微生物的分離和純培養(yǎng)課件

第一節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng)第一節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)課件課程標(biāo)準(zhǔn)1．進(jìn)行微生物的分離和培養(yǎng)。2．用大腸桿菌為材料進(jìn)行平板培養(yǎng)，分離菌落。課標(biāo)解讀1．了解有關(guān)微生物及其培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)。2．理解消毒和滅菌的原理、方法，進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)的操作。3．理解微生物接種的方法步驟，進(jìn)行大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)。課程標(biāo)準(zhǔn)微生物主要包括_____、放線菌、_______、霉菌以及立克次氏體、支原體、_____等。(1)培養(yǎng)基的概念：根據(jù)微生物__________和_____的需要，將各種_________混合在一起，配制成適合微生物生存的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)——培養(yǎng)基。微生物分離與純培養(yǎng)的基本方法與原理1．微生物的種類(lèi)2．培養(yǎng)基細(xì)菌酵母菌病毒生長(zhǎng)繁殖代謝營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)微生物分離與純培養(yǎng)的基本方法與原理1．微生物的種類(lèi)2．培養(yǎng)基(2)平板培養(yǎng)基將溶化后的_____培養(yǎng)基基質(zhì)倒入___________，__________后制成的培養(yǎng)基稱(chēng)為平板培養(yǎng)基。(1)接種的概念：把相應(yīng)的_________移入培養(yǎng)基中的過(guò)程稱(chēng)為接種。(2)接種的方法：在平板培養(yǎng)基上的接種方法有____________、______________、稀釋混合平板法。(3)純培養(yǎng)的概念：將所需要的微生物從__________________中分離出來(lái)，獲得_____微生物的過(guò)程稱(chēng)為純培養(yǎng)。3．接種固體無(wú)菌培養(yǎng)皿冷卻凝研究對(duì)象平板劃線稀釋涂布平板法混雜的微生物群純種固法體(2)平板培養(yǎng)基3．接種固體無(wú)菌培養(yǎng)皿冷卻凝研究對(duì)象平板劃線(1)采用無(wú)菌技術(shù)的原因與要求①原因：在微生物的分離和純培養(yǎng)中，一定不能有__________________。②要求：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，要對(duì)所用的器材、培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格的_____，對(duì)工作場(chǎng)所進(jìn)行_____。(2)滅菌和消毒①滅菌是指用強(qiáng)烈的_________殺死環(huán)境或物體內(nèi)外_____的微生物，常用的是_________法。②消毒一般是用_________的理化方法殺死環(huán)境或物體上的___________和_____________________，常用的是_____消毒法和_________消毒法。4．無(wú)菌技術(shù)外來(lái)的滅菌消毒理化因素所有高溫滅菌相對(duì)溫和病原微生物有害微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞射線化學(xué)藥劑污染性雜菌4．無(wú)菌技術(shù)外來(lái)的滅菌消毒理化因素所有高溫滅菌相對(duì)溫和病原微

用酒精擦拭實(shí)驗(yàn)者手臂屬消毒還是滅菌？70%與95%的酒精，哪一種效果更好？為什么？提示酒精擦拭屬化學(xué)消毒。酒精消毒時(shí)，70%的酒精殺菌效果最好。原因是：濃度過(guò)高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過(guò)低，殺菌力減弱。[思維激活1] 用酒精擦拭實(shí)驗(yàn)者手臂屬消毒還是滅菌？70%與95(1)定義形體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，通常要用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡才能看清楚的生物，統(tǒng)稱(chēng)為微生物。(2)微生物的類(lèi)群①原核生物：細(xì)菌、放線菌、立克次氏體、支原體等。②部分真核生物：酵母菌、霉菌、大型真菌(如蘑菇)等。③非細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物：病毒、類(lèi)病毒等。(3)微生物的化學(xué)成分與營(yíng)養(yǎng)需求微生物的化學(xué)組成與其他生物大體相同，也是主要由C、H、O、N、P、S等大量元素和Fe、Mn、Cu、Zn、Mo等1．微生物1．微生物微量元素組成，這些元素最終來(lái)自外界環(huán)境中各種有機(jī)物和無(wú)機(jī)物，可歸納為碳源(主要提供C元素)、氮源(主要提供N元素)、水(提供H、O)、無(wú)機(jī)鹽(提供大量元素和微量元素)和生長(zhǎng)因子五大類(lèi)。(4)代謝類(lèi)型與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的關(guān)系自養(yǎng)型微生物和異養(yǎng)型微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)比較：微量元素組成，這些元素最終來(lái)自外界環(huán)境中各種有機(jī)物和無(wú)機(jī)物，(1)培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基中一般含有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、生長(zhǎng)因子五大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(2)碳源、氮源及生長(zhǎng)因子的來(lái)源與功能比較2.培養(yǎng)基的成分2.培養(yǎng)基的成分微生物的分離和純培養(yǎng)課件培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，可以從不同的角度進(jìn)行分類(lèi)。(1)按照物理性質(zhì)分類(lèi)3.培養(yǎng)基的種類(lèi)特別提醒平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基的一種。3.培養(yǎng)基的種類(lèi)特別提醒平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基的一種。(2)按照培養(yǎng)基的用途分類(lèi)(2)按照培養(yǎng)基的用途分類(lèi)(3)按照培養(yǎng)基的化學(xué)成分分類(lèi)特別提醒天然培養(yǎng)基成分不明確，造價(jià)低；合成培養(yǎng)基成分明確，價(jià)格高。(3)按照培養(yǎng)基的化學(xué)成分分類(lèi)特別提醒天然培養(yǎng)基成分不明確4．消毒和滅菌的區(qū)別特別提醒實(shí)驗(yàn)后所有用過(guò)的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液都要統(tǒng)一進(jìn)行高壓蒸汽滅菌后再丟棄，否則會(huì)造成環(huán)境污染。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定不可吃東西、喝水；離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被微生物感染。4．消毒和滅菌的區(qū)別特別提醒實(shí)驗(yàn)后所有用過(guò)的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液

