出凝血檢查-上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系課件

實驗

出凝血檢查上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院余文紅實驗

出凝血檢查上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院1（一）血標本的采取應(yīng)注意的問題

（一）血標本的采取應(yīng)注意的問題

2

1.PT、APTT凝血實驗檢查均使用靜脈血。采血人員應(yīng)技術(shù)熟練，以防止組織損傷，外源性凝血因子進入針管。

1.PT、APTT凝血實驗檢查均使用靜脈血。采血人員應(yīng)技3

2．一般血液采集，進入容器至進行實驗所用的時間越短，所分析的凝血因子被保護得越好。從輸液三通管取出血的做法不可取。

4

3．取血時病人應(yīng)松馳，環(huán)境溫暖，防止靜脈攣縮，止血帶的壓力要盡可能小，取血時，拉針栓的速度要慢而均勻，使血液平穩(wěn)地進入注射器，防止氣泡的產(chǎn)生。

5

4．一旦取樣完畢，立即與抗凝劑充分混合，一般提倡使用真空采血管。

6

5．用硅化玻璃或塑料注射器采血。考慮結(jié)果的精確性，應(yīng)將試管刻度的可能誤差控制在既定體積的10%以內(nèi)。

5．用硅化玻璃或塑料注射器采血?？紤]結(jié)果的精確性，應(yīng)將試管7

6.采血后標本在低溫保存且在一定時間范圍內(nèi)。

8

7.國際血液學(xué)標準化委員會（ICSH）、國際血栓與止血委員會（ICTH）推薦使用3.2g/dl（含2H2O）或0.109mol/L的枸櫞酸鈉作為凝血因子檢查的抗凝劑。7.國際血液學(xué)標準化委員會（ICSH）、國際血栓與止血委9

8.抗凝劑在血標本的絕對含量可改變血漿中鈣離子濃度，進而影響試驗結(jié)果，因此應(yīng)根據(jù)患者紅細胞比例（Hct）狀況隨時調(diào)整抗凝劑用量。8.抗凝劑在血標本的絕對含量可改變血漿中鈣離子濃度，進10（二）應(yīng)用試劑應(yīng)注意

的問題

（二）應(yīng)用試劑應(yīng)注意

的問題

11

1.組織凝血活酶工作制劑的國際敏感指數(shù)（ISI），為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測PT中能得到同樣的結(jié)果，必須要制定一個共同的敏感性指標。1.組織凝血活酶工作制劑的國際敏感指數(shù)（ISI），為了使不12

2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步驟必須嚴格按照說明書進行。通常在使用前必須充分混勻試劑，以使微粒重新均勻懸浮于液體中。2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步驟必須嚴格按照說明書13

3.試劑準備過程中應(yīng)該使用去離子水。

14

4.正常對照血漿通常將多份健康人血標本混在一起，以彌補個體誤差。

15（三）使用實驗器材應(yīng)注意的問題

（三）使用實驗器材應(yīng)注意的問題

16

1.玻璃器皿的要求：貯存和測試時應(yīng)選用干凈、沒有劃痕的試管。

17

2.溫度的要求：人工測定終點法要求水浴箱的溫度必須保持在（37±1）℃，并且周圍照明設(shè)備要好，便于讀取終點。

18（四）實驗操作應(yīng)注意的問題

（四）實驗操作應(yīng)注意的問題

19

1.許多試驗誤差都來源于技術(shù)的錯誤。在實驗技術(shù)、試劑、溫度及pH值上很微小的變化都會導(dǎo)致試驗結(jié)果明顯的變化。

20

2.手工法PT或試管法CT檢查時，傾斜試管動作一定要輕，角度要小，以減少血液與管壁的接觸面積。

21

3.血液凝固主要是酶催化的反應(yīng)，所以實驗過程中要嚴格控制理想的pH環(huán)境和溶液的離子強度。

22

4.試驗結(jié)果準確還取決于所用的反應(yīng)物的量、加入順序和不同反應(yīng)物的孵育時間。

23

5.APTT、PT需乏血小板血漿。

24

6.試驗前檢查血漿是否有溶血、黃疸、脂血和出現(xiàn)凝塊。

25

7.報告方式：以PT的秒（s）數(shù)報告。以患者PT（s）/正常對照（s）的比（PTR）報告。在口服藥物治療監(jiān)控時以INR報告。ICSH規(guī)定，不再用百分比（活動度）報告。APTT以秒報告。

