細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)質(zhì)量控制課件

細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)

質(zhì)量控制張培生DNA倍體分析從標(biāo)本取材到報告的發(fā)放有很多的步驟！只有做好每一個環(huán)節(jié)才能使最終的結(jié)果更加的可靠！

質(zhì)量控制的環(huán)節(jié)一、婦科標(biāo)本：1.取材部位移行區(qū)宮頸癌的高發(fā)部位宮頸上皮和鱗柱交界育齡期經(jīng)產(chǎn)婦女移行帶2.取材時去除明顯的粘液同一個方向旋轉(zhuǎn)3-5圈，取到足夠多的細(xì)胞！3.要避免用力拭擦引起出血血性標(biāo)桿并不能提高檢出癌癥的敏感性，紅細(xì)胞干擾TBS閱片（不影響DNA倍體分析），血液中1%的白細(xì)胞某種程度上干擾DNA報告解讀，底層細(xì)胞處于細(xì)胞周期中，也會干擾DNA報告解讀，細(xì)胞數(shù)目少，影響診斷標(biāo)本的取材及保存二、胸腹水標(biāo)本：1、取100-250ml胸腔積液腹腔積液收集于加有15ml109mmol/L枸櫞酸鈉的標(biāo)本采集瓶中立即送檢！2、收到標(biāo)本后立即離心2000轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘，緩緩倒掉上清液后振勻取5到10滴加入固定液中固定保存1小時以上！標(biāo)本的取材及保存標(biāo)本瓶瓶蓋旋緊申請單于標(biāo)本瓶對應(yīng)兩周內(nèi)送檢冰箱4度冷藏標(biāo)本保存制片：1.合適的細(xì)胞濃度細(xì)胞分布均勻能減少分析儀掃描時候，也有利于細(xì)胞的觀察。細(xì)胞少時制片不要太稀了!2.離心后的沉渣松散或上粘液較多時在倒上清液時緩慢，不要把沉渣一起倒掉了！可在加水在粘液較多的標(biāo)本中混勻后在離心制片！3.干透后在染色，否則容易掉片！制片及染色染色：1.所有染液的濃度要按比例配制！BS固定液和4N鹽酸要提前配制！可以回收2－3次！最好不要次數(shù)太多！2.DNA染液不能重復(fù)使用！染液的的攪拌時間溫度都有嚴(yán)格的要求！染色過程染色的時間、溫度、水溫的控制,這些條件都對染色的結(jié)果有很大的影響！在染色過程中必須嚴(yán)格按照DNA染色的程序要求來進行操作。3.貴州冬天天氣寒冷！要求所有染液及配制、洗滌用水必須放置到溫箱中溫到染色溫度！制片及染色5.水解使DNA為Feulgen反應(yīng)做好準(zhǔn)備

對溫度的依賴性很大，所以需要控溫

水解時間35度25分鐘!時間嚴(yán)格要求！制片及染色5.漂洗

漂洗目的是去除過量的非特異染色的染料為什么會有非特異染色的染料？硫堇是平面分子且?guī)ш栃噪姾桑梢愿鶧NA結(jié)合。但是這種染色不是永久性的，因此具有很高的可變性制片及染色制片染色步驟中的注意事項B.S固定液中甲醛不要污染了DNA染色液洗手液污染各步驟的時間和溫度需要適當(dāng)控制各種配制用水，洗滌用水及各種試劑要恒溫！每次染色放標(biāo)準(zhǔn)片染色過深或過淺影響結(jié)果IOD過淺影響機器的識別過深有非特異性染色制片和染色

細(xì)胞DNA圖像分析儀光路校準(zhǔn)每天校準(zhǔn)背景圖像保存標(biāo)準(zhǔn)片----CV,線性化情況，IOD

細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)細(xì)胞篩選：我們知道最后的結(jié)果是細(xì)胞篩選后的。因此如果細(xì)胞篩選出現(xiàn)問題，那么陽性可能非陽性，陰性的可能非陰性，出現(xiàn)假陽性或假陰性，后面的都變得沒有意義。細(xì)胞篩選是需要經(jīng)驗判斷的，因此遇到不好判斷的情況可先顯微鏡下觀察！如還不能確定可聯(lián)系質(zhì)控部。

細(xì)胞篩選注意事項質(zhì)控過程中發(fā)現(xiàn)過刪的現(xiàn)象比較多，細(xì)胞核上面有點點不像就把它去掉或只留細(xì)胞看上去染色質(zhì)均勻的細(xì)胞，這些做法是危險的，可能會漏檢掉很多病例甚至漏檢宮頸癌而引起醫(yī)療事故。不發(fā)不合要求的報告是對病人的負(fù)責(zé)也是對自己的保護。特殊情況可咨詢質(zhì)控部。細(xì)胞篩選注意事項滿足以下條件的標(biāo)本為滿意的標(biāo)本：1.標(biāo)本片的IOD值在100—140之間，且掃描達(dá)到細(xì)胞數(shù)目應(yīng)不少于8000；2.標(biāo)本片的IOD值在100—140之間，細(xì)胞數(shù)目不足8000，但被判定為陽性的標(biāo)本；3.標(biāo)本片的IOD值在100—140之間，且細(xì)胞數(shù)目為1000—8000，但掃描時間達(dá)到設(shè)定的上限60分鐘；4.標(biāo)本片的IOD值在100—140之間，且細(xì)胞數(shù)目為1000—8000，但標(biāo)本片完成全片掃描。滿足上述標(biāo)本滿意條件之一，即可出具DNA倍體定量檢測報告。

診斷質(zhì)控指標(biāo)對于實體瘤而言,