專題九-生物技術實踐

專題(zhuāntí)九--生物技術實踐第一頁，共61頁?！?〕實驗(shíyàn)原理纖維素+染料→紅色復合物〔纖維素+〕+剛果紅染料→培養(yǎng)基中出現(xiàn)(chūxiàn)以纖維素分解菌為中心的 剛果紅纖維素酶透明(tòumíng)圈〔2〕實驗流程土壤取樣 選擇培養(yǎng)

↓挑選產(chǎn)生透明圈的菌落 將樣品涂布到鑒別

的培養(yǎng)基上纖維素分解菌梯度稀釋第二頁，共61頁。二、傳統(tǒng)發(fā)酵技術的應用(yìngyòng)1.果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌種及控制條件的比較制作內(nèi)容比較項目果酒果醋腐乳泡菜菌種

控制條件O2的有無

有氧

無氧最適溫度18~25℃

15~18℃

酵母菌醋酸(cùsuān)菌毛霉乳酸菌無氧無氧30~35℃常溫(chángwēn)第三頁，共61頁。2.果酒、果醋、腐乳和泡菜制作過程比較及亞硝酸鹽含量(hánliàng)的檢測果酒和果醋的制作腐乳的制作制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量制作原理果酒：

果醋：多種微生物發(fā)酵乳酸菌無氧呼吸在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料無氧呼吸(hūxī)有氧呼吸(hūxī)第四頁，共61頁。第五頁，共61頁。果酒和果醋的制作腐乳的制作制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量操作提示

的選擇與處理；防止

被污染；控制好發(fā)酵條件控制好；防止雜菌污染

的選擇；腌制的條件；測定的操作材料(cáiliào)發(fā)酵液材料(cáiliào)的用量泡菜壇亞硝酸鹽含量(hánliàng)第六頁，共61頁。三、植物有效成分的提取(tíqǔ)1.植物芳香油三種提取(tíqǔ)方法的比較提取方法

實驗原理

方法步驟

適用范圍

水蒸氣蒸餾

（1）水蒸氣蒸餾（2）分離油層（3）除水過濾

適用于提取

、

等揮發(fā)性強的芳香油

玫瑰油薄荷油利用水蒸氣將揮發(fā)性較強的植物(zhíwù)芳香油攜帶出來第七頁，共61頁。壓榨法

（1）石灰水浸泡、漂洗（2）壓榨、過濾、靜置（3）再次過濾適用于

、

等易焦糊原料的提取有機溶劑萃取

（1）粉碎、干燥（2）萃取、過濾（3）濃縮適用范圍廣，要求原料的顆粒要盡可能細小，能充分浸泡在有機溶液中柑橘(gānjú)檸檬(nínɡm(xù)énɡ)通過機械(jīxiè)加壓，壓榨出果皮中的芳香油使芳香油溶解在有機溶劑中，蒸發(fā)溶劑后就可獲得芳香油第八頁，共61頁。〔1〕玫瑰精油的提取實驗流程鮮玫瑰花+清水〔1∶4〕→→油水混合 物別離油層 玫瑰油?！?〕橘皮精油的提取實驗流程橘皮→漂洗→→→靜置→再 次過濾→橘皮油?！?〕提取胡蘿卜素(húluóbosù)的實驗流程胡蘿卜→→枯燥→→過濾→→胡蘿卜素(húluóbosù)。水蒸氣蒸餾(zhēngliú)參加(cānjiā)NaCl參加無水Na2SO4除水過濾石灰水浸泡壓榨過濾粉碎萃取濃縮第九頁，共61頁。四、植物組織培養(yǎng)技術(jìshù)和血紅蛋白的提取和別離1.植物(zhíwù)的組織培養(yǎng)技術〔1〕菊花(júhuā)的組織培養(yǎng)原理：植物細胞的 根本過程：離體的組織或細胞→→幼苗→ 影響因素：營養(yǎng)、、、等實驗操作：制備培養(yǎng)基→→→→ → 全能性愈傷組織移栽pH溫度光照外植體消毒接種培養(yǎng)移栽栽培〔2〕月季的花藥培養(yǎng)花粉發(fā)育經(jīng)歷了小孢子