7.報告方式：261987年WHO提出PT值用INR（internationalnormalizedratio國際標準化比值）作為PT結(jié)果報告形式，并用以作為抗凝治療監(jiān)護的指標。

1987年WHO提出PT值用INR（internationa27

INR=［病人PT（s）/正常人平均PT（s）］ISIPTR=受檢者PT（s）/正常對照PT（s）INR=PTRISIISI：國際敏感指數(shù)（internationalsensitivityindex）1～1.9INR=［病人PT（s）/正常人平均PT（s）］ISI28

CT、PT、APTT、RT、Fg、TT

29凝血時間測定CT凝血時間測定CT30目的：掌握玻璃試管法凝血時間測定的方法

目的：掌握玻璃試管法凝血時間測定的方法31原理：離體靜脈血與玻璃表面接觸后，血中XII因子活化并啟動內(nèi)源性凝血途徑，最終生成纖維蛋白而使血液凝固所需的時間。原理：離體靜脈血與玻璃表面接觸后，血中XII因子活32器材：6mm直徑玻璃試管3支靜脈采血器材37℃恒溫浴箱秒表器材：6mm直徑玻璃試管3支33

步驟：3支試管各1ml血，每隔0.5min傾斜，第一管計時后，立即觀察第二、三管并計時，直至血液凝固。結(jié)果判斷：從血液剛進入注射器至第3管凝固所需時間即為凝血時間。步驟：3支試管各1ml血，每隔0.5min傾斜，第一管計時34

正常參考值：4～12分鐘報告方式：CTX.Xmin（玻璃試管法）正常參考值：4～12分鐘35注意事項：試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”且血液中不含泡沫。溫度恒定為37℃，傾斜試管角度應(yīng)在30°左右。注意事項：試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”且血液中不含泡沫36評價：凝血時間曾用玻片法測定，但由于毛細血管采血，易混入組織液而使凝血時間正常，屬于淘汰方法。延長：嚴重內(nèi)源性凝血途徑凝血因子有缺陷；血中抗凝物質(zhì)增多；肝素治療縮短：高凝狀態(tài)（DIC早期）評價：凝血時間曾用玻片法測定，但由于毛細血管采血，易混入組織37凝血酶原時間

PT

凝血酶原時間

PT38原理：

在乏血小板血漿中加入組織因子和鈣離子（鈣凝血活酶）后，血漿發(fā)生凝固的時間即為凝血酶原時間（PT）。

原理：在乏血小板血漿中加入組織因子和鈣離子（鈣凝血39步驟：取空腹靜脈血1.8ml加入含有0.2ml109mmol/L枸櫞酸鈉的試管中混勻備用。抗凝血以3000r/min離心10min分離血漿將試劑、正常人混合血漿、待測血漿與37℃預(yù)熱5min。血漿0.1ml加入混勻的試劑0.2ml，開動秒表計時。步驟：取空腹靜脈血1.8ml加入含有0.2ml109mmol40

正常參考值：PT：11～13秒PTR：1±0.15INR：0.8～1.5

41

報告方式：PT：X.Xs，正常人血漿X.XsPTR：X.XINR：X.X報告方式：42注意事項：試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”，抗凝劑與血液比例（1：9）應(yīng)準確。取血后4h內(nèi)完成測定。鈣凝血活酶必須標有國際敏感指數(shù)（ISI），ISI越接近于1.0越敏感。標本測定前應(yīng)先測定正常人混合血漿，其PT值在允許范圍內(nèi)才能測定樣本。注意事項：試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”，抗凝劑與血液比43評價：

血漿凝血酶原是一種篩選試驗，是用來證實先天性或獲得性纖維蛋白原、凝血酶原和凝血因子V、VII、X的缺陷或相應(yīng)抑制物的存在，也用于監(jiān)測口服抗凝治療時引起的凝血酶原和因子VII、X水平的下降。評價：血漿凝血酶原是一種篩選試驗，是用44實質(zhì)：

