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文檔簡介

細菌內毒素檢查

（凝膠法）

細菌內毒素檢查法凝膠法方法分類 濁度法光度法顯色基質法重現性好方法特性能定量能控制藥物的增強/抑制干擾操作簡便。節(jié)省時間原理：利用鱟血液中的變性細胞，經裂解液和機械方式促使細胞破裂而提取到的一種細胞溶解物，能與極微量的細菌內毒素形成特異凝膠反應，反應的速度和凝膠的堅固程度與內毒素濃度有關.細菌內毒素檢測之凝膠法實驗程序1、試驗準備：試劑、儀器及用具2、內毒素限值的確定3、確定最大有效稀釋倍數4、凝膠限度試驗5、結果判定要求1、以最終產品為檢測必要（濃度超過0.5mg/ml）2、檢測樣品PH應在6~8之間，不符應調整1、試驗準備：試劑、儀器及用具

儀器與器具電熱恒溫水浴鍋、定時鐘、去熱源槍頭和小玻璃瓶、移液槍、試管架、剪刀、錫箔紙。試劑細菌內毒素工作標準品、細菌內毒素檢查用水、鱟試劑。2、內毒素限值的確定

L=K/M式中L為供試品的細菌內毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K為人每千克體重每小時最大可接受的內毒素劑量，以EU/（kg·h）表示；M為人用每千克體重每小時的最大供試品劑量，以ml/（kg·h）、mg/（kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供試品提供者直接提供內毒素限值如1000EU。3、鱟試劑靈敏度復核

按下表制備溶液A、B、C，使用稀釋倍數為MVD的供試品溶液來制備溶液A，按鱟試劑靈敏度復核試驗項下操作。

BCAA鱟試劑200ul100ul100ul100ul標準品100ul供試品100ul100ul操作注意事項試驗前準備：1、玻璃器具應規(guī)范化，便于除熱原、計量準確、清洗操作方便。2、用于內毒素檢測的稀釋試管最好用玻璃試管；塑料用具只能為一次性且保證無內毒素。實驗環(huán)境：最好在潔凈室或潔凈工作臺內進行，保證環(huán)境溫度、濕度及通風穩(wěn)定。實驗人員：戴干凈手套和口罩。5、恒溫器的溫度變化應<1℃，鱟試劑與樣品混勻后應立即移入水浴槽，嚴格控制保溫時間在60±2min，保溫期間不得移動試管架，桌面保持平穩(wěn)，周圍不能有振顫因素。結

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