微免實(shí)驗(yàn)課件

吞噬作用沉淀反應(yīng)可溶性抗原與相應(yīng)抗體在有電解質(zhì)存在下，若二者相遇比例適當(dāng)，可形成肉眼客觀的沉淀物或沉淀線。對(duì)流免疫電泳－AgAbAgAb＋4~5mm>1.5cm4~5mm陽性陰性標(biāo)1陽性標(biāo)2陰性結(jié)果判斷:陽性對(duì)照和抗體孔之間出現(xiàn)白色沉淀線陰性對(duì)照和抗體孔之間無白色沉淀線標(biāo)本1和抗體孔之間？標(biāo)本2和抗體孔之間？

+–肥達(dá)反應(yīng)—輔助診斷腸熱癥（傷寒和副傷寒）原理:

用已知傷寒沙門菌O抗原、傷寒沙門菌H抗原，甲型副傷寒沙門菌H抗原以及乙型副傷寒沙門菌H抗原，分別與待檢血清做試管凝集反應(yīng)，測(cè)定待檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價(jià)。實(shí)驗(yàn)方法：1.取6支試管橫向排列于試管架上；2.按倍比稀釋法，依次加入：?jiǎn)挝唬╩l）操作：肥達(dá)反應(yīng)

123456生理鹽水0.50.50.50.50.50.5待檢血清0.50.50.50.50.5/

吹打3次

棄去0.5

菌液0.50.50.50.50.50.5從最后一管向前加，由低濃度到高濃度血清稀釋度1:401:801:1601:3201:640對(duì)照3.在第一管貼上標(biāo)簽，搖勻，41℃水浴2h，觀察結(jié)果。*吸管：拔掉乳膠頭置于桶內(nèi)乳膠頭：置于小簍試管：置于鍋內(nèi)操作：肥達(dá)反應(yīng)注意事項(xiàng)：1.加液順序：生理鹽水、血清、菌液，每人取吸管一支，先吸生理鹽水再吸血清，吸過血清的吸管不可再吸生理鹽水；血清只取1次，0.5ml加至第一管；2.菌液從最后一管開始由后向前加，盡量不要接觸到血清；3.標(biāo)簽貼在第1根試管上，寫姓名和抗原，不要貼到試管架上；4.棄試管和吸管時(shí)動(dòng)作要輕，以免破碎，紅色乳膠頭中不要與黃色橡皮管分離。操作：肥達(dá)反應(yīng)結(jié)果判斷：主要觀察指標(biāo)：（1）凝集塊（2）上清透明度。-：與對(duì)照管相似，無凝集塊，上清液均勻混濁；+：僅有少量凝集塊，上清液較混濁;++：可見凝集塊沉淀于試管底，上清液半混濁半澄清；+++：有明顯可見的凝集塊，上清液僅輕度混濁;++++:細(xì)菌全部凝集，有大片狀，邊緣不整齊的凝集塊，上清液完全清亮。注意：觀察前切勿搖動(dòng)試管；觀察順序：先看對(duì)照管，再看第1管，第2管…；先看管底和上清，再輕輕搖動(dòng)；

比較O和H形成凝集塊的不同。O、H高于正常值O、H不高

O高

H不高感染早期或交叉反應(yīng)

O不高

H高感染晚期、預(yù)防接種或非特異性回憶反應(yīng)類別凝集效價(jià)診斷意義O抗體與H抗體的診斷意義：

感染可能性大感染可能性小細(xì)菌（革蘭染色）

【涂片】

取載玻片

接種環(huán)取混合菌液1-2環(huán)涂片（直徑約1cm）自然干燥固定（通過火焰三次）

【染色】結(jié)晶紫1min水洗碘液1min水洗

酒精脫色30S

水洗稀釋復(fù)紅1min

水洗

吸水紙印干油鏡觀察Giemsa染色呈紫紅色，比紅細(xì)胞長(zhǎng)數(shù)倍，螺旋數(shù)目少，3-10個(gè)，呈不規(guī)則彎曲，彎曲平滑大于90度。疏螺旋體屬—回歸熱螺旋體微生物檢查時(shí)取發(fā)熱期的血液樣本。密螺旋體屬—梅毒螺旋體