下列說(shuō)法正確的是 (

)。A．培養(yǎng)基是為微生物的生長(zhǎng)繁殖提供營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì)B．培養(yǎng)基只有兩類(lèi)：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基C．除水以外的無(wú)機(jī)物只能提供無(wú)機(jī)鹽D．無(wú)機(jī)氮源不可能提供能量解析本題主要考查了微生物培養(yǎng)中培養(yǎng)基的含義、類(lèi)型、營(yíng)養(yǎng)等方面的知識(shí)。根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)，可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，在液體培養(yǎng)基中加入不同量的凝固劑如瓊脂可形成半固體或固體培養(yǎng)基；除水以外的無(wú)機(jī)物如NH4HCO3，既可以是碳源，也可以是氮源，不僅僅提供無(wú)機(jī)鹽；無(wú)機(jī)氮源有時(shí)也能提供能量，如NH3可以為硝化細(xì)菌提供能量。答案

A【鞏固1】 下列說(shuō)法正確的是 ()?！眷柟?】_________________培養(yǎng)基。采用_______________進(jìn)行接種。劃線的方法包括___________和___________。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，將培養(yǎng)皿______，放入_________________中培養(yǎng)24h。大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)1．培養(yǎng)基類(lèi)型2．接種3．培養(yǎng)牛肉膏蛋白胨瓊脂平板劃線分離法連續(xù)劃線法交叉劃線法倒置37℃的恒溫培養(yǎng)箱大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)1．培養(yǎng)基類(lèi)型2．接種3．培養(yǎng)牛肉膏蛋挑取_____大腸桿菌菌落接種到培養(yǎng)基上，仍在_________________中培養(yǎng)24h，可獲得大腸桿菌的_______。檢查后如果發(fā)現(xiàn)有雜菌，可進(jìn)一步_________，直至_____。大多數(shù)微生物適宜生長(zhǎng)的溫度是_______℃之間，實(shí)驗(yàn)室中常采用_______℃培養(yǎng)微生物。一般的細(xì)菌適合于___性環(huán)境生長(zhǎng)，放線菌適合于_____性環(huán)境，酵母菌和霉菌適合于_____性環(huán)境。4．純化培養(yǎng)5．微生物的培養(yǎng)條件單個(gè)37℃恒純培養(yǎng)劃線挑菌純化25～4028～30中偏堿微酸溫培養(yǎng)箱4．純化培養(yǎng)5．微生物的培養(yǎng)條件單個(gè)37℃恒純培養(yǎng)劃線挑菌

