免疫學(xué)檢測技術(shù)基本原理課件

2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院1免疫診斷抗原或抗體的檢測免疫細(xì)胞的檢測免疫檢測方法的應(yīng)用2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院1免疫診2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)特異性可見性可逆性2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2抗原抗2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院3影響抗原抗體反應(yīng)的其它因素電解質(zhì)酸堿度溫度2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院3影響抗2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院4抗原-抗體反應(yīng)的基本檢測方法根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應(yīng)的現(xiàn)象、參與反應(yīng)的成分因素，可將抗原抗體反應(yīng)分為凝集反應(yīng)(agglutination)沉淀反應(yīng)(precipitation)

補(bǔ)體參與的反應(yīng)采用標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)等2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院4抗原-2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院5凝集反應(yīng)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院5凝集反2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院6沉淀反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，此類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)；多用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散或免疫擴(kuò)散。即可溶性抗原與抗體在凝膠中擴(kuò)散，在比例合適處相遇時(shí)形成可見的白色沉淀2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院6沉淀反2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院7單向免疫擴(kuò)散

(singleimmunodiffusion)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院7單向免2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院8雙向免疫擴(kuò)散

(doubleimmunodiffusion)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院8雙向免2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院9免疫電泳(immunoelectrophoresis)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院9免疫電2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院10對流免疫電泳2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院10對流2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院11免疫比濁(immunonephelometry)在一定量抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時(shí)間形成免疫復(fù)合物，液體混濁。用濁度計(jì)測量反應(yīng)液體的濁度，復(fù)合物形成越多則濁度越高，可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依據(jù)反應(yīng)液體的濁度推算樣品中抗原含量。2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院11免疫2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院12補(bǔ)體參與的反應(yīng)應(yīng)用抗體與紅細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，激活反應(yīng)體系中的補(bǔ)體成份，能導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，則可根據(jù)溶血現(xiàn)象判定試驗(yàn)結(jié)果。如溶血空斑試驗(yàn)、HLA的血清學(xué)分型等2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院12補(bǔ)體2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院13采用標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)指用熒光素、酶或放射性核素、膠體金等標(biāo)記抗體或抗原，進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)，是目前應(yīng)用最為廣泛的免疫學(xué)檢測技術(shù)。標(biāo)記物與抗體或抗原連接后并不改變后者的免疫特性，具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)點(diǎn)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院13采用2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院14

免疫熒光法(immunofluorescence,IF)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院14免2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院15酶免疫測定(enzymeimmunoassay,EIA)將抗原-抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后的顯色反應(yīng)判定結(jié)果?？捎媚繙y定性，也可用酶標(biāo)測定儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量，靈敏度可達(dá)每毫升ng甚至pg水平。常用于標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)、堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)等。2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院15酶免2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院16酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院16酶聯(lián)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院17其它常用標(biāo)記方法放射免疫測定法(radioimmunoassay,RIA)

化學(xué)發(fā)光免疫分析：將發(fā)光物質(zhì)（如吖啶酯、魯米諾等）標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng)，發(fā)光物質(zhì)在反應(yīng)劑（如過氧化陰離子）激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子，用自動(dòng)發(fā)光分析儀接收光信號(hào)，測定光子產(chǎn)量，以反映待檢樣品中抗體或抗原含量。免疫膠體金法2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院17其它A\B分別粘貼吸水材料，免疫金復(fù)合物干片粘貼在近下端C處，緊貼其上為硝酸纖維素膜條A\B分別粘貼吸水材料，免疫金復(fù)合物干片粘貼在近下端C處，緊2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院19免疫印跡法(Westernblot)將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合，將通過電泳所區(qū)分的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體，再借助酶免疫、放射免疫等技術(shù)進(jìn)行測定。第一步，SDS第二步，將通過電泳而分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印至硝酸纖維膜上（電轉(zhuǎn)印法）第三步，類似ELISA2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院19免疫CEMSDSAdditionofSDSEMCProteinbecomesrod-shapedwithuniformchargedistributionCEMSDS-PA2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院21免疫細(xì)胞的檢測免疫細(xì)胞的鑒定分離免疫細(xì)胞功能的測定2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院21免疫流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry，F(xiàn)CM)是借助熒光活化細(xì)胞分類儀(fluorescence-activatedcellsorter,FACS)對細(xì)胞進(jìn)行快速、準(zhǔn)確鑒定和分類的技術(shù)。流式細(xì)胞儀集光學(xué)、流體力學(xué)、電子學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)于一體，可對細(xì)胞作多參數(shù)定量測定和綜合分析。樣品經(jīng)多種熒光素標(biāo)記的抗體染色，因熒光素發(fā)射光譜的波長不同，信號(hào)能同時(shí)被接收，故能同時(shí)分析細(xì)胞表面多個(gè)分子的表達(dá)及其水平。該法可檢測T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞等及其比率，以及CD4/CD8陽性T細(xì)胞比值等。此外，借助光電效應(yīng)，微滴通過電場時(shí)出現(xiàn)不同偏向，從而可分類收集所需細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry，F(xiàn)CM)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院23免疫磁珠分離技術(shù)將特異性抗體與磁性微粒交聯(lián)，稱為免疫磁珠（immunemagneticbead,IMB）。IMB可與表達(dá)相應(yīng)膜抗原的細(xì)胞結(jié)合，應(yīng)用強(qiáng)磁場分離IMB及其所吸附的細(xì)胞，從而對特定的細(xì)胞進(jìn)行分選，此為直接分離法。亦可用二抗包被磁性微珠，與任何已結(jié)合鼠源性一抗的細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)，從而對細(xì)胞進(jìn)行分離，此為間接分離法.2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院23免疫2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院24免疫治療增強(qiáng)與抑制特異與非特異主動(dòng)與被動(dòng)抗體治療性疫苗細(xì)胞因子以細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院24免疫2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院25免疫診斷抗原或抗體的檢測免疫細(xì)胞的檢測免疫檢測方法的應(yīng)用2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院1免疫診2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院26抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)特異性可見性可逆性2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2抗原抗2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院27影響抗原抗體反應(yīng)的其它因素電解質(zhì)酸堿度溫度2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院3影響抗2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院28抗原-抗體反應(yīng)的基本檢測方法根據(jù)抗原的性質(zhì)、結(jié)合反應(yīng)的現(xiàn)象、參與反應(yīng)的成分因素，可將抗原抗體反應(yīng)分為凝集反應(yīng)(agglutination)沉淀反應(yīng)(precipitation)