鍍銀染色呈棕褐色，螺旋數(shù)目多，8-14個(gè)，排列規(guī)則緊密。鉤端螺旋體屬—鉤端螺旋體

鍍銀染色呈棕褐色，一端或兩端彎曲呈鉤狀，常呈C、S型，螺旋最為細(xì)密而規(guī)則，鏡下不清楚。沙眼衣原體包涵體

Giemsa染色眼結(jié)膜上皮細(xì)胞的胞漿近胞核處呈紫色或藍(lán)色，帽型、桑椹型或散在的包涵體。培養(yǎng)特性：專性真核細(xì)胞內(nèi)寄生和繁殖。致病性：沙眼、泌尿生殖道感染、肺炎等。發(fā)育周期與形態(tài)：原體：球形，直徑0.3m，有傳染性，無繁殖能力；始體：圓形或橢圓形，直徑0.5-1m，較始體稍大，無傳染性，以二分裂方式繁殖。衣原體chlamydia沙眼衣原體包涵體

Giemsa染色眼結(jié)膜上皮細(xì)胞的胞漿近胞核處呈紫色或藍(lán)色，帽型、桑椹型或散在的包涵體。立克次體—恙蟲熱立克次體

Giemsa染色單核細(xì)胞的胞漿內(nèi)近細(xì)胞核旁，成堆的紫紅色球桿狀的立克次體。新生隱球菌（墨汁負(fù)染）假絲酵母菌芽生孢子厚膜孢子大分生孢子大分生孢子細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)消毒滅菌的方法物理方法：高壓蒸汽滅菌（高壓蒸鍋等）：耐高溫和潮濕的物件，如培養(yǎng)基，生理鹽水，織物，玻璃器材等干熱滅菌（烤箱，160℃）：玻璃器材紫外線（人工紫外燈操作臺(tái)）：培養(yǎng)基，空氣過濾除菌（濾菌器）：去除液體空氣內(nèi)細(xì)菌（不耐熱液體），分離微生物或毒素化學(xué)消毒：化學(xué)消毒劑，如酒精，碘酒，氧化消毒劑等藥敏試驗(yàn)測(cè)定細(xì)菌對(duì)藥物敏感性取G+/G-菌液1環(huán)（無菌操作?。┻B續(xù)劃線，使細(xì)菌密密涂滿于平板表面均分四區(qū)，鑷子滅菌后分別夾取四種抗菌藥片貼于瓊脂表面（注意距離）貼上標(biāo)簽，倒放，置37度孵箱培養(yǎng)18-24h，測(cè)量抑菌圈直徑劃線分離取混合菌液1環(huán)（注意無菌操作?。┏纸臃N環(huán)來回連續(xù)劃線（約1/3），此為1區(qū)將平板轉(zhuǎn)90度，繼續(xù)連續(xù)劃線（約1/3），只有開始1-2條線通過1區(qū)，此為2區(qū)再將平板轉(zhuǎn)動(dòng)90度，按劃2區(qū)的方法劃出3區(qū)貼上標(biāo)簽，倒放，置37度孵箱培養(yǎng)18-24h，觀察結(jié)果123結(jié)果判斷：1.三區(qū)分區(qū)明顯2.充分利用平板，瓊脂完整無破損3.分離得到單個(gè)菌落抗酸染色（結(jié)核桿菌）石炭酸復(fù)紅加入涂片間隙加熱5分鐘，勿持續(xù)加熱冷卻5分鐘水洗鹽酸酒精2－3滴脫色30S，輕輕晃動(dòng)玻片重復(fù)脫色一次至涂片無色水洗加入?yún)问厦捞m1滴復(fù)染1分鐘水洗吸干，油鏡觀察光滑型菌落粗糙型菌落