對檢測樣本（血漿）中存在凝血激酶時的再鈣化反應(yīng)，這種過程包括了因子VIIa、組織因子、磷脂、鈣離子對凝血酶原的活化，凝血酶裂解纖維蛋白原和纖維蛋白單體的聚集交聯(lián)。實質(zhì)：對檢測樣本（血漿）中存在凝血激酶45活化部分凝血活酶時間測定

APTT

活化部分凝血活酶時間測定

APTT46原理：用白陶土激活XII因子、腦磷脂代替血小板磷脂，測定乏血小板血漿加入Ca2++后凝固所需時間。原理：用白陶土激活XII因子、腦磷脂代替血小板磷脂，47步驟：采血空腹靜脈血1.8ml+0.2ml109mmol/L枸櫞酸鈉混勻。分離血漿3000r/min離心10分鐘分離血漿。溶解試劑臨用時加1ml蒸餾水，室溫靜置15min以上，混勻后使用。預(yù)溫活化0.1ml血漿+APTT試劑0.1ml混勻，37℃準確孵育3min（其間輕輕搖動數(shù)次）加鈣計時加入0.1ml25mmol/LCaCl2混勻并立即開動秒表計時，20s后，觀察混合液流動狀態(tài)。步驟：采血空腹靜脈血1.8ml+0.2ml109mmo48

正常參考值：一般在33.68～40.32s（不同儀器和試劑所測之參考值有差別）報告方式：APTT：XX.Xs，正常人血漿：XX.Xs正常參考值：一般在33.68～40.32s（不同儀器和試劑49注意事項：采血時穿刺盡量一針見血，不要淤血和氣泡，采血后立即與抗凝劑混合，盡快送往實驗室。使用枸櫞酸鹽（抗凝）血漿如果不能立即測試，應(yīng)盡快分離血漿，盛血漿的容器加塞，防止PH值改變血漿在2～8℃下保留7天

鈣凝血活酶必須標有國際敏感指數(shù)（ISI），ISI越接近于1.0越敏感。注意事項：采血時穿刺盡量一針見血，不要淤血和氣泡，采血后立即50臨床意義：APTT延長：表明有內(nèi)源性凝血途徑有關(guān)因子的缺陷（血友病）和纖維蛋白原缺乏。纖維活力增加，如繼發(fā)性，原發(fā)性纖溶以及血循環(huán)中有纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDP）。血循環(huán)中有抗凝物質(zhì)。

臨床意義：APTT延長：51

APTT縮短：高凝狀態(tài)，如DIC的高凝期，促凝物質(zhì)進入血液以及凝血因子的活性增高等。

APTT縮短：52評價：APTT和PT同時檢測是目前二期止血缺陷的主要篩選試驗組合。評價：APTT和PT同時檢測是目前二期止血缺陷的主要篩選試驗53在有臨床出血癥狀的前提下：APTTPT提示正常延長因子VII的缺陷延長正常因子VIII、IX、XI缺陷正常正常懷疑因子XIII缺陷可能延長延長除因子II、V、I、X缺陷外，主要是異?？鼓镔|(zhì)的增多在有臨床出血癥狀的前提下：APTTPT54血漿復(fù)鈣時間

RT

血漿復(fù)鈣時間

RT55原理：在去鈣離子的抗凝血漿中，重新加入適量的鈣后，血漿發(fā)生凝固。原理：在去鈣離子的抗凝血漿中，重新加入適量的56步驟：0.2ml0.1mol/L草酸鈉+靜脈血1.8ml混勻，離心分離血漿。0.1ml血漿置37℃水浴中，+0.025mol/LCaCl20.1ml，立即開動秒表記錄時間。步驟：0.2ml0.1mol/L草酸鈉+靜脈血1.8ml混57

正常參考值：2.08±0.49分（2.18~3.77分鐘）正常參考值：58注意事項：不要溶血，否則時間縮短CaCl2新鮮配制分離血漿以1000轉(zhuǎn)/分為宜，高速離心可使大量血小板下沉而導(dǎo)致復(fù)鈣時間延長。注意事項：不要溶血，否則時間縮短59復(fù)鈣交叉時間

