人環(huán)磷酸腺苷（cAMP）ELISA試劑盒

試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫(yī)學診斷?！久Q】人環(huán)磷酸腺苷（cAMP）ELISA試劑盒【用途】定量牛血清、血漿及相關液體樣本中環(huán)磷酸腺苷（cAMP）的含量【檢測原理】本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標準品、待測樣本加入到預先包被環(huán)磷酸腺苷（cAMP）透明酶標包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分，再加入酶標工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根環(huán)磷酸腺苷（cAMP）催化下轉化為藍色產物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中環(huán)磷酸腺苷（cAMP）濃度呈正相關，450nm波長下測定OD值，根據標準品和樣品的OD值，計算樣本中環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量?！经h(huán)磷酸腺苷（cAMP）ELISA試劑盒

試劑盒組成】1

酶標包被板12孔×8條7底物夜A6mL2

標準品：200ng/ml0.6mL8底物夜B6mL3

20倍濃縮洗滌液20mL9終止液6mL4

標準品稀釋液6mL10說明書1份5

樣本稀釋液6mL11封板膜1張6

酶標試劑6mL12密封袋1個

備注：標準品用標準品稀釋液依次稀釋為：200、100、50、25、12.5、6.25ng/ml

環(huán)磷酸腺苷（cAMP）【ELISA試劑盒需要而未提供的試劑和器材】1、37℃恒溫箱2、標準規(guī)格酶標儀3、精密移液器及一次性吸頭4、蒸餾水5、一次性試管6、吸水紙

【操作步驟】1、準備：從冰箱取出試劑盒，室溫復溫平衡30分鐘。2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。3、加標準品和待測樣本：取足夠數量的酶標包被板，固定于框架上，分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標準品孔中加入標準品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL（即樣本稀釋5倍）；空白對照孔不加。4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板4次（也可用洗板機按說明書操作洗板）。6、加酶標工作液：每孔加入酶標工作液50μL，空白對照孔不加。7、溫育：重復4的操作。8、洗板：重復5的操作。9、顯色：每孔先加入顯色劑A液50μL，再加入顯色劑B液50μL，37℃避光顯色15min。10、終止：取出酶標板，每孔加終止液50μL，終止反應（顏色由藍色立轉黃色）。11、測定：以空白孔調零，在終止后15分鐘內，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。12、計算：根據標準品的濃度及對應的OD值，計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應的樣品濃度，也可以使用各種應用軟件來計算。最終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。

【樣本要求】1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。2、標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。3、樣本應充分離心，不得有溶血及顆粒。

【注意事項】1、實驗嚴格按照說明書的操作進行，實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。2、酶標包被板開封后如未用完，應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。4、牢記樣本已經稀釋5倍，計算結果乘以5才是樣本實際濃度。5、本試劑盒定量范圍為0.1-200ng/ml，超過此范圍，為標準曲線延伸計算所得，不做為準確定量結果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果（0.1-200ng/ml范圍內），乘以總稀釋倍數即為樣本最終濃度。6、若顯色過淺，可適當延長底物溫育時間。7、為避免交叉污染，標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復使用封板膜。8、試劑盒保質期內使用，不同批號的試劑不得混用。9、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。

【操作程序總結】準備試劑，樣品和標準品

加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鐘洗板4次，加入酶標試劑，37℃反應30分鐘洗板4次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分