微生物接種技術(shù)中最核心的內(nèi)容是什么？提示所有微生物接種方法中最核心的內(nèi)容是防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。[思維激活2] 微生物接種技術(shù)中最核心的內(nèi)容是什么？[思維激(1)名稱(chēng)牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。(2)主要成分與作用1．培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基1．培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基(3)類(lèi)型牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，從物理狀態(tài)上看，屬于固體培養(yǎng)基且是平板培養(yǎng)基；從功能用途上看，屬于基礎(chǔ)培養(yǎng)基；從化學(xué)成分上看，屬于天然培養(yǎng)基。(1)接種前的準(zhǔn)備工作將所用的實(shí)驗(yàn)器材全部放入超凈工作臺(tái)或無(wú)菌箱(室)，用紫外燈照射30min。進(jìn)入無(wú)菌室前，要用消毒液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%的酒精)清潔雙手，還需換好工作服、鞋、帽，戴上口罩。(2)接種環(huán)滅菌將接種環(huán)環(huán)端在酒精燈火焰上燒紅，再將接種環(huán)斜放，沿環(huán)向上，燒至可能碰到培養(yǎng)皿的部分。來(lái)回?cái)?shù)次。2．接種大腸桿菌(3)類(lèi)型2．接種大腸桿菌(3)試管口滅菌在酒精燈火焰附近冷卻接種環(huán)。左手拿取混合菌液試管，讓試管口緩緩?fù)ㄟ^(guò)火焰滅菌。(4)沾取混合菌液將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，沾取一環(huán)混合菌液。(5)接種左手持培養(yǎng)皿并開(kāi)啟一條縫隙，右手將接種環(huán)迅速伸入平板，進(jìn)行劃線。劃線的方法包括連續(xù)劃線法和交叉劃線法。①連續(xù)劃線法是從平板邊緣的一點(diǎn)開(kāi)始，連續(xù)作緊密的波浪式劃線。注意：a.畫(huà)線的方向應(yīng)該從一個(gè)方向開(kāi)始；b.線條要細(xì)且密；c.不要重復(fù)畫(huà)線。(3)試管口滅菌②交叉劃線法是從平板的一邊作第一次平行劃線若干條。轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，將接種環(huán)在火上灼燒并冷卻后，通過(guò)第一次劃線部分，作第二次平行劃線。同法進(jìn)行第三次、第四次劃線。特別提醒交叉劃線法操作注意事項(xiàng)：操作第一步即取菌種之前及第二次及以后每次劃線之前都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：②交叉劃線法是從平板的一邊作第一次平行劃線若干條。轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿(1)培養(yǎng)將培養(yǎng)皿倒置的原因：將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(2)觀察記錄將觀察到的大腸桿菌的菌落特征記錄于下表。3.大腸桿菌的培養(yǎng)3.大腸桿菌的培養(yǎng)特別提醒菌落及其特征：①菌落是指在固體平板培養(yǎng)基上，由單個(gè)微生物細(xì)胞或孢子生長(zhǎng)繁殖而成的具有特定形狀的、肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體。②菌落特征是鑒別微生物類(lèi)群的重要依據(jù)。如細(xì)菌菌落光滑，易與基質(zhì)脫離；放線菌菌落質(zhì)地致密，菌落較小而不致廣泛延伸；酵母菌菌落較細(xì)菌菌落大而厚；霉菌菌落較稀松，多呈絨狀、絮狀。特別提醒菌落及其特征：

下列有關(guān)平板劃線的操作正確的是 (

)。A．使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過(guò)程中不再滅菌B．打開(kāi)含菌種的試管需通過(guò)火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞C．把皿蓋打開(kāi)，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可D．最后將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)解析考查平板劃線操作。平板劃線操作時(shí)要時(shí)刻注意兩個(gè)問(wèn)題：一是防止雜菌污染；二是要盡可能地將菌種分離。答案

D【鞏固2】 下列有關(guān)平板劃線的操作正確的是 ()。

培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是 (

)。①化學(xué)消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線消毒⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤【例1】示例一無(wú)菌操作技術(shù)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思維導(dǎo)圖：深度剖析培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，需用干熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達(dá)到迅速?gòu)氐椎臏缇Ч?；?shí)驗(yàn)操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用70%的酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；牛奶為不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分可采用巴氏消毒法。答案

A思維導(dǎo)圖：深度剖析培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，需歸納提升幾種常用滅菌方法比較歸納提升幾種常用滅菌方法比較

如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?―→2―→3―→4―→5。下列操作方法正確的是 (

)?！纠?】示例二

微生物的純化培養(yǎng)A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌思維導(dǎo)圖：如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?深度剖析本題考查平板劃線的操作方法。在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在火焰上灼燒，接種時(shí)劃線操作是在火焰旁進(jìn)行。在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過(guò)培養(yǎng)即可獲得所需菌落。答案