RT

復(fù)鈣交叉時間

RT60步驟：按下列比例準備5份待測血漿：加樣量12345受檢血漿（ml）－0.010.050.090.10正常血漿（ml）0.100.090.050.01－上述試管，置37℃1min，加0.025mol/LCaCl20.1ml，混勻后，記錄血漿凝固時間。步驟：按下列比例準備5份待測血漿：61注意事項：所用血漿均為富含血小板血漿，分離出血漿后需在2h內(nèi)檢測完畢。注意事項：所用血漿均為富含血小板血漿，分離出血漿后需在2h內(nèi)62臨床意義：RT最早作為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)相關(guān)凝血因子缺陷的篩選檢查，但由于這個試驗不如APTT，又容易受血小板數(shù)量和功能影響，目前只用來篩選是否存在病理性抗凝物質(zhì)增多。臨床意義：RT最早作為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)相關(guān)凝血因子缺陷的篩選檢63

延長的復(fù)鈣時間如被1/10量的正常血漿所糾正，則表示受檢血漿中缺乏內(nèi)源凝血因子；如不被少量正常血漿糾正，提示存在異?？鼓镔|(zhì)。延長的復(fù)鈣時間如被1/10量的正常血漿所糾正，則表示受檢血64血漿纖維蛋白原

Fg

血漿纖維蛋白原

Fg65

纖維蛋白原的測定方法眾多，大體上分三大類：基于經(jīng)加凝血酶后，形成纖維蛋白的方法，即可凝固蛋白法。物理、化學(xué)測定法。免疫學(xué)測定法。

纖維蛋白原的測定方法眾多，大體上分三大類：66目的和原理

目的和原理67

為了解凝血途徑最后環(huán)節(jié)的狀況，排除纖維蛋白原減少、異常對凝血篩選試驗的影響，了解纖溶活動度等可選擇本試驗。為了解凝血途徑最后環(huán)節(jié)的狀況，排除纖維蛋白原減少68

Clauss法以凝血酶作用于受檢血漿中的纖維蛋白原，使其形成纖維蛋白，血液凝固。Clauss法以凝血酶作用于受檢血漿中的纖維蛋69

纖維蛋白原的量與凝固時間成負相關(guān)，檢測結(jié)果與參比血漿制成的標準曲線對比可得出纖維蛋白原的含量。纖維蛋白原的量與凝固時間成負相關(guān)，檢測結(jié)果與參比70步驟：將參比血漿用血漿稀釋液作原倍、1：2、1：4、1：8、1：16稀釋5管。取稀釋血漿0.2ml于小試管中，置37℃水浴預(yù)熱2分鐘，再加凝血酶溶液0.1ml，記錄時間。步驟：將參比血漿用血漿稀釋液作原倍、1：2、1：4、1：8、71相關(guān)分析：首先先清除內(nèi)存。INV+AC，濃度（log或In）XD，YD輸入（如不取對數(shù)，濃度直接輸入XD，YD讀取值DATA輸入；全部數(shù)據(jù)輸入完畢，按INV+9讀出相關(guān)系數(shù)r。待測讀數(shù)INV+log或In→讀出相關(guān)濃度。如不取對數(shù)，待測讀數(shù)直接INV+?x→讀出相關(guān)濃度。最終濃度需根據(jù)樣品稀釋倍數(shù)乘積。^相關(guān)分析：首先先清除內(nèi)存。INV+AC，濃度（log或In）72標準曲線：t（s）25201510500.511.522.5C（g/L）標準曲線：t（s）73

如血漿纖維蛋白原含量大于4g/L時，應(yīng)稀釋血漿后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。低于0.8g/L時，需將原血漿改為1∶2或1∶5稀釋，在標準曲線上查得結(jié)果后，除以5或除以2。如血漿纖維蛋白原含量大于4g/L時，應(yīng)稀釋血74

