鏈RNA,核酸RNA有感染性。是在各種條件下抵抗外界變化能力最強的病毒之一。1：4000甲醛液（福爾馬林）37度71小時可滅活。糞一口傳播。乙型（HBV）：反轉(zhuǎn)錄病毒，嗜肝DNA病毒科，病毒顆粒3種：22nm小球形外膜顆粒、40—100nm22nm管形顆粒、完整42nmDane顆粒。前兩者空心包膜，表面抗原（HBsAg）組成，不含核酸，沒感染性。Dane顆粒呈雙層外殼圓形顆粒，攜帶核心抗原（HBcsAg）,抵抗力很強，100℃10分鐘滅活。HBV基因組長約3.2kb不完全雙鏈環(huán)狀DNA,長鏈為—鏈，短鏈為+鏈，短鏈5”末端固定，3”末端不固定。丙型（HCV）：黃科病毒，球型顆粒，基因組長9.4kb正鏈RNA,1：1000甲醛液（福爾馬林）37度92小時可滅活。母嬰、輸血、血源性傳播。丁型（HDV）：衛(wèi)星病毒科，是一種缺陷病毒，需在（HBV）或嗜肝DNA病毒的輔助下才能復(fù)制增殖。核心含單股負鏈共價閉合環(huán)裝RNA、HDAg抗原，核衣殼是一粗糙球形結(jié)構(gòu)。對各種滅活劑、脂溶劑敏感，耐干熱。輸注含HDV的血液或血制品。戊型（HEV）：無包膜線狀單股正鏈RNA病毒球形，基因組長約7.5kb,對高熱敏感。有鎂、銃離子存在可保持完整性。糞一口傳播.人類免疫缺陷（HIV）：是獲得性免疫缺陷綜合征。簡稱艾滋?。ˋIDS）,主要通過性接觸、血液、母嬰傳播。感染后損傷免疫系統(tǒng)，引起致死性機會感染或腫瘤，乙類。世界81第一例，我國85。H1V屬逆轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬，分HIV-1、HIV-2型，95%由