時期、單核期、雙核期等階段四分體第十頁，共61頁。影響花藥培養(yǎng)的因素：選擇的、的組成、親本植株的生長條件、材料的預處理以及等實驗(shíyàn)操作：材料的選取→→→ 材料(cáiliào)培養(yǎng)基低溫(dīwēn)接種密度消毒接種培養(yǎng)2.血紅蛋白的提取和別離凝膠色譜法：根據(jù)別離蛋白質(zhì)電泳：在電場作用下，帶電粒子發(fā)生遷移的過程。利用了待別離樣品中各種分子，相對分子質(zhì)量的大小帶電性質(zhì)的差異第十一頁，共61頁。以及分子本身的的不同，使帶電(dàidiàn)分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而使樣品中各種分子別離大小(dàxiǎo)、形狀樣品(yàngpǐn)處理：通過紅細胞的洗滌、、 等操作收集到血紅蛋白溶液粗提?。和ㄟ^去除血紅蛋白溶液中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)〔3〕實驗操作步驟血紅蛋白的釋放別離血紅蛋白溶液透析法純化：通過

去除相對分子質(zhì)量較大的雜質(zhì)純度鑒定：用

進行樣品純度鑒定凝膠色譜法SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳第十二頁，共61頁?？键c一微生物的培養(yǎng)與應用〔1〕營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。〔2〕培養(yǎng)基類型①按培養(yǎng)基物理性質(zhì)可分為固體(gùtǐ)培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩種，其中固體(gùtǐ)培養(yǎng)基用于菌種別離、鑒定、菌落計數(shù)等。而液體培養(yǎng)基常用于科研或工業(yè)生產(chǎn)等。②按培養(yǎng)基的功能可分為選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基。第十三頁，共61頁。③按照(ànzhào)人們對培養(yǎng)基中成分的了解程度可分為天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基兩種。說明代謝類型不同的微生物，對培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的要求不同，如自養(yǎng)型微生物可以利用無機碳源，而異養(yǎng)型微生物那么必須利用有機碳源。不管代謝類型如何，微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的要求都包括碳源、氮源、水、無機鹽、生長因子五類。〔1〕實驗室常用的滅菌方法有灼燒(zhuóshāo)滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌；常用的消毒方法有煮沸消毒、巴氏消毒、化學藥劑消毒。對不同的對象需采用不同的消毒或滅菌方法。第十四頁，共61頁。〔2〕在微生物培養(yǎng)時，獲得純潔培養(yǎng)物的關鍵是防止外來(wàilái)雜菌入侵。無菌技術圍繞著如何防止雜菌的污染展開，主要包括四方面的內(nèi)容：①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手進行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌。③為防止周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。④實驗操作時應防止已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。第十五頁，共61頁。〔1〕利用不同的菌體的菌落特征不同別離菌種，常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法兩種：①平板劃線法是同一(tóngyī)接種環(huán)在固體培養(yǎng)基外表連續(xù)劃線，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的外表，以形成標準菌落。②稀釋涂布平板法那么是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋程度的菌液分別涂布到固體培養(yǎng)基的外表，進行培養(yǎng)，以形成標準菌落。〔2〕選擇培養(yǎng)，利用不同微生物對營養(yǎng)需要的不同或?qū)Νh(huán)境要求的不同，將不同微生物分開。第十六頁，共61頁。測定土壤中的細菌數(shù)，一般選用104、105、106倍的稀釋液進行(jìnxíng)平板培養(yǎng)，測定放線菌一般選用104和105倍的稀釋液進行(jìnxíng)平板培養(yǎng)，測定真菌一般用102、103和104倍的稀釋液進行(jìnxíng)平板培養(yǎng)。實驗時，每一濃度至少涂布3個平板，以增強實驗的說服力和準確性。當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基外表生長的菌落來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品大約含有多少個活菌。〔1〕方法：稀釋涂布平板法——統(tǒng)計活菌數(shù)第十七頁，共61頁?！?〕計數(shù)規(guī)那么①計算方法：每克樣品中的菌落數(shù)=〔C÷V〕×MC代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)V代表涂布平板時所用(suǒyònɡ)稀釋液的體積〔mL〕M代表稀釋倍數(shù)②設置對照：排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)假設某兩個或多個稀釋(xīshì)濃度下獲得的菌落數(shù)均符合條件時，要看兩者菌落數(shù)的比值，假設小于2，那么取兩者的平均值；假設大于2，那么取較小值第十八頁，共61頁。苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì)，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株，篩選的主要步驟如以以下圖所示，①為土壤樣品。以下相關表達錯誤的選項是 〔 〕A.圖中②培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應參加(cānjiā)苯酚作為碳源B.如果要測定②中活細菌數(shù)量，常采用稀釋涂布平板法C.假設圖中④為對照實驗，那么其中應以苯酚作為惟一碳源第十九頁，共61頁。D.使用平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落解析用苯酚作為選擇(xuǎnzé)培養(yǎng)基的特殊的碳源，也是微生物的能源物質(zhì)，所以會影響其生長。測定培養(yǎng)液中細菌數(shù)目多用稀釋涂布平板法。假設④為對照實驗，那么④應含除苯酚外的其他碳源，⑤以苯酚作為惟一碳源。使用稀釋涂布平板法或平板劃線法都可以在⑥上獲得單菌落。答案C考點二果酒、果醋、腐乳、泡菜制作的本卷須知1.果酒、果醋制作的本卷須知〔1〕材料的選擇與處理選擇新鮮的葡萄，榨汁前應先沖洗，再除去枝梗，以防止去除(qùchú)枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的時機。第二十頁，共61頁?！?〕防止發(fā)酵液被污染需要從發(fā)酵制作的過程進行全面的考慮，因為操作的每一步都可能混入雜菌。為防止雜菌污染：榨汁機要洗凈并晾干，發(fā)酵裝置要洗凈并用70%的酒精(jiǔjīng)消毒；假設用簡易的發(fā)酵裝置，每隔一定時間排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等?！?〕控制發(fā)酵條件果酒果醋溫度20℃左右，最適合繁殖；18～25℃，酒精發(fā)酵30～35℃，最適合生長氧氣前期通O2，然后控制無O2