正常參考值：2～4mg/ml正常參考值：75臨床意義：纖維蛋白原增高除生理情況下的應(yīng)激反應(yīng)、妊娠后期外，主要出現(xiàn)感染、灼傷、動脈粥樣硬化、急性心肌梗死、多發(fā)性骨髓瘤、糖尿病、敗血癥等。纖維蛋白原減少見于DIC、原發(fā)性纖溶亢進癥、重癥肝炎、肝硬化和溶栓治療時。臨床意義：纖維蛋白原增高除生理情況下的應(yīng)激反應(yīng)、妊娠后期外，76評價：Clauss方法測定的是纖維蛋白原功能，因此需纖維蛋白原結(jié)構(gòu)正常，且有一定的含量，對低（無）纖維蛋白原血癥和因此后纖維蛋白原血癥應(yīng)改用ELISA和RIA等免疫檢測手段。評價：Clauss方法測定的是纖維蛋白原功能，因此77主要誤差來源：血漿稀釋不準。凝血酶活性不足或失效。凝血酶一般應(yīng)在低溫保存，稀釋后在塑料(聚乙烯)試管中，置4℃可保存活性24小時。測定終點觀察不準確，尤其是纖維蛋白原含量高時，往往很快即凝固，手工法重復(fù)性較差，不易做準。主要誤差來源：血漿稀釋不準。78血漿凝血酶時間TT

血漿凝血酶時間TT79原理以標準凝血酶溶液加入受檢血漿，使凝血酶裂解血漿中的纖維蛋白原，形成纖維蛋白，造成血漿凝固，此時所需時間為凝血酶時間。原理以標準凝血酶溶液加入受檢血漿，使凝血酶裂解血漿中的纖維蛋80方法：

0.1ml血漿+0.1mlTT試劑，37℃水浴中觀察凝固時間。方法：0.1ml血漿+0.1mlTT試劑81正常參考值：16~18S正常參考值：82評價：時間大于正常參考值3秒：DIC、肝臟病變。評價：時間大于正常參考值3秒：DIC、肝臟病變。83

TT時間縮短，并不代表高凝狀態(tài)或DIC前期，是技術(shù)原因。如操作失誤，組織液混入血標本，標本在4℃環(huán)境中放置過久。TT時間縮短，并不代表高凝狀態(tài)或DIC前期，是技術(shù)原因。如84實驗

出凝血檢查上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院余文紅實驗

出凝血檢查上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院85（一）血標本的采取應(yīng)注意的問題

（一）血標本的采取應(yīng)注意的問題

86

1.PT、APTT凝血實驗檢查均使用靜脈血。采血人員應(yīng)技術(shù)熟練，以防止組織損傷，外源性凝血因子進入針管。

1.PT、APTT凝血實驗檢查均使用靜脈血。采血人員應(yīng)技87

2．一般血液采集，進入容器至進行實驗所用的時間越短，所分析的凝血因子被保護得越好。從輸液三通管取出血的做法不可取。

88

3．取血時病人應(yīng)松馳，環(huán)境溫暖，防止靜脈攣縮，止血帶的壓力要盡可能小，取血時，拉針栓的速度要慢而均勻，使血液平穩(wěn)地進入注射器，防止氣泡的產(chǎn)生。

89

4．一旦取樣完畢，立即與抗凝劑充分混合，一般提倡使用真空采血管。

90

5．用硅化玻璃或塑料注射器采血。考慮結(jié)果的精確性，應(yīng)將試管刻度的可能誤差控制在既定體積的10%以內(nèi)。

5．用硅化玻璃或塑料注射器采血。考慮結(jié)果的精確性，應(yīng)將試管91

6.采血后標本在低溫保存且在一定時間范圍內(nèi)。

92

7.國際血液學(xué)標準化委員會（ICSH）、國際血栓與止血委員會（ICTH）推薦使用3.2g/dl（含2H2O）或0.109mol/L的枸櫞酸鈉作為凝血因子檢查的抗凝劑。7.國際血液學(xué)標準化委員會（ICSH）、國際血栓與止血委93

8.抗凝劑在血標本的絕對含量可改變血漿中鈣離子濃度，進而影響試驗結(jié)果，因此應(yīng)根據(jù)患者紅細胞比例（Hct）狀況隨時調(diào)整抗凝劑用量。8.抗凝劑在血標本的絕對含量可改變血漿中鈣離子濃度，進94（二）應(yīng)用試劑應(yīng)注意

的問題

（二）應(yīng)用試劑應(yīng)注意

的問題

95

1.組織凝血活酶工作制劑的國際敏感指數(shù)（ISI），為了使不同敏感性的組織凝血活酶在檢測PT中能得到同樣的結(jié)果，必須要制定一個共同的敏感性指標。1.組織凝血活酶工作制劑的國際敏感指數(shù)（ISI），為了使不96

