生物轉化實例課件

生物轉化實例固定化黑曲霉生產(chǎn)葡萄糖酸－－內(nèi)酯以前，我們講過利用培養(yǎng)好的黑曲霉菌絲直接轉化葡萄糖生產(chǎn)葡萄糖酸-內(nèi)酯的方法，在轉化中尚存的問題是菌絲一般不能重復利用。分析原因：-內(nèi)酯，水解產(chǎn)酸，從而使轉化液的酸性增強，從而導致細胞內(nèi)的GOD酶活性失活，如果能設法提高胞內(nèi)GOD的耐酸性，就有可能直接增加菌絲的使用次數(shù)。解決方法：固定化黑曲霉。固定化方法混均用注射器針頭加壓滴入1.5%CaCl2溶液中硬化1h用涼開水洗滌得直徑2mm的凝膠球＋黑曲霉孢子2.5%海藻酸鈉固定化細胞的培養(yǎng)活化采用兩步培養(yǎng)法由于固定化技術操作，不需要在完全無菌條件下進行，因此，在固定化的孢子中，難免有些雜菌污染。500ml三角瓶30ml培養(yǎng)基20g凝膠球30℃20h振蕩離心除去原培養(yǎng)液涼開水洗滌加入100ml新鮮培養(yǎng)基30℃22h振蕩培養(yǎng)固定化細胞培養(yǎng)GOD酶活力分析培養(yǎng)固定化細胞，均絲常分布在凝膠表面，從而降低了凝膠對氣體及及基質(zhì)交換的阻力，從而提高了GOD酶活力。固定化細胞內(nèi)環(huán)境適合GOD產(chǎn)生。搖瓶轉化100ml5%葡萄糖制備好的固定化細胞30℃振蕩糖消耗95%時，指示終點濃縮、結晶得－內(nèi)酯介紹生物轉化的常見培養(yǎng)系統(tǒng)類型介紹生物轉化的常見培養(yǎng)系統(tǒng)類型在生物轉化的研究中，如何找到一種較為方便的培養(yǎng)方法是相當重要的。其中三個主要的影響因素是混合、通氣與溫控?；旌虾屯庖话憧稍谡袷帗u瓶培養(yǎng)中得以實現(xiàn)，通常進行生物轉化的搖瓶大小為：125－2000ml，培養(yǎng)液的裝入量為搖瓶體積的1/10，這樣可以得到充分的通氧量?；|(zhì)加入量和加入時間的研究基質(zhì)的添加問題生物轉化中重要的因素，特別是在添加水溶性極差的基質(zhì)時，基質(zhì)的加入量及加入時間便更為重要?；衔镱愋蜔o電荷的化合物：添加量一般較大，其上限值為10%（W/V)，有時其添加量可能會更大些。（注意，基質(zhì)濃度過高時，即使無毒，也會對菌體生長產(chǎn)生抑制）離子化的基質(zhì)：其添加量一般為5%。相對毒性的基質(zhì)：這類物質(zhì)其添加的上限值一般較低?；|(zhì)的加入方式1.直接加入法將液體或粉末直接加入生長的細胞培養(yǎng)液中，再加入表面活性劑3%。2.間接法基質(zhì)與3%表面活性劑結合，再加入到培養(yǎng)液中。基質(zhì)的加入時間在培養(yǎng)液中加入基質(zhì)的時間較為重要如果用生長的細胞進行生物轉化，在菌體生長開始時，加入少量的基質(zhì)，對于轉化酶的產(chǎn)生較為有利，進而加快生物轉化的進程。在生長早期加入過多的基質(zhì)化合物，一般對轉化有害，對靜息細胞培養(yǎng)影響較小。補救方法：以逐漸增加量（流加）的方式加入基質(zhì)。當加入的基質(zhì)濃度較高時，即便是無毒的物質(zhì)，當其大量積累時，也會對菌體生長產(chǎn)生抑制作用。連續(xù)培養(yǎng)法（continuousculture)在分批培養(yǎng)中，菌體的生長或產(chǎn)物的形成，總是在某一有限的并且是較短的時間間隔內(nèi)就結束。1949年，Monod創(chuàng)立了連續(xù)培養(yǎng)法。將新鮮的培養(yǎng)