氧氣充足其他時間：10～12天；pH:5.0～6.0時間：約7～8天第二十一頁，共61頁?！?〕影響腐乳品質(zhì)的條件：水、鹽、酒、溫度、發(fā)酵時間等。①水的控制：含水量約70%，用含水量過高的豆腐制腐乳，不易成形。②鹽的控制：鹽濃度過高，會影響腐乳的口味，濃度過低，腐乳易腐敗變質(zhì)。③酒的控制：酒精含量(hánliàng)一般控制在12%左右。酒精含量(hánliàng)過高，使腐乳成熟期延長。酒精含量(hánliàng)過低，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗。④溫度的控制：溫度為15～18℃,適合毛霉生長。發(fā)酵時間易控制在6個月左右。第二十二頁，共61頁。〔2〕防止雜菌污染①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②裝瓶時，操作要迅速小心。加放鹵湯后，要用膠條將瓶口密封(mìfēng)。封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染?！?〕泡菜壇的選擇：選擇氣密性好的泡菜壇。用水封閉壇口使壇內(nèi)與壇外空氣隔絕，這是最簡易的造成(zàochénɡ)無氧環(huán)境的方法。這樣，壇內(nèi)可利用蔬菜中天然存在的乳酸菌進行乳酸發(fā)酵。如不封閉，那么會有許多需氧菌生長，蔬菜會腐爛。第二十三頁，共61頁?！?〕腌制條件(tiáojiàn)的控制：腌制過程中要注意控制腌制的時間、溫度和食鹽的用量。發(fā)酵時間受到溫度的影響：18～20℃，腌制15天左右。溫度高，時間短一些。溫度過高、食鹽用量缺乏10%、腌制時間過短，都容易造成細菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。圖甲是果醋發(fā)酵(fājiào)裝置。發(fā)酵(fājiào)初期不通氣，溶液中有氣泡產(chǎn)生；中期可以聞到酒香；后期接種醋酸菌，適當升高溫度并通氣，酒香逐漸變成醋香。圖乙中能表示整個發(fā)酵(fājiào)過程培養(yǎng)液pH變化的曲線是〔〕第二十四頁，共61頁。A.① B.② C.③ D.④解析果醋制作的根本過程是挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→醋酸發(fā)酵→獲得果醋。在酒精發(fā)酵過程中，產(chǎn)生的CO2溶于水后形成(xíngchéng)碳酸〔酸性較弱〕，pH會下降，但不會急劇下降；當接入醋酸菌后，在有氧第二十五頁，共61頁。會下降，但不會急劇下降；當接入醋酸菌后，在有氧的情況下，醋酸菌能將乙醇變成乙醛，再將乙醛變成醋酸，酸性物質(zhì)持續(xù)增加，pH持續(xù)下降，4條曲線中曲線②是比較(bǐjiào)符合pH變化的。答案B〔09·浙江自選模塊〕下面是有關(yǒuguān)食醋和泡菜制作的實驗。請完成以下問題：〔1〕食醋可用大米為原料經(jīng)三步發(fā)酵來制作：第一步：大米經(jīng)蒸熟、冷卻后參加淀粉酶，將原料中的淀粉分解成〔填中間產(chǎn)物〕，然后進一步分解成葡萄糖，這一過程可用〔填淀粉指示劑〕來檢測，因為該試劑遇淀粉呈藍色，遇上述中間產(chǎn)物呈紅色。