2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步驟必須嚴格按照說明書進行。通常在使用前必須充分混勻試劑，以使微粒重新均勻懸浮于液體中。2.凝血活酶和部分活化凝血活酶的使用步驟必須嚴格按照說明書97

3.試劑準備過程中應(yīng)該使用去離子水。

98

4.正常對照血漿通常將多份健康人血標本混在一起，以彌補個體誤差。

99（三）使用實驗器材應(yīng)注意的問題

（三）使用實驗器材應(yīng)注意的問題

100

1.玻璃器皿的要求：貯存和測試時應(yīng)選用干凈、沒有劃痕的試管。

101

2.溫度的要求：人工測定終點法要求水浴箱的溫度必須保持在（37±1）℃，并且周圍照明設(shè)備要好，便于讀取終點。

102（四）實驗操作應(yīng)注意的問題

（四）實驗操作應(yīng)注意的問題

103

1.許多試驗誤差都來源于技術(shù)的錯誤。在實驗技術(shù)、試劑、溫度及pH值上很微小的變化都會導(dǎo)致試驗結(jié)果明顯的變化。

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2.手工法PT或試管法CT檢查時，傾斜試管動作一定要輕，角度要小，以減少血液與管壁的接觸面積。

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3.血液凝固主要是酶催化的反應(yīng)，所以實驗過程中要嚴格控制理想的pH環(huán)境和溶液的離子強度。

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4.試驗結(jié)果準確還取決于所用的反應(yīng)物的量、加入順序和不同反應(yīng)物的孵育時間。

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5.APTT、PT需乏血小板血漿。

108

6.試驗前檢查血漿是否有溶血、黃疸、脂血和出現(xiàn)凝塊。

109

7.報告方式：以PT的秒（s）數(shù)報告。以患者PT（s）/正常對照（s）的比（PTR）報告。在口服藥物治療監(jiān)控時以INR報告。ICSH規(guī)定，不再用百分比（活動度）報告。APTT以秒報告。

7.報告方式：1101987年WHO提出PT值用INR（internationalnormalizedratio國際標準化比值）作為PT結(jié)果報告形式，并用以作為抗凝治療監(jiān)護的指標。

1987年WHO提出PT值用INR（internationa111

INR=［病人PT（s）/正常人平均PT（s）］ISIPTR=受檢者PT（s）/正常對照PT（s）INR=PTRISIISI：國際敏感指數(shù)（internationalsensitivityindex）1～1.9INR=［病人PT（s）/正常人平均PT（s）］ISI112

CT、PT、APTT、RT、Fg、TT

113凝血時間測定CT凝血時間測定CT114目的：掌握玻璃試管法凝血時間測定的方法

目的：掌握玻璃試管法凝血時間測定的方法115原理：離體靜脈血與玻璃表面接觸后，血中XII因子活化并啟動內(nèi)源性凝血途徑，最終生成纖維蛋白而使血液凝固所需的時間。原理：離體靜脈血與玻璃表面接觸后，血中XII因子活116器材：6mm直徑玻璃試管3支靜脈采血器材37℃恒溫浴箱秒表器材：6mm直徑玻璃試管3支117

步驟：3支試管各1ml血，每隔0.5min傾斜，第一管計時后，立即觀察第二、三管并計時，直至血液凝固。結(jié)果判斷：從血液剛進入注射器至第3管凝固所需時間即為凝血時間。步驟：3支試管各1ml血，每隔0.5min傾斜，第一管計時118

正常參考值：4～12分鐘報告方式：CTX.Xmin（玻璃試管法）正常參考值：4～12分鐘119注意事項：試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”且血液中不含泡沫。溫度恒定為37℃，傾斜試管角度應(yīng)在30°左右。注意事項：試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”且血液中不含泡沫120評價：凝血時間曾用玻片法測定，但由于毛細血管采血，易混入組織液而使凝血時間正常，屬于淘汰方法。延長：嚴重內(nèi)源性凝血途徑凝血因子有缺陷；血中抗凝物質(zhì)增多；肝素治療縮短：高凝狀態(tài)（DIC早期）評價：凝血時間曾用玻片法測定，但由于毛細血管采血，易混入組織121凝血酶原時間