D方法技巧兩種純化培養(yǎng)方法的比較深度剖析本題考查平板劃線的操作方法。在每次劃線前后都要對(duì)接根據(jù)某些微生物的營(yíng)養(yǎng)需求特點(diǎn)及生理生活條件，配制特定的培養(yǎng)基，進(jìn)行該微生物的分離和純培養(yǎng)。(1)無(wú)菌技術(shù)的主要操作要求①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；———探究特定微生物的分離和純培養(yǎng)———技法必備1．實(shí)驗(yàn)原理2．實(shí)驗(yàn)方法———探究特定微生物的分離和純培養(yǎng)———技法必備1．實(shí)驗(yàn)原理③為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|。(2)接種、培養(yǎng)與純化①采用平板劃線分離法進(jìn)行接種；②放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；③挑取單個(gè)該種微生物的菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)。③為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)某實(shí)驗(yàn)小組欲從土壤中篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟如下，請(qǐng)給予合理的補(bǔ)充。(1)采樣與培養(yǎng)將采集的土樣混勻后稱(chēng)取1g，置于經(jīng)過(guò)________法滅菌處理的________(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基中，28℃振蕩培養(yǎng)。(2)接種與選擇為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過(guò)高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行________處理。之后，將菌液涂布接種于以________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，30℃條件下培養(yǎng)。為避免污染，需將培養(yǎng)皿呈________狀態(tài)放置。此外，為排除其他因素的影響，提高實(shí)驗(yàn)可信度，本步驟需設(shè)計(jì)________作為空白對(duì)照。能力展示某實(shí)驗(yàn)小組欲從土壤中篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步(3)篩選與純化將適量的碘液滴加在平板中的菌落周?chē)?，如果菌落周?chē)默F(xiàn)象是________，則說(shuō)明此種菌能夠________。從平板中挑取實(shí)驗(yàn)效果明顯的目的菌株，采用________法接種于新的培養(yǎng)基平板上，可對(duì)菌株進(jìn)行進(jìn)一步的純化。解析本題主要考查微生物培養(yǎng)有關(guān)知識(shí)。(1)滅菌方法一般用高壓蒸汽滅菌，由于接下來(lái)要用涂布法接種，所以要用液體培養(yǎng)基(或者從第2小題也可以得出)。(2)減小培養(yǎng)液菌體濃度一般用稀釋方法。由于題目要求選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，所以應(yīng)該用含有淀粉為唯一碳源的培養(yǎng)基；倒置可以防止培養(yǎng)基受污染；為排除其它因素影響，需要設(shè)置未接種的空白的培養(yǎng)基作為對(duì)照組。(3)篩選與純化(3)淀粉被水解，培養(yǎng)基會(huì)出現(xiàn)透明圈的現(xiàn)象。用劃線法來(lái)培養(yǎng)，可進(jìn)一步純化菌種。答案

(1)高壓蒸汽滅菌液體(2)系列稀釋(或梯度稀釋)淀粉倒置未接種的空白培養(yǎng)基(或接種等量無(wú)菌水的培養(yǎng)基)

(3)出現(xiàn)透明圈分泌淀粉酶使淀粉發(fā)生水解平板劃線

(3)淀粉被水解，培養(yǎng)基會(huì)出現(xiàn)透明圈的現(xiàn)象。用劃線法來(lái)培養(yǎng)，下列接種操作過(guò)程中，不正確的是 (

)。A．要將接種環(huán)灼燒滅菌B．取下棉塞后要將試管口灼燒滅菌C．將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，先接觸長(zhǎng)菌多的部位D．接種后還要將試管口滅菌加塞解析接種環(huán)伸入試管后應(yīng)先接觸未長(zhǎng)菌的部位，待接種環(huán)冷卻后再接觸長(zhǎng)菌部位。答案

C1.下列接種操作過(guò)程中，不正確的是 ()。1.(廣東調(diào)研)分離純化大腸桿菌最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。下列有關(guān)這兩種方法的敘述錯(cuò)誤的是 (

)。A．均將大腸桿菌接種在固體培養(yǎng)基的表面B．獲得的每個(gè)菌落均是由一個(gè)細(xì)菌繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群C．都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行操作，以防止雜菌污染D．稀釋分散菌種的原理不同，均能達(dá)到分離純化大腸桿菌的目的解析本題考查平板劃線法和稀釋涂布平板法。用稀釋涂布平板法時(shí)，如果稀釋得當(dāng)，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。答案