第二十六頁，共61頁。第二步：用菌將葡萄糖轉(zhuǎn)化成乙醇，這一發(fā)酵(fājiào)過程中，玻璃發(fā)酵(fājiào)瓶不應完全密閉的主要原因是 。第三步：用菌將乙醇轉(zhuǎn)化成乙酸，這一過程 氧氣?！?〕泡菜發(fā)酵(fājiào)過程中，會產(chǎn)生多種酸，其中主要是 ，還有少量的亞硝酸。對亞硝酸鹽的定量測定可以用 法，因為亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸的反響產(chǎn)物能與N-1-萘基乙二胺偶聯(lián)成 色化合物。進行樣品測定時，還要取等量水進行同樣的測定，目的是 。第二十七頁，共61頁?？键c三植物(zhíwù)的組織培養(yǎng)技術植物(zhíwù)組織培養(yǎng)的原理是細胞的全能性。不同細胞的全能性不一樣。生物體的所有細胞全能性大小比較如下：①受精卵>生殖細胞>體細胞；②體細胞中：幼嫩植物(zhíwù)組織〔如芽尖〕>成熟組織細胞。答案(dáàn)〔1〕糊精碘液酵母發(fā)酵過程中會產(chǎn)生大量CO2，使瓶內(nèi)壓力升高而可能引起爆裂醋酸桿需要消耗〔2〕乳酸〔或有機酸〕〔光電〕比色紫紅作為對照第二十八頁，共61頁。植物組織培養(yǎng)技術花藥培養(yǎng)技術相同點理論依據(jù)植物細胞的全能性基本過程外植體愈傷組織叢芽生根→移栽；無菌技術及接種操作基本相同影響因素選材、營養(yǎng)、激素、pH、溫度、光照等不同點選材體細胞生殖細胞（精子）脫分化(fēnhuà)再分化(fēnhuà)誘導(yòudǎo)第二十九頁，共61頁。3.植物組織培養(yǎng)技術(jìshù)、微生物培養(yǎng)技術(jìshù)和無土栽培技術(jìshù)比較植物組織培養(yǎng)技術微生物培養(yǎng)技術無土栽培技術概念在無菌條件下，將離體的植物體器官或組織接種在適當?shù)呐囵B(yǎng)基上進行培養(yǎng)，最終發(fā)育成完整植株在無菌條件下，在適宜的營養(yǎng)和環(huán)境條件下對微生物的培養(yǎng)將植物生長發(fā)育過程中所需各種礦質(zhì)元素按一定比例配成營養(yǎng)液，并利用這種營養(yǎng)液栽培植物第三十頁，共61頁。培養(yǎng)基成分水、礦質(zhì)元素、蔗糖、維生素、有機添加物和植物激素等水、無機鹽、碳源、氮源等水、必需礦質(zhì)元素特殊操作要求嚴格控制無菌操作，在培養(yǎng)過程中要更換培養(yǎng)基，調(diào)節(jié)細胞分裂素和生長素的比例嚴格控制無菌操作，整個培養(yǎng)過程無需更換培養(yǎng)基適宜的環(huán)境條件，基質(zhì)墊底并固定幼苗，不需要保證無菌條件第三十一頁，共61頁。請答復以下有關植物組織培養(yǎng)的幾個問題。〔1〕離體植物組織和細胞培養(yǎng)常用的一種培養(yǎng)基是 ，其主要成分(chéngfèn)包括大量元素和。培養(yǎng)中常用的兩種植物激素是和，兩者使用時的、、等，都會影響實驗的結(jié)果?！?〕植物組織培養(yǎng)的一般步驟為。〔3〕以以下圖為植物組織培養(yǎng)的局部過程。