PT

凝血酶原時間

PT122原理：

在乏血小板血漿中加入組織因子和鈣離子（鈣凝血活酶）后，血漿發(fā)生凝固的時間即為凝血酶原時間（PT）。

原理：在乏血小板血漿中加入組織因子和鈣離子（鈣凝血123步驟：取空腹靜脈血1.8ml加入含有0.2ml109mmol/L枸櫞酸鈉的試管中混勻備用?？鼓?000r/min離心10min分離血漿將試劑、正常人混合血漿、待測血漿與37℃預(yù)熱5min。血漿0.1ml加入混勻的試劑0.2ml，開動秒表計時。步驟：取空腹靜脈血1.8ml加入含有0.2ml109mmol124

正常參考值：PT：11～13秒PTR：1±0.15INR：0.8～1.5

125

報告方式：PT：X.Xs，正常人血漿X.XsPTR：X.XINR：X.X報告方式：126注意事項：試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”，抗凝劑與血液比例（1：9）應(yīng)準確。取血后4h內(nèi)完成測定。鈣凝血活酶必須標有國際敏感指數(shù)（ISI），ISI越接近于1.0越敏感。標本測定前應(yīng)先測定正常人混合血漿，其PT值在允許范圍內(nèi)才能測定樣本。注意事項：試管應(yīng)潔凈干燥，抽血應(yīng)“一針見血”，抗凝劑與血液比127評價：

血漿凝血酶原是一種篩選試驗，是用來證實先天性或獲得性纖維蛋白原、凝血酶原和凝血因子V、VII、X的缺陷或相應(yīng)抑制物的存在，也用于監(jiān)測口服抗凝治療時引起的凝血酶原和因子VII、X水平的下降。評價：血漿凝血酶原是一種篩選試驗，是用128實質(zhì)：

對檢測樣本（血漿）中存在凝血激酶時的再鈣化反應(yīng)，這種過程包括了因子VIIa、組織因子、磷脂、鈣離子對凝血酶原的活化，凝血酶裂解纖維蛋白原和纖維蛋白單體的聚集交聯(lián)。實質(zhì)：對檢測樣本（血漿）中存在凝血激酶129活化部分凝血活酶時間測定

APTT

活化部分凝血活酶時間測定

APTT130原理：用白陶土激活XII因子、腦磷脂代替血小板磷脂，測定乏血小板血漿加入Ca2++后凝固所需時間。原理：用白陶土激活XII因子、腦磷脂代替血小板磷脂，131步驟：采血空腹靜脈血1.8ml+0.2ml109mmol/L枸櫞酸鈉混勻。分離血漿3000r/min離心10分鐘分離血漿。溶解試劑臨用時加1ml蒸餾水，室溫靜置15min以上，混勻后使用。預(yù)溫活化0.1ml血漿+APTT試劑0.1ml混勻，37℃準確孵育3min（其間輕輕搖動數(shù)次）加鈣計時加入0.1ml25mmol/LCaCl2混勻并立即開動秒表計時，20s后，觀察混合液流動狀態(tài)。步驟：采血空腹靜脈血1.8ml+0.2ml109mmo132

正常參考值：一般在33.68～40.32s（不同儀器和試劑所測之參考值有差別）報告方式：APTT：XX.Xs，正常人血漿：XX.Xs正常參考值：一般在33.68～40.32s（不同儀器和試劑133注意事項：采血時穿刺盡量一針見血，不要淤血和氣泡，采血后立即與抗凝劑混合，盡快送往實驗室。使用枸櫞酸鹽（抗凝）血漿如果不能立即測試，應(yīng)盡快分離血漿，盛血漿的容器加塞，防止PH值改變血漿在2～8℃下保留7天

鈣凝血活酶必須標有國際敏感指數(shù)（ISI），ISI越接近于1.0越敏感。注意事項：采血時穿刺盡量一針見血，不要淤血和氣泡，采血后立即134臨床意義：APTT延長：表明有內(nèi)源性凝血途徑有關(guān)因子的缺陷（血友?。┖屠w維蛋白原缺乏。纖維活力增加，如繼發(fā)性，原發(fā)性纖溶以及血循環(huán)中有纖維蛋白（原）降解產(chǎn)物（FDP）。血循環(huán)中有抗凝物質(zhì)。