補(bǔ)體參與的反應(yīng)采用標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)等2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院4抗原-2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院29凝集反應(yīng)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院5凝集反2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院30沉淀反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，此類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)；多用半固體瓊脂凝膠作為介質(zhì)進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散或免疫擴(kuò)散。即可溶性抗原與抗體在凝膠中擴(kuò)散，在比例合適處相遇時(shí)形成可見的白色沉淀2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院6沉淀反2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院31單向免疫擴(kuò)散

(singleimmunodiffusion)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院7單向免2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院32雙向免疫擴(kuò)散

(doubleimmunodiffusion)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院8雙向免2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院33免疫電泳(immunoelectrophoresis)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院9免疫電2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院34對流免疫電泳2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院10對流2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院35免疫比濁(immunonephelometry)在一定量抗體中分別加入遞增量的抗原，經(jīng)一定時(shí)間形成免疫復(fù)合物，液體混濁。用濁度計(jì)測量反應(yīng)液體的濁度，復(fù)合物形成越多則濁度越高，可繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并依據(jù)反應(yīng)液體的濁度推算樣品中抗原含量。2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院11免疫2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院36補(bǔ)體參與的反應(yīng)應(yīng)用抗體與紅細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，激活反應(yīng)體系中的補(bǔ)體成份，能導(dǎo)致紅細(xì)胞溶解，則可根據(jù)溶血現(xiàn)象判定試驗(yàn)結(jié)果。如溶血空斑試驗(yàn)、HLA的血清學(xué)分型等2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院12補(bǔ)體2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院37采用標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)免疫標(biāo)記技術(shù)指用熒光素、酶或放射性核素、膠體金等標(biāo)記抗體或抗原，進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)，是目前應(yīng)用最為廣泛的免疫學(xué)檢測技術(shù)。標(biāo)記物與抗體或抗原連接后并不改變后者的免疫特性，具有靈敏度高、快速、可定性、定量、定位等優(yōu)點(diǎn)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院13采用2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院38

免疫熒光法(immunofluorescence,IF)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院14免2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院39酶免疫測定(enzymeimmunoassay,EIA)將抗原-抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后的顯色反應(yīng)判定結(jié)果?？捎媚繙y定性，也可用酶標(biāo)測定儀測定光密度（OD）值以反映抗原含量，靈敏度可達(dá)每毫升ng甚至pg水平。常用于標(biāo)記的酶有辣根過氧化物酶(horseradishperoxidase,HRP)、堿性磷酸酶(alkalinephosphatase,AP)等。2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院15酶免2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院40酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院16酶聯(lián)2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院41其它常用標(biāo)記方法放射免疫測定法(radioimmunoassay,RIA)

化學(xué)發(fā)光免疫分析：將發(fā)光物質(zhì)（如吖啶酯、魯米諾等）標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行反應(yīng)，發(fā)光物質(zhì)在反應(yīng)劑（如過氧化陰離子）激發(fā)下生成激發(fā)態(tài)中間體，當(dāng)激發(fā)態(tài)中間體回到穩(wěn)定的基態(tài)時(shí)發(fā)射出光子，用自動(dòng)發(fā)光分析儀接收光信號(hào)，測定光子產(chǎn)量，以反映待檢樣品中抗體或抗原含量。免疫膠體金法2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院17其它A\B分別粘貼吸水材料，免疫金復(fù)合物干片粘貼在近下端C處，緊貼其上為硝酸纖維素膜條A\B分別粘貼吸水材料，免疫金復(fù)合物干片粘貼在近下端C處，緊2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院43免疫印跡法(Westernblot)將凝膠電泳與固相免疫結(jié)合，將通過電泳所區(qū)分的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移至固相載體，再借助酶免疫、放射免疫等技術(shù)進(jìn)行測定。第一步，SDS第二步，將通過電泳而分離的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印至硝酸纖維膜上（電轉(zhuǎn)印法）第三步，類似ELISA2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院19免疫CEMSDSAdditionofSDSEMCProteinbecomesrod-shapedwithuniformchargedistributionCEMSDS-PA2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院45免疫細(xì)胞的檢測免疫細(xì)胞的鑒定分離免疫細(xì)胞功能的測定2022/11/26電子科技大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院21免疫流式細(xì)胞術(shù)流