①過程是，②過程是，A是?！?〕植物組織培養(yǎng)過程中還需要維持一定的外界條件，一是要有適宜的，二是。離體的器官、組織(zǔzhī)或細胞①②A植物體第三十二頁，共61頁。解析MS培養(yǎng)基包括大量元素N、P、K、Ca、Mg、S和微量元素、有機物和植物激素〔生長素和細胞分裂素〕。使用激素時要特別注意激素的濃度、使用順序、用量的比例，兩者用量的比例影響植物細胞的發(fā)育(fāyù)方向。答案〔1〕MS培養(yǎng)基微量元素生長素細胞分裂素濃度使用的先后順序用量的比例〔2〕制備MS固體培養(yǎng)基、外植體消毒、接種、培養(yǎng)、移栽、栽培〔3〕脫分化再分化愈傷組織〔4〕溫度和pH等無菌〔環(huán)境〕第三十三頁，共61頁?！?9·山東卷〕人參是一種名貴中藥材，其有效成分主要是人參皂苷。利用細胞培養(yǎng)技術生產(chǎn)人參皂苷的大致流程如下：請答復：〔1〕配制(pèizhì)誘導愈傷組織的固體培養(yǎng)基，分裝后要進行。接種前，要對人參根進行?！?〕用于離體培養(yǎng)的根切塊，叫做。培養(yǎng)幾天后發(fā)現(xiàn)少數(shù)培養(yǎng)基被污染，假設是有顏色的絨毛狀菌落，屬于污染；假設是有光澤的黏液狀菌落，屬于污染。第三十四頁，共61頁。〔3〕用少量酶處理愈傷組織，獲取單細胞或小細胞團，在液體培養(yǎng)基中進行懸浮培養(yǎng)，可有效提高人參皂苷合成量。〔4〕人參皂苷易溶于水溶性〔親水性〕有機溶液，從培養(yǎng)物干粉中提取人參皂苷宜選用方法，操作(cāozuò)時應采用加熱。解析〔1〕滅菌是指用強烈的物理或化學的方法，殺死物體(wùtǐ)內(nèi)外的一切微生物，包括芽孢和孢子。消毒指使用較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體(wùtǐ)外表或內(nèi)部一局部對人體有害的微生物。在組織培養(yǎng)過程中要防止雜菌的污染，需要對固體培養(yǎng)基進行滅菌，對人參根進行消毒。第三十五頁，共61頁?！?〕用于離體培養(yǎng)的離體的植物組織或器官〔或切塊〕稱為外植體。單個或少數(shù)微生物細胞生長繁殖后，會形成以母細胞為中心的一堆肉眼可見、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細胞集團，這就是菌落。我們可以根據(jù)菌落的特征判斷微生物的種類。霉菌的菌落較大，肉眼可見許多毛狀物，呈棕色、青色等，細菌菌落常表現(xiàn)為濕潤、黏稠(niánchóu)，有光澤。〔3〕果膠酶能夠分解果膠，瓦解植物的細胞壁和胞間層，使愈傷組織別離?！?〕人參皂苷溶于水溶性有機溶劑，可以用萃取法從培養(yǎng)物干粉中提取。萃取時要采用水浴加熱，這是因為有機溶劑都是易燃物，用明火加熱容易引起燃燒、爆炸。答案〔1〕滅菌消毒〔2〕外植體真菌〔霉菌〕細菌〔3〕果膠〔4〕萃取水浴第三十六頁，共61頁。例1以下對生物技術在實踐中應用的表達，錯誤的選項是 〔 〕A.在沸水浴的條件下，DNA遇二苯胺會被染成藍色B.普通洗衣粉只是缺少酶，不會污染環(huán)境的一種方法解析果酒的制作(zhìzuò)離不開酵母菌，酵母菌在20℃左右的環(huán)境中最適合代謝和繁殖；果醋的制作(zhìzuò)需要醋酸菌，醋酸菌的最適生長溫度為30～35℃；普通洗衣粉雖然沒有酶，但含有一定量的磷，所以使用較多時也會污染環(huán)境。B第三十七頁，共61頁。錯因分析此題錯因主要是對各種現(xiàn)代生物技術的原理的識記不到位，所以，熟記不同(bùtónɡ)技術的原理、操作程序等是解此類試題的關鍵。