植物檢疫技術(shù)課件

第四章檢疫性有害生物（病原菌）檢驗(yàn)檢測(cè)技術(shù)

病原真菌病原細(xì)菌病原病毒病原線蟲目的：發(fā)現(xiàn)、檢出和鑒定有害生物，作為出證或檢疫處理的依據(jù)方式：現(xiàn)場(chǎng)檢查、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)對(duì)檢疫檢驗(yàn)技術(shù)的要求①準(zhǔn)確可靠，靈敏高度，能檢出低量有害生物；②快速、簡(jiǎn)單、方便易行；③有標(biāo)準(zhǔn)化的操作規(guī)程，檢驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性好④安全，不擴(kuò)散有害生物。樣品數(shù)量（容量）大小依據(jù)有害生物的帶有率;檢驗(yàn)方法的靈敏度;檢驗(yàn)所要求的精度;貨物種類與特點(diǎn);檢驗(yàn)所允許的時(shí)間和花費(fèi)等許多因素確定。有害生物的帶有率越低，檢驗(yàn)方法的靈敏度越低，檢驗(yàn)精度要求越高，所需樣品數(shù)量就越多。第一節(jié)植物病原真菌的檢疫檢疫技術(shù)病原真菌的屬、種主要依據(jù)其形態(tài)特征鑒定，有時(shí)形態(tài)相似的近似種類需接種寄主，測(cè)定其致病性。鑒定病原真菌?；秃托》N，也需接種鑒別寄主。除洗滌檢驗(yàn)法的檢驗(yàn)結(jié)果用單位重量種子的孢子負(fù)載量表示外，其它檢驗(yàn)方法都能獲得帶菌百分率或發(fā)病百分率。一、直接檢驗(yàn)

二、過篩檢驗(yàn)

檢驗(yàn)糧谷、種子、油料、干果和生藥材，檢驗(yàn)病粒，菌嬰、菌核、病殘?bào)w等種子過篩后可檢出夾雜的菌癭、菌核、病株殘屑和土壤，都需仔細(xì)鑒別。小麥矮腥黑穗病的菌嬰四、染色檢驗(yàn)法

某些植物或植物器官被病原感染后，或某些病原菌本身，?？捎锰厥獾幕瘜W(xué)藥品處理，使其染上特有顏色，利于檢出和區(qū)分病蟲種類

影響洗滌檢驗(yàn)的因素種子或其他糧谷類產(chǎn)品表面所黏附的病菌孢子不一定能完全洗滌下來;離心管內(nèi)容已形成一層極難沉降的孢子薄膜。管壁也可能黏附孢子;視野內(nèi)孢子分布不均勻;操作不規(guī)范，不嚴(yán)格。

七、分離培養(yǎng)檢驗(yàn)主要應(yīng)用于檢驗(yàn)潛伏于種子、苗木或其他之物產(chǎn)品內(nèi)部，不易發(fā)現(xiàn)和鑒定的病原菌；當(dāng)種子、苗木或其他植物產(chǎn)品上雖有病斑，但無特殊的病原菌可供鑒定的場(chǎng)合。第二節(jié)病原細(xì)菌的檢疫檢驗(yàn)技術(shù)

植物細(xì)菌病害有軟腐、環(huán)腐、萎蔫、潰瘍、瘡痂、枝枯、葉斑、組織增生（癭瘤、發(fā)根）等多種癥狀。葉片上病斑常呈水漬狀，上有細(xì)菌溢膿。病部切片鏡檢可見細(xì)菌溢。田間診斷――了解病害和寄主的群體特征，即病害在田間發(fā)生的情況，以及當(dāng)?shù)氐淖魑镌耘嗉案髑闆r。初步診斷――通過肉眼觀察植株的癥狀、病原分泌物以及鏡檢觀察。例如水稻細(xì)菌性條斑病－取一小塊病葉組織，低倍鏡下觀察，微管束有噴菌現(xiàn)象。

進(jìn)一步診斷

分離培養(yǎng)：選擇新鮮的病斑或病鍵組織交界處――表面消毒――清水洗凈――碾碎稀釋――劃線培養(yǎng)――觀察致病性測(cè)定：目的是區(qū)分致病性細(xì)菌和腐生菌。