B2．(廣東調(diào)研)分離純化大腸桿菌最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂下表是用于從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方。請(qǐng)回答下面的問(wèn)題。3．下表是用于從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方(1)培養(yǎng)基的類(lèi)型很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。上述培養(yǎng)基配方中能充當(dāng)碳源的成分是________和________。培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行________處理。(2)分離純化微生物最常使用的接種方法是________和________兩種。在接種過(guò)程中，接種環(huán)或涂布器的滅菌方法是____________________________________________。(3)假設(shè)某同學(xué)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上細(xì)菌數(shù)目過(guò)多地連成一片，可能的原因是什么？______________________________。(1)培養(yǎng)基的類(lèi)型很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和解析本題考查微生物培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)。牛肉膏和蛋白胨都是從天然物質(zhì)中提取出來(lái)的，都含有豐富的有機(jī)物，可以為微生物提供碳源和氮源。平板劃線法和稀釋涂布平板法都能使菌體分散開(kāi)，但是如果操作不當(dāng)，會(huì)使分離效果不理想。答案

(1)牛肉膏蛋白胨滅菌(2)平板劃線法稀釋涂布平板法灼燒滅菌(3)菌液濃度過(guò)高；培養(yǎng)過(guò)程中被雜菌污染；利用接種環(huán)劃線時(shí)，劃下一個(gè)區(qū)域前沒(méi)有對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌處理(答出一項(xiàng)即可)解析本題考查微生物培養(yǎng)的有關(guān)知識(shí)。牛肉膏和蛋白胨都是從天然課堂小結(jié)課堂小結(jié)第一節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng)第一節(jié)微生物的分離和純培養(yǎng)微生物的分離和純培養(yǎng)課件課程標(biāo)準(zhǔn)1．進(jìn)行微生物的分離和培養(yǎng)。2．用大腸桿菌為材料進(jìn)行平板培養(yǎng)，分離菌落。課標(biāo)解讀1．了解有關(guān)微生物及其培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識(shí)。2．理解消毒和滅菌的原理、方法，進(jìn)行無(wú)菌技術(shù)的操作。3．理解微生物接種的方法步驟，進(jìn)行大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)。課程標(biāo)準(zhǔn)微生物主要包括_____、放線菌、_______、霉菌以及立克次氏體、支原體、_____等。(1)培養(yǎng)基的概念：根據(jù)微生物__________和_____的需要，將各種_________混合在一起，配制成適合微生物生存的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)——培養(yǎng)基。微生物分離與純培養(yǎng)的基本方法與原理1．微生物的種類(lèi)2．培養(yǎng)基細(xì)菌酵母菌病毒生長(zhǎng)繁殖代謝營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)微生物分離與純培養(yǎng)的基本方法與原理1．微生物的種類(lèi)2．培養(yǎng)基(2)平板培養(yǎng)基將溶化后的_____培養(yǎng)基基質(zhì)倒入___________，__________后制成的培養(yǎng)基稱(chēng)為平板培養(yǎng)基。(1)接種的概念：把相應(yīng)的_________移入培養(yǎng)基中的過(guò)程稱(chēng)為接種。(2)接種的方法：在平板培養(yǎng)基上的接種方法有____________、______________、稀釋混合平板法。(3)純培養(yǎng)的概念：將所需要的微生物從__________________中分離出來(lái)，獲得_____微生物的過(guò)程稱(chēng)為純培養(yǎng)。3．接種固體無(wú)菌培養(yǎng)皿冷卻凝研究對(duì)象平板劃線稀釋涂布平板法混雜的微生物群純種固法體(2)平板培養(yǎng)基3．接種固體無(wú)菌培養(yǎng)皿冷卻凝研究對(duì)象平板劃線(1)采用無(wú)菌技術(shù)的原因與要求①原因：在微生物的分離和純培養(yǎng)中，一定不能有__________________。②要求：在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，要對(duì)所用的器材、培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格的_____，對(duì)工作場(chǎng)所進(jìn)行_____。(2)滅菌和消毒①滅菌是指用強(qiáng)烈的_________殺死環(huán)境或物體內(nèi)外_____的微生物，常用的是_________法。②消毒一般是用_________的理化方法殺死環(huán)境或物體上的___________和_____________________，常用的是_____消毒法和_________消毒法。4．無(wú)菌技術(shù)外來(lái)的滅菌消毒理化因素所有高溫滅菌相對(duì)溫和病原微生物有害微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞射線化學(xué)藥劑污染性雜菌4．無(wú)菌技術(shù)外來(lái)的滅菌消毒理化因素所有高溫滅菌相對(duì)溫和病原微

