細(xì)菌的生理生化反應(yīng)課件

實(shí)驗(yàn)十細(xì)菌的生理生化反應(yīng)

一、

目的1.1

了解細(xì)菌鑒定中常用的生理生化試驗(yàn)反應(yīng)原理1.2

掌握測定細(xì)菌生理生化反應(yīng)的技術(shù)和方法

二、

原理

各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)了很大的差異。不同微生物因具有不同的酶系統(tǒng)，分解利用糖類、脂肪類和蛋白類物質(zhì)的能力不同，其發(fā)酵的類型和產(chǎn)物也不相同。細(xì)菌的生理生化反應(yīng)在菌株的分類鑒定中有很大作用。

四、步驟(一)

糖類發(fā)酵試驗(yàn)（二）

乙酰甲基甲醇試驗(yàn)(V．P試驗(yàn))（三）

甲基紅試驗(yàn)（M.R.試驗(yàn)）（四）吲哚試驗(yàn)（五）檸檬酸鹽試驗(yàn)（六）硫化氫試驗(yàn)（七）淀粉水解試驗(yàn)(一)

糖類發(fā)酵試驗(yàn)原理

可根據(jù)細(xì)菌分解利用糖能力的差異表現(xiàn)出是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為鑒定菌種的依據(jù)。是否產(chǎn)酸，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中加入指示劑，經(jīng)培養(yǎng)后根據(jù)指示劑的顏色變化來判斷。是否產(chǎn)氣，可在發(fā)酵培養(yǎng)基中放入倒置杜氏小管觀察。

材料菌種：大腸桿菌、變形桿菌

培養(yǎng)基：葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)液、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液試管

步驟

1

試管標(biāo)記

取分別裝有葡萄糖和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)液試管各2支，每種糖發(fā)酵試管中均分別標(biāo)記大腸桿菌、普通變形菌。2

接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至以上各相應(yīng)試管中。置37℃恒溫箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)24h-48h，觀察結(jié)果。與對(duì)照管比較，若接種培養(yǎng)液保持原有顏色，其反應(yīng)結(jié)果為陰性，表明該菌不能利用該種糖，記錄用“－”表示；如培養(yǎng)液呈黃色，反應(yīng)結(jié)果為陽性，表明該菌能分解該種糖產(chǎn)酸，記錄用“＋”表示。培養(yǎng)液中的杜氏小管內(nèi)有氣泡為陽性反應(yīng)，表明該菌分解糖能產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，記錄用“＋”表示；如杜氏小管內(nèi)沒有氣泡為陰性反應(yīng)，記錄用“－”表示。結(jié)果觀察（二）

乙酰甲基甲醇試驗(yàn)(V．P試驗(yàn))

原理

某些細(xì)菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液中能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸縮合，脫羧成乙酰甲基甲醇，后者在強(qiáng)堿環(huán)境下，被空氣中氧氧化為二乙酰，二乙酰與蛋白胨中的胍基生成紅色化合物，稱V.P（+）反應(yīng)。

材料

菌種:大腸桿菌（Escherichia

coli）、產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacter

aerogenes）

培養(yǎng)基：葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液

步驟

1

標(biāo)記試管:取2支裝有葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌。

2

接種培養(yǎng):以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應(yīng)試管中。置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)24～48h。（三）

甲基紅試驗(yàn)（M.R.試驗(yàn)）原理

腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸，進(jìn)一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基pH值下降至pH4.2以下，使甲基紅指示劑變紅。

材料

菌種同V.P試驗(yàn)培養(yǎng)基同V.P試驗(yàn)步驟

同V.P試驗(yàn)1

標(biāo)記試管:取2支裝有葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌。

2

接種培養(yǎng):以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應(yīng)試管中。置37℃恒溫箱中，培養(yǎng)24～48h。（四）吲哚試驗(yàn)原理:有些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚。吲哚本身沒有顏色，不能直接看見，但當(dāng)加入吲哚試劑（對(duì)二甲基氨基苯甲醛試劑）時(shí)，該試劑與吲哚作用，形成紅色的玫瑰吲哚。

材料菌種：同V．P試驗(yàn)

培養(yǎng)基：蛋白胨水培養(yǎng)基

試劑：二甲基氨基苯甲醛溶液、乙醚。

步驟

1

試管標(biāo)記:取裝有蛋白胨水培養(yǎng)液的試管2支，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌。

2

接種培養(yǎng):以無菌操作分別接種少量菌苔到以上相應(yīng)試管中，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。（五）檸檬酸鹽試驗(yàn)原理

有些細(xì)菌能夠利用檸檬酸鈉作為碳源，如產(chǎn)氣腸桿菌；而另一些細(xì)菌則不能利用檸檬酸鹽，如大腸桿菌。細(xì)菌在分解檸檬酸鹽后，產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基的pH升高，當(dāng)培養(yǎng)基中加入1%溴麝香草酚藍(lán)指示劑時(shí)，就會(huì)由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。（溴麝香草酚藍(lán)的指示范圍為：pH小于6.0時(shí)呈黃色，pH在6.0~7.6時(shí)為綠色，pH大于7.6時(shí)呈藍(lán)色。）材料菌種：同V．P試驗(yàn)

培養(yǎng)基：檸檬酸鹽培養(yǎng)基（固體斜面）步驟

1

試管標(biāo)記

取裝有檸檬酸鹽培養(yǎng)基固體斜面的試管2支，分別標(biāo)記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌。

2

接種培養(yǎng)

以無菌操作分別接種少量菌苔到以上相應(yīng)試管斜面上做“之”字形劃線，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。結(jié)果觀察（六）硫化氫試驗(yàn)原理

有些細(xì)菌能分解含硫的有機(jī)物，如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸等產(chǎn)生硫化氫，硫化氫一遇培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽等，就形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀物。材料菌種：大腸桿菌、變形桿菌培養(yǎng)基：H2S試驗(yàn)培養(yǎng)基（固體）步驟

1

試管標(biāo)記:取裝有H2S試驗(yàn)固體培養(yǎng)基的試管2支，分別標(biāo)記大腸桿菌、變形桿菌。

2

接種培養(yǎng):以無菌操作分別用接種針挑取少量菌苔到以上相應(yīng)試管做穿刺接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。結(jié)果觀察（七）淀粉水解試驗(yàn)原理

有些細(xì)菌可產(chǎn)生淀粉酶水解培養(yǎng)中的淀粉為糊精，或進(jìn)一步水解為麥芽糖，淀粉水解后遇碘不再變藍(lán)。材料菌種：大腸桿菌、枯草桿菌培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基（固體）步驟

1

培養(yǎng)皿標(biāo)記

取裝有淀粉培養(yǎng)基（固體）的培養(yǎng)皿一只，在培養(yǎng)皿兩側(cè)分別標(biāo)記大腸桿菌、枯草桿菌。

2

接種培養(yǎng)

以無菌操作分別用接種環(huán)挑取少量菌苔到培養(yǎng)皿相應(yīng)部位做十字接種，置37℃恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。六實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1配制培養(yǎng)基糖發(fā)酵培養(yǎng)基（葡萄糖、乳糖）葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基蛋白胨水培養(yǎng)基淀粉培養(yǎng)基色H2