過敏性反應(yīng)(Hypersensitivereaction,HR)是指病原細(xì)菌在非寄主植物上引起枯斑反應(yīng)的現(xiàn)象，腐生性細(xì)菌則不表現(xiàn)典型的枯斑。操作：細(xì)菌溢膿或分離純化細(xì)菌――自然或人工接種――觀察針刺接種法接種甘藍(lán)葉片中肋如確系該菌，則接種部位軟腐、維管束褐變切片置于1.5％水瓊脂平板上，在28℃和黑暗條件下培養(yǎng)3d生理生化及快速測(cè)定法生化測(cè)定試劑盒：Biolog測(cè)定：酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)(ELISA)--酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(Enzymelinkedimmunologyassay,ELISA)是把抗原、抗體的免疫反應(yīng)和酶的高效催化反應(yīng)有機(jī)結(jié)合而發(fā)展起來的一種綜合技術(shù)。血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)ELISA的測(cè)定方法:直接法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法、酶抗酶法、雙夾心法、雙抗體夾心法等6種。ELISA的特征:靈敏度高，特異性強(qiáng)，安全、快速并易觀察。它可進(jìn)行定性定量測(cè)定，適于大批量樣品的檢查、可用于病害普查，口岸檢疫和產(chǎn)地檢疫等。免疫熒光技術(shù)分子檢測(cè)技術(shù)特異性基因或DNA序列用于檢測(cè)病原菌分子檢測(cè)試劑盒生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)

鑒別寄主檢測(cè)--以鑒別寄主反應(yīng)或指示植物為依據(jù)的方法。曾廣泛運(yùn)用，目前卻由于其檢測(cè)速度慢、受環(huán)境和季節(jié)影響較大等諸多因素限制，而運(yùn)用較少。電了顯微鏡觀察目前通常認(rèn)為運(yùn)用負(fù)染和超薄切片電鏡觀察能診斷和鑒別植物病毒，一般可診斷到屬的水平。免疫學(xué)檢測(cè)法快速免疫濾紙測(cè)定法(Rapidimmunoafterpaperassay,RIPA)免疫膠體金技術(shù)(Immune

colloidal

gold

technique)分子生物學(xué)檢測(cè)方法

多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)分子信標(biāo)(Molecularbeacon)雜交誘捕PCR-ELISA原理實(shí)時(shí)熒光PCR原理

核酸斑點(diǎn)雜交技術(shù)分子生物學(xué)和免疫學(xué)相結(jié)合檢測(cè)方法免疫捕獲反轉(zhuǎn)錄PCR（ImmunocapturereversetranscriptPCR,IC-RT-PCR）第四節(jié)植物病原線蟲的檢疫檢驗(yàn)技術(shù)植物病原線蟲是軀體很小，而內(nèi)部又有各種較復(fù)雜器官的低等動(dòng)物，再加上其一些特殊的分布和生物學(xué)習(xí)性等，檢測(cè)方法有所不同。罹病樣品的采集及保存方法罹病植物――采集有明顯癥狀的地上或地下部分土壤樣本――20－30cm耕作層的土壤，定點(diǎn)或棋盤式多點(diǎn)采樣。保存方法――所有材料均應(yīng)裝入塑料袋中保濕，及時(shí)分離或4度低溫保存。植物寄生線蟲的各種分離方法直接解剖法--內(nèi)生線蟲在體視顯微鏡下用解剖針直接解剖病組織簡(jiǎn)易貝爾曼漏斗法:分離少量植物材料中有活動(dòng)能力的線蟲。浸入漏斗12h清洗材料切成小段收集線蟲裹紗布淺盤法卡勃過篩分離法――本法用于從大量土壤中分離各類線蟲。檢疫性線蟲的一般檢驗(yàn)程序及注意事項(xiàng)程序：根據(jù)習(xí)性進(jìn)行分離殺死和固定制作玻片顯微測(cè)量線蟲的主要特征種內(nèi)鑒定――查閱文獻(xiàn)，結(jié)合主要特征鑒定。A幼蟲B.幼蟲頭部C.幼蟲側(cè)區(qū)D.二齡幼蟲體前部E.雄蟲體前部F.雄蟲尾部注意事項(xiàng)正確判別玻片種線蟲的體位――前提群體的概念――同一種線蟲，因寄主、營(yíng)養(yǎng)及環(huán)境條件的變化，種內(nèi)蟲體間有一定的變異范圍。因此，要仔細(xì)觀察，測(cè)量較多的數(shù)量，防治把種內(nèi)變異鑒定位不同的種。