臨床意義：APTT延長：135

APTT縮短：高凝狀態(tài)，如DIC的高凝期，促凝物質(zhì)進入血液以及凝血因子的活性增高等。

APTT縮短：136評價：APTT和PT同時檢測是目前二期止血缺陷的主要篩選試驗組合。評價：APTT和PT同時檢測是目前二期止血缺陷的主要篩選試驗137在有臨床出血癥狀的前提下：APTTPT提示正常延長因子VII的缺陷延長正常因子VIII、IX、XI缺陷正常正常懷疑因子XIII缺陷可能延長延長除因子II、V、I、X缺陷外，主要是異常抗凝物質(zhì)的增多在有臨床出血癥狀的前提下：APTTPT138血漿復(fù)鈣時間

RT

血漿復(fù)鈣時間

RT139原理：在去鈣離子的抗凝血漿中，重新加入適量的鈣后，血漿發(fā)生凝固。原理：在去鈣離子的抗凝血漿中，重新加入適量的140步驟：0.2ml0.1mol/L草酸鈉+靜脈血1.8ml混勻，離心分離血漿。0.1ml血漿置37℃水浴中，+0.025mol/LCaCl20.1ml，立即開動秒表記錄時間。步驟：0.2ml0.1mol/L草酸鈉+靜脈血1.8ml混141

正常參考值：2.08±0.49分（2.18~3.77分鐘）正常參考值：142注意事項：不要溶血，否則時間縮短CaCl2新鮮配制分離血漿以1000轉(zhuǎn)/分為宜，高速離心可使大量血小板下沉而導(dǎo)致復(fù)鈣時間延長。注意事項：不要溶血，否則時間縮短143復(fù)鈣交叉時間

RT

復(fù)鈣交叉時間

RT144步驟：按下列比例準備5份待測血漿：加樣量12345受檢血漿（ml）－0.010.050.090.10正常血漿（ml）0.100.090.050.01－上述試管，置37℃1min，加0.025mol/LCaCl20.1ml，混勻后，記錄血漿凝固時間。步驟：按下列比例準備5份待測血漿：145注意事項：所用血漿均為富含血小板血漿，分離出血漿后需在2h內(nèi)檢測完畢。注意事項：所用血漿均為富含血小板血漿，分離出血漿后需在2h內(nèi)146臨床意義：RT最早作為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)相關(guān)凝血因子缺陷的篩選檢查，但由于這個試驗不如APTT，又容易受血小板數(shù)量和功能影響，目前只用來篩選是否存在病理性抗凝物質(zhì)增多。臨床意義：RT最早作為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)相關(guān)凝血因子缺陷的篩選檢147

延長的復(fù)鈣時間如被1/10量的正常血漿所糾正，則表示受檢血漿中缺乏內(nèi)源凝血因子；如不被少量正常血漿糾正，提示存在異常抗凝物質(zhì)。延長的復(fù)鈣時間如被1/10量的正常血漿所糾正，則表示受檢血148血漿纖維蛋白原

Fg

血漿纖維蛋白原

Fg149

纖維蛋白原的測定方法眾多，大體上分三大類：基于經(jīng)加凝血酶后，形成纖維蛋白的方法，即可凝固蛋白法。物理、化學(xué)測定法。免疫學(xué)測定法。

纖維蛋白原的測定方法眾多，大體上分三大類：150目的和原理

目的和原理151

為了解凝血途徑最后環(huán)節(jié)的狀況，排除纖維蛋白原減少、異常對凝血篩選試驗的影響，了解纖溶活動度等可選擇本試驗。為了解凝血途徑最后環(huán)節(jié)的狀況，排除纖維蛋白原減少152

Clauss法以凝血酶作用于受檢血漿中的纖維蛋白原，使其形成纖維蛋白，血液凝固。Clauss法以凝血酶作用于受檢血漿中的纖維蛋153

纖維蛋白原的量與凝固時間成負相關(guān)，檢測結(jié)果與參比血漿制成的標準曲線對比可得出纖維蛋白原的含量。纖維蛋白原的量與凝固時間成負相關(guān)，檢測結(jié)果與參比154