用酒精擦拭實(shí)驗(yàn)者手臂屬消毒還是滅菌？70%與95%的酒精，哪一種效果更好？為什么？提示酒精擦拭屬化學(xué)消毒。酒精消毒時(shí)，70%的酒精殺菌效果最好。原因是：濃度過(guò)高，使菌體表面蛋白質(zhì)凝固成一層保護(hù)膜，乙醇分子不能滲入其中；濃度過(guò)低，殺菌力減弱。[思維激活1] 用酒精擦拭實(shí)驗(yàn)者手臂屬消毒還是滅菌？70%與95(1)定義形體微小，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，通常要用光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡才能看清楚的生物，統(tǒng)稱(chēng)為微生物。(2)微生物的類(lèi)群①原核生物：細(xì)菌、放線菌、立克次氏體、支原體等。②部分真核生物：酵母菌、霉菌、大型真菌(如蘑菇)等。③非細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物：病毒、類(lèi)病毒等。(3)微生物的化學(xué)成分與營(yíng)養(yǎng)需求微生物的化學(xué)組成與其他生物大體相同，也是主要由C、H、O、N、P、S等大量元素和Fe、Mn、Cu、Zn、Mo等1．微生物1．微生物微量元素組成，這些元素最終來(lái)自外界環(huán)境中各種有機(jī)物和無(wú)機(jī)物，可歸納為碳源(主要提供C元素)、氮源(主要提供N元素)、水(提供H、O)、無(wú)機(jī)鹽(提供大量元素和微量元素)和生長(zhǎng)因子五大類(lèi)。(4)代謝類(lèi)型與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的關(guān)系自養(yǎng)型微生物和異養(yǎng)型微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)比較：微量元素組成，這些元素最終來(lái)自外界環(huán)境中各種有機(jī)物和無(wú)機(jī)物，(1)培養(yǎng)基的成分培養(yǎng)基中一般含有水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、生長(zhǎng)因子五大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(2)碳源、氮源及生長(zhǎng)因子的來(lái)源與功能比較2.培養(yǎng)基的成分2.培養(yǎng)基的成分微生物的分離和純培養(yǎng)課件培養(yǎng)基的種類(lèi)很多，可以從不同的角度進(jìn)行分類(lèi)。(1)按照物理性質(zhì)分類(lèi)3.培養(yǎng)基的種類(lèi)特別提醒平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基的一種。3.培養(yǎng)基的種類(lèi)特別提醒平板培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基的一種。(2)按照培養(yǎng)基的用途分類(lèi)(2)按照培養(yǎng)基的用途分類(lèi)(3)按照培養(yǎng)基的化學(xué)成分分類(lèi)特別提醒天然培養(yǎng)基成分不明確，造價(jià)低；合成培養(yǎng)基成分明確，價(jià)格高。(3)按照培養(yǎng)基的化學(xué)成分分類(lèi)特別提醒天然培養(yǎng)基成分不明確4．消毒和滅菌的區(qū)別特別提醒實(shí)驗(yàn)后所有用過(guò)的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液都要統(tǒng)一進(jìn)行高壓蒸汽滅菌后再丟棄，否則會(huì)造成環(huán)境污染。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定不可吃東西、喝水；離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室時(shí)一定要洗手，以防止被微生物感染。4．消毒和滅菌的區(qū)別特別提醒實(shí)驗(yàn)后所有用過(guò)的培養(yǎng)基、培養(yǎng)液

下列說(shuō)法正確的是 (

)。A．培養(yǎng)基是為微生物的生長(zhǎng)繁殖提供營(yíng)養(yǎng)的基質(zhì)B．培養(yǎng)基只有兩類(lèi)：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基C．除水以外的無(wú)機(jī)物只能提供無(wú)機(jī)鹽D．無(wú)機(jī)氮源不可能提供能量解析本題主要考查了微生物培養(yǎng)中培養(yǎng)基的含義、類(lèi)型、營(yíng)養(yǎng)等方面的知識(shí)。根據(jù)培養(yǎng)基的物理性質(zhì)，可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，在液體培養(yǎng)基中加入不同量的凝固劑如瓊脂可形成半固體或固體培養(yǎng)基；除水以外的無(wú)機(jī)物如NH4HCO3，既可以是碳源，也可以是氮源，不僅僅提供無(wú)機(jī)鹽；無(wú)機(jī)氮源有時(shí)也能提供能量，如NH3可以為硝化細(xì)菌提供能量。答案