例2請分析答復以下有關生物技術實踐方面的問題：〔1〕微生物培養(yǎng)基一般都含有：水和無機鹽以及(yǐjí) ?！?〕在微生物接種過程中，試管口需要通過酒精燈火焰12次，其目的是 ?！?〕別離分解尿素的微生物的實驗流程包括：土壤取樣、梯度稀釋、樣品涂布到培養(yǎng)基上、挑選 ?！?〕在植物組織培養(yǎng)過程中，往往需要使用植物激素啟動細胞分裂，人為地控制細胞的 。第三十八頁，共61頁?！?〕通過電泳別離提純蛋白質(zhì)時，影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素是蛋白質(zhì)分子的帶電性質(zhì)、分子大小及 。〔6〕根據(jù)果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用的系列實驗結(jié)果答復(dáfù)以下問題：①能正確表示pH對果膠酶活性影響的曲線是。②在原材料有限的情況下，能正確表示相同時間內(nèi)果膠酶的用量對果汁產(chǎn)量影響的曲線是。第三十九頁，共61頁。解析培養(yǎng)基的成分一般(yībān)包括四大局部：碳源、氮源、水、無機鹽。微生物接種的過程中一定要注意無菌操作，在酒精燈火焰旁的操作就是滅菌。在別離微生物時是運用選擇培養(yǎng)基進行篩選，能夠生長形成菌落的就是所需要的微生物。組織培養(yǎng)需要把得到的外植體通過脫分化形成愈傷組織，愈傷組織再分化才會形成新植物。電泳法別離蛋白質(zhì)時影響蛋白質(zhì)遷移速率的因素是蛋白質(zhì)分子的帶電性質(zhì)、分子大小以及帶電荷量、分子形狀。溫度過高或過低都會降低酶的活性，酶的催化作用具有一個最適溫度。由于原材料是有限的，因此相同時間內(nèi)果膠酶的用量對果汁產(chǎn)量影響有一個最大值。第四十頁，共61頁。方法點評此題綜合考查生物技術實踐多個專題內(nèi)容，綜合性強，比較根底(gēndǐ)。針對高考，復習根底(gēndǐ)知識理解生物技術實踐的根本過程，強化要點的記憶，是獲得高分的最好方法。答案〔1〕碳源和氮源〔2〕滅菌〔3〕選擇菌落〔4〕脫分化、再分化〔5〕帶電荷量、分子(fēnzǐ)形狀〔6〕①乙②丙第四十一頁，共61頁。1.〔09·海南卷〕請答復以下與實驗室提取芳香油有關的問題：〔1〕植物芳香油的提取可采用的方法有壓榨法、 和 ?！?〕芳香油溶解性的特點是不溶于 ，易溶于 ，因此可用 作為提取劑來提取芳香油。〔3〕橘子果實含有芳香油，通常可用作為材料提取芳香油，而且提取時往往選用新鮮的材料，理由是 ?！?〕對材料壓榨后可得到糊狀液體，為除去其中(qízhōng)的固體物獲得乳狀液可采用的方法是 。第四十二頁，共61頁。〔5〕得到的乳狀液參加氯化鈉并放置一段時間后，芳香油將分布(fēnbù)于液體的 層，原因是 。參加氯化鈉的作用是?！?〕從乳狀液中別離得到的芳香油中要參加無水硫酸鈉，此劑的作用是 。答案〔1〕蒸餾法萃取法〔2〕水有機溶劑有機溶劑〔3〕橘子皮芳香油含量較高〔4〕過濾〔5〕上油層的密度(mìdù)比水層小增加水層密度(mìdù)，使油和水分層〔6〕吸收芳香油中殘留的水分第四十三頁，共61頁。2.〔09·遼寧、寧夏卷〕〔1〕在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮、和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗(shíyàn)材料。〔2〕在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行〔消毒、滅菌〕；操作者的雙手需要進行清洗和；靜止空氣中的細菌可用紫外線殺滅，其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能。