菌落變異（S→R變異）

支原體典型菌落：中心厚，向下長(zhǎng)入培養(yǎng)基，周邊薄而透明，“油煎蛋狀”菌落。正常細(xì)胞：排列緊密而有規(guī)則。病變細(xì)胞：細(xì)胞皺縮、脫落、出現(xiàn)空泡、腫脹融合?？袢《景w（內(nèi)基小體）沉淀生長(zhǎng)混濁生長(zhǎng)表面生長(zhǎng)細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象液體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：

細(xì)菌的生長(zhǎng)現(xiàn)象混濁生長(zhǎng)有鞭毛細(xì)菌觀察細(xì)菌的動(dòng)力無鞭毛細(xì)菌線狀生長(zhǎng)培養(yǎng)基白喉棒狀桿菌培養(yǎng)特性：在亞碲酸鉀血瓊脂平板（鑒別選擇培養(yǎng)基）上生長(zhǎng)，能吸收碲鹽還原為元素碲，使菌落呈黑色。亞碲酸鉀血瓊脂平板亞碲酸鉀的血平板毒力檢測(cè)：Elek平板白喉棒狀桿菌在瓊脂平板中央貼一條浸有白喉抗毒素的濾紙條，垂直接種待檢菌，培養(yǎng)48h，觀察有無白色沉淀線形成。Elek平板培養(yǎng)特性：可在普通瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，形成灰白色粗糙型菌落，低倍鏡下可見卷發(fā)狀邊緣。炭疽芽胞桿菌腸道非致病菌分解乳糖產(chǎn)酸，菌落呈紅色，較大。腸道致病菌不分解乳糖，呈半透明的淡黃色菌落，較小。示教SS培養(yǎng)基

（腸道菌的選擇鑒別培養(yǎng)基）大腸桿菌在SS平板上(棕紅色,發(fā)酵).傷寒桿菌在SS平板上(淡黃色,不發(fā)酵)雙糖鐵培養(yǎng)基

成分：乳糖硫酸亞鐵酚紅（酸黃堿紅）葡萄糖

上層

（固體斜面）

下層

（半固體）分解乳糖、H2S分解葡萄糖、動(dòng)力金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌白色葡萄球菌(呈白色)金黃色葡萄球菌肺炎雙球菌(草綠色溶血環(huán),自溶).甲型溶血性鏈球菌乙型溶血性鏈球菌甲型溶血乙型溶血丙型溶血性鏈球菌甲型溶血性鏈球菌(草綠色溶血環(huán),無自溶)破傷風(fēng)梭菌產(chǎn)氣莢膜梭菌血瓊脂平板上：雙層溶血環(huán)（θ、α毒素），“靶樣溶血”血平板（雙層溶血環(huán)）庖肉培養(yǎng)基（淡紅/肉紅色）牛乳培養(yǎng)基－洶涌發(fā)酵結(jié)核桿菌：羅氏培養(yǎng)基酵母型菌落類酵母型菌落細(xì)菌的生化反應(yīng)各種細(xì)菌所具有的酶不同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力也不同，因而可利用生物化學(xué)的方法來測(cè)定微生物的代謝產(chǎn)物（酸堿、氣）、代謝方式和條件等，以此來鑒別細(xì)菌的類別、種屬。常用酸堿指示劑：?指示劑為酚紅十+－－－糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)產(chǎn)酸產(chǎn)氣：指示劑變色，小倒管內(nèi)有氣泡；以表示產(chǎn)酸：指示劑變色，以+表示不分解糖：指示劑不變色，以－表示十2.硫化氫試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸（如胱氨酸），產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇鉛鹽或鐵鹽形成黑色硫化鉛或硫化亞鐵沉淀物。－：不變色+：黑色－+3.靛基質(zhì)試驗(yàn)（吲哚試驗(yàn)）某些細(xì)菌能夠分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基質(zhì)（吲哚），靛基質(zhì)本身無色，但加入對(duì)二甲基氨基苯甲醛（吲哚試劑）作用后形成玫瑰紅色的靛基質(zhì)。-