A【鞏固1】 下列說(shuō)法正確的是 ()。【鞏固1】_________________培養(yǎng)基。采用_______________進(jìn)行接種。劃線的方法包括___________和___________。劃線完畢后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，將培養(yǎng)皿______，放入_________________中培養(yǎng)24h。大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)1．培養(yǎng)基類(lèi)型2．接種3．培養(yǎng)牛肉膏蛋白胨瓊脂平板劃線分離法連續(xù)劃線法交叉劃線法倒置37℃的恒溫培養(yǎng)箱大腸桿菌的分離和純培養(yǎng)1．培養(yǎng)基類(lèi)型2．接種3．培養(yǎng)牛肉膏蛋挑取_____大腸桿菌菌落接種到培養(yǎng)基上，仍在_________________中培養(yǎng)24h，可獲得大腸桿菌的_______。檢查后如果發(fā)現(xiàn)有雜菌，可進(jìn)一步_________，直至_____。大多數(shù)微生物適宜生長(zhǎng)的溫度是_______℃之間，實(shí)驗(yàn)室中常采用_______℃培養(yǎng)微生物。一般的細(xì)菌適合于___性環(huán)境生長(zhǎng)，放線菌適合于_____性環(huán)境，酵母菌和霉菌適合于_____性環(huán)境。4．純化培養(yǎng)5．微生物的培養(yǎng)條件單個(gè)37℃恒純培養(yǎng)劃線挑菌純化25～4028～30中偏堿微酸溫培養(yǎng)箱4．純化培養(yǎng)5．微生物的培養(yǎng)條件單個(gè)37℃恒純培養(yǎng)劃線挑菌

微生物接種技術(shù)中最核心的內(nèi)容是什么？提示所有微生物接種方法中最核心的內(nèi)容是防止雜菌污染，保證培養(yǎng)物的純度。[思維激活2] 微生物接種技術(shù)中最核心的內(nèi)容是什么？[思維激(1)名稱(chēng)牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基。(2)主要成分與作用1．培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基1．培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基(3)類(lèi)型牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基，從物理狀態(tài)上看，屬于固體培養(yǎng)基且是平板培養(yǎng)基；從功能用途上看，屬于基礎(chǔ)培養(yǎng)基；從化學(xué)成分上看，屬于天然培養(yǎng)基。(1)接種前的準(zhǔn)備工作將所用的實(shí)驗(yàn)器材全部放入超凈工作臺(tái)或無(wú)菌箱(室)，用紫外燈照射30min。進(jìn)入無(wú)菌室前，要用消毒液(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%的酒精)清潔雙手，還需換好工作服、鞋、帽，戴上口罩。(2)接種環(huán)滅菌將接種環(huán)環(huán)端在酒精燈火焰上燒紅，再將接種環(huán)斜放，沿環(huán)向上，燒至可能碰到培養(yǎng)皿的部分。來(lái)回?cái)?shù)次。2．接種大腸桿菌(3)類(lèi)型2．接種大腸桿菌(3)試管口滅菌在酒精燈火焰附近冷卻接種環(huán)。左手拿取混合菌液試管，讓試管口緩緩?fù)ㄟ^(guò)火焰滅菌。(4)沾取混合菌液將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，沾取一環(huán)混合菌液。(5)接種左手持培養(yǎng)皿并開(kāi)啟一條縫隙，右手將接種環(huán)迅速伸入平板，進(jìn)行劃線。劃線的方法包括連續(xù)劃線法和交叉劃線法。①連續(xù)劃線法是從平板邊緣的一點(diǎn)開(kāi)始，連續(xù)作緊密的波浪式劃線。注意：a.畫(huà)線的方向應(yīng)該從一個(gè)方向開(kāi)始；b.線條要細(xì)且密；c.不要重復(fù)畫(huà)線。(3)試管口滅菌②交叉劃線法是從平板的一邊作第一次平行劃線若干條。轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿約70°角，將接種環(huán)在火上灼燒并冷卻后，通過(guò)第一次劃線部分，作第二次平行劃線。同法進(jìn)行第三次、第四次劃線。特別提醒交叉劃線法操作注意事項(xiàng)：操作第一步即取菌種之前及第二次及以后每次劃線之前都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒接種環(huán)，每次灼燒目的如下表：②交叉劃線法是從平板的一邊作第一次平行劃線若干條。轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿(1)培養(yǎng)將培養(yǎng)皿倒置的原因：將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。(2)觀察記錄將觀察到的大腸桿菌的菌落特征記錄于下表。3.大腸桿菌的培養(yǎng)3.大腸桿菌的培養(yǎng)特別提醒菌落及其特征：①菌落是指在固體平板培養(yǎng)基上，由單個(gè)微生物細(xì)胞或孢子生長(zhǎng)繁殖而成的具有特定形狀的、肉眼可見(jiàn)的子細(xì)胞群體。②菌落特征是鑒別微生物類(lèi)群的重要依據(jù)。如細(xì)菌菌落光滑，易與基質(zhì)脫離；放線菌菌落質(zhì)地致密，菌落較小而不致廣泛延伸；酵母菌菌落較細(xì)菌菌落大而厚；霉菌菌落較稀松，多呈絨狀、絮狀。特別提醒菌落及其特征：