〔3〕假設用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù)，要想使所得估計值更接近實際值，除應嚴格操作、屢次重復外，還應保證待測樣品稀釋的。第四十四頁，共61頁?！?〕通常，對獲得(huòdé)的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、 大小等菌落特征對細菌進行初步的。〔5〕培養(yǎng)大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應采用的檢測方法是 。〔6〕假設用大腸桿菌進行實驗，使用(shǐyòng)過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過處理后才能丟棄，以防止培養(yǎng)物的擴散。解析〔1〕影響微生物培養(yǎng)的因素除了營養(yǎng)條件外，外界條件主要包括溫度、酸堿度和滲透壓等。由于大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇(xuǎnzé)、易培養(yǎng)、生活周期短等優(yōu)點，所以常作為遺傳學研究的實驗材料。第四十五頁，共61頁。〔2〕對于培養(yǎng)基和培養(yǎng)器皿要進行滅菌，對操作者的雙手需要進行清洗和用酒精消毒，靜止空氣中的細菌在用紫外線照射后能夠使蛋白質(zhì)變性，并損傷DNA結(jié)構(gòu)，使細菌死亡?！?〕樣品的稀釋直接影響平板上生長的菌落的數(shù)目，實際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得的菌落數(shù)在30~300之間?！?〕菌落的特征是判斷微生物的種類的重要依據(jù)。對獲得的純菌可以依據(jù)菌落的特征對細菌進行初步檢測?！?〕要判斷固體培養(yǎng)基是否被污染，可將未接種的培養(yǎng)基在適宜(shìyí)的溫度下培養(yǎng)一段時間，假設發(fā)現(xiàn)有菌落說明培養(yǎng)基已被污染。第四十六頁，共61頁?！?〕進行微生物培養(yǎng)時，使用過的培養(yǎng)基及培養(yǎng)物必須經(jīng)滅菌后才能丟棄，防止培養(yǎng)的微生物擴散到環(huán)境中，造成危害。答案〔1〕溫度酸堿度易培養(yǎng)生活周期短〔2〕滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)〔3〕比例適宜〔4〕鑒別〔或分類〕〔5〕將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置(fàngzhì)適宜的時間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生〔6〕滅菌第四十七頁，共61頁。3.〔09·上海卷〕答復以下有關植物組織培養(yǎng)的問題?！?〕用于植物組織培養(yǎng)的植物材料稱為?！?〕組織培養(yǎng)中的細胞，從分化狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)槲捶只癄顟B(tài)的過程稱為?！?〕在再分化階段所用培養(yǎng)基中，含有植物激素X和植物激素Y。逐漸改變(gǎibiàn)培養(yǎng)基中這兩種植物激素的濃度比，未分化細胞群的變化情況如以以下圖所示。據(jù)圖指出兩種激素的不同濃度比與形成芽、根、愈傷組織的關系：第四十八頁，共61頁。