下列有關(guān)平板劃線的操作正確的是 (

)。A．使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操作過(guò)程中不再滅菌B．打開(kāi)含菌種的試管需通過(guò)火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞C．把皿蓋打開(kāi)，將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可D．最后將平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)解析考查平板劃線操作。平板劃線操作時(shí)要時(shí)刻注意兩個(gè)問(wèn)題：一是防止雜菌污染；二是要盡可能地將菌種分離。答案

D【鞏固2】 下列有關(guān)平板劃線的操作正確的是 ()。

培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是 (

)。①化學(xué)消毒②灼燒滅菌③干熱滅菌④紫外線消毒⑤高壓蒸汽滅菌⑥巴氏消毒法A．⑤③②①④⑥B．①②③④⑤⑥C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤【例1】示例一無(wú)菌操作技術(shù)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思維導(dǎo)圖：深度剖析培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，需用干熱滅菌；接種環(huán)可用灼燒滅菌達(dá)到迅速?gòu)氐椎臏缇Ч?；?shí)驗(yàn)操作者的雙手可用化學(xué)藥劑進(jìn)行消毒，如用70%的酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；牛奶為不破壞其營(yíng)養(yǎng)成分可采用巴氏消毒法。答案

A思維導(dǎo)圖：深度剖析培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌；培養(yǎng)皿能耐高溫，需歸納提升幾種常用滅菌方法比較歸納提升幾種常用滅菌方法比較

如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?―→2―→3―→4―→5。下列操作方法正確的是 (

)?！纠?】示例二

微生物的純化培養(yǎng)A．操作前要將接種環(huán)放在火焰邊灼燒滅菌B．劃線操作須在火焰上進(jìn)行C．在5區(qū)域中才可以得到所需菌落D．在1、2、3、4、5區(qū)域中劃線前后都要對(duì)接種環(huán)滅菌思維導(dǎo)圖：如圖是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序?yàn)?深度剖析本題考查平板劃線的操作方法。在每次劃線前后都要對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌，接種環(huán)的滅菌方法應(yīng)是在火焰上灼燒，接種時(shí)劃線操作是在火焰旁進(jìn)行。在5個(gè)區(qū)域中，只要有單個(gè)活細(xì)菌，通過(guò)培養(yǎng)即可獲得所需菌落。答案

D方法技巧兩種純化培養(yǎng)方法的比較深度剖析本題考查平板劃線的操作方法。在每次劃線前后都要對(duì)接根據(jù)某些微生物的營(yíng)養(yǎng)需求特點(diǎn)及生理生活條件，配制特定的培養(yǎng)基，進(jìn)行該微生物的分離和純培養(yǎng)。(1)無(wú)菌技術(shù)的主要操作要求①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒；②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌；———探究特定微生物的分離和純培養(yǎng)———技法必備1．實(shí)驗(yàn)原理2．實(shí)驗(yàn)方法———探究特定微生物的分離和純培養(yǎng)———技法必備1．實(shí)驗(yàn)原理③為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|。(2)接種、培養(yǎng)與純化①采用平板劃線分離法進(jìn)行接種；②放入恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)；③挑取單個(gè)該種微生物的菌落進(jìn)行純化培養(yǎng)。③為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)某實(shí)驗(yàn)小組欲從土壤中篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟如下，請(qǐng)給予合理的補(bǔ)充。(1)采樣與培養(yǎng)將采集的土樣混勻后稱(chēng)取1g，置于經(jīng)過(guò)________法滅菌處理的________(填“固體”或“液體”)培養(yǎng)基中，28℃振蕩培養(yǎng)。(2)接種與選擇為避免培養(yǎng)液中菌體濃度過(guò)高，需將培養(yǎng)液進(jìn)行________處理。之后，將菌液涂布接種于以________為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，30℃條件下培養(yǎng)。為避免污染，需將培養(yǎng)皿呈________狀態(tài)放置。此外，為排除其他因素的影響，提高實(shí)驗(yàn)可信度，本步驟需設(shè)計(jì)________作為空白對(duì)照。能力展示某實(shí)驗(yàn)小組欲從土壤中篩選出能分泌淀粉酶的芽孢桿菌，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步(3)篩選與純化將適量的碘液滴加在平板中的菌落周?chē)?，如果菌落周?chē)默F(xiàn)象是________，則說(shuō)明此種菌能夠________。從平板中挑取實(shí)驗(yàn)效果明顯的目的菌株，采用________法接種于新的培養(yǎng)基平板上，可對(duì)菌株進(jìn)行進(jìn)