①當植物激素X與植物激素Y的濃度比等于1時， ；② ；③ ?！?〕假設植物激素Y是生長素，在植物組織培養(yǎng)中其主要作用是；那么植物激素X的名稱是?！?〕生產(chǎn)上用試管苗保存(bǎocún)植物優(yōu)良性狀，其原因是 。解析〔1〕植物組織培養(yǎng)時所取材料稱為外植體。〔2〕讓已經(jīng)分化的細胞，經(jīng)過誘導(yòudǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成未分化細胞的過程，稱為脫分化?！?〕據(jù)圖可得當激素X與激素Y的濃度比為1時，未分第四十九頁，共61頁?；募毎盒纬捎鷤M織；當激素X與激素Y的濃度比大于1時，未分化的細胞群分化形成芽；當激素X與激素Y的濃度比小于1時，未分化的細胞群分化形成根?！?〕生長素的作用是促進細胞生長、分裂(fēnliè)和分化；植物激素X能促進細胞分裂(fēnliè)，是細胞分裂(fēnliè)素?！?〕試管苗為無性繁殖系，能夠保持親本的一切性狀，不發(fā)生性狀別離。答案〔1〕外植體〔2〕去分化〔脫分化〕〔3〕①未分化細胞群經(jīng)分裂(fēnliè)形成愈傷組織②當植物激素X與植物激素Y的濃度比大于1時，未分化細胞群分化形成芽③當植物激素X與植物激素Y的濃度比小于1時，未分化細胞群分化形成根第五十頁，共61頁?！?〕促進細胞的生長〔伸長〕、分裂和分化細胞分裂素〔5〕組織培養(yǎng)形成試管苗的過程屬于無性生殖，后代不發(fā)生性狀(xìngzhuàng)別離 素的性質(zhì)，答復以下問題。 〔1〕胡蘿卜素是色的結(jié)晶。從胡蘿卜中提 取胡蘿卜素時，常用(chánɡyònɡ)作為溶劑，原因是 ?！?〕從胡蘿卜中提取胡蘿卜素常用(chánɡyònɡ)的方法是法。 用這種方法提取胡蘿卜素的主要步驟是：粉碎、干 燥、、、。第五十一頁，共61頁?！?〕在胡蘿卜顆粒的加熱過程中，應嚴格將和 控制在一定范圍內(nèi)，原因是。〔4〕提取的胡蘿卜素可通過法進行鑒定，在鑒定過程中需要用對照?！?〕一般情況下，提取胡蘿卜素時，提取效率(xiàolǜ)與原料顆粒的含水量成比。解析〔1〕胡蘿卜素的顏色(yánsè)是橘〔橙〕黃色，胡蘿卜素是脂類物質(zhì)，根據(jù)相似相溶原理，易溶于親脂性有機溶劑?！?〕提取胡蘿卜素常用萃取方法，步驟：胡蘿卜→粉碎→枯燥→萃取→過濾→濃縮→胡蘿卜素?！?〕胡蘿卜顆粒在加熱過程中，應嚴格將溫度和時間控制在一定范圍內(nèi)，防止胡蘿卜素因溫度過高和時第五十二頁，共61頁。間過長而導致分解。〔4〕提取到的胡蘿卜素通過紙層析法鑒定，該過程需要用標準樣品作為對照?！?〕一般(yībān)情況下，提取胡蘿卜素時，提取效率與原料顆粒含水量成反比。答案〔1〕橘〔橙〕黃親脂性有機溶劑〔或有機溶劑〕胡蘿卜素是脂類物質(zhì)〔2〕萃取萃取過濾濃縮〔3〕溫度時間溫度過高和時間過長會導致胡蘿卜素分解〔4〕紙層析標準樣品〔5〕反第五十三頁，共61頁。5.葡萄汁、葡萄酒都具有一定的保健養(yǎng)生成效，隨著人們生活水平的提高，我國葡萄汁、葡萄酒的需求量逐年增長。請答復：〔1〕葡萄可用來制作葡萄汁、葡萄酒，為減少(jiǎnshǎo)資源浪費，提高產(chǎn)品的附加值，可對葡萄做怎樣的處理？?！?〕制作葡萄酒時，為防止發(fā)酵液被污染，應采取的措施是；在制作過程中，一般將溫度控制在18～25℃，原因是?！?〕為研究發(fā)酵罐中酵母菌的生長狀況，常要取樣統(tǒng)計分析，并測定pH，判斷取樣先后順序的主要依據(jù)是。第五十四頁，共61頁?！?〕葡萄梗的主要成分為木質(zhì)素、纖維素和半纖維素，但是酵母菌無法直接利用，原因是其 。請你提出一種解決該問題的方法