細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)質(zhì)量控制課件

細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)

質(zhì)量控制張培生DNA倍體分析從標(biāo)本取材到報(bào)告的發(fā)放有很多的步驟！只有做好每一個(gè)環(huán)節(jié)才能使最終的結(jié)果更加的可靠！

質(zhì)量控制的環(huán)節(jié)一、婦科標(biāo)本：1.取材部位移行區(qū)宮頸癌的高發(fā)部位宮頸上皮和鱗柱交界育齡期經(jīng)產(chǎn)婦女移行帶2.取材時(shí)去除明顯的粘液同一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)3-5圈，取到足夠多的細(xì)胞！3.要避免用力拭擦引起出血血性標(biāo)桿并不能提高檢出癌癥的敏感性，紅細(xì)胞干擾TBS閱片（不影響DNA倍體分析），血液中1%的白細(xì)胞某種程度上干擾DNA報(bào)告解讀，底層細(xì)胞處于細(xì)胞周期中，也會(huì)干擾DNA報(bào)告解讀，細(xì)胞數(shù)目少，影響診斷標(biāo)本的取材及保存二、胸腹水標(biāo)本：1、取100-250ml胸腔積液腹腔積液收集于加有15ml109mmol/L枸櫞酸鈉的標(biāo)本采集瓶中立即送檢！2、收到標(biāo)本后立即離心2000轉(zhuǎn)/分鐘離心8分鐘，緩緩倒掉上清液后振勻取5到10滴加入固定液中固定保存1小時(shí)以上！標(biāo)本的取材及保存標(biāo)本瓶瓶蓋旋緊申請單于標(biāo)本瓶對應(yīng)兩周內(nèi)送檢冰箱4度冷藏標(biāo)本保存制片：1.合適的細(xì)胞濃度細(xì)胞分布均勻能減少分析儀掃描時(shí)候，也有利于細(xì)胞的觀察。細(xì)胞少時(shí)制片不要太稀了!2.離心后的沉渣松散或上粘液較多時(shí)在倒上清液時(shí)緩慢，不要把沉渣一起倒掉了！可在加水在粘液較多的標(biāo)本中混勻后在離心制片！3.干透后在染色，否則容易掉片！制片及染色染色：1.所有染液的濃度要按比例配制！BS固定液和4N鹽酸要提前配制！可以回收2－3次！最好不要次數(shù)太多！2.DNA染液不能重復(fù)使用！染液的的攪拌時(shí)間溫度都有嚴(yán)格的要求！染色過程染色的時(shí)間、溫度、水溫的控制,這些條件都對染色的結(jié)果有很大的影響！在染色過程中必須嚴(yán)格按照DNA染色的程序要求來進(jìn)行操作。3.貴州冬天天氣寒冷！要求所有染液及配制、洗滌用水必須放置到溫箱中溫到染色溫度！制片及染色5.水解使DNA為Feulgen反應(yīng)做好準(zhǔn)備

對溫度的依賴性很大，所以需要控溫

水解時(shí)間35度25分鐘!時(shí)間嚴(yán)格要求！制片及染色5.漂洗

漂洗目的是去除過量的非特異染色的染料為什么會(huì)有非特異染色的染料？硫堇是平面分子且?guī)ш栃噪姾?，可以跟DNA結(jié)合。但是這種染色不是永久性的，因此具有很高的可變性制片及染色制片染色步驟中的注意事項(xiàng)B.S固定液中甲醛不要污染了DNA染色液洗手液污染各步驟的時(shí)間和溫度需要適當(dāng)控制各種配制用水，洗滌用水及各種試劑要恒溫！每次染色放標(biāo)準(zhǔn)片染色過深或過淺影響結(jié)果IOD過淺影響機(jī)器的識別過深有非特異性染色制片和染色

細(xì)胞DNA圖像分析儀光路校準(zhǔn)每天校準(zhǔn)背景圖像保存標(biāo)準(zhǔn)片----CV,線性化情況，IOD

細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)細(xì)胞篩選：我們知道最后的結(jié)果是細(xì)胞篩選后的。因此如果細(xì)胞篩選出現(xiàn)問題，那么陽性可能非陽性，陰性的可能非陰性，出現(xiàn)假陽性或假陰性，后面的都變得沒有意義。細(xì)胞篩選是需要經(jīng)驗(yàn)判斷的，因此遇到不好判斷的情況可先顯微鏡下觀察！如還不能確定可聯(lián)系質(zhì)控部。

細(xì)胞篩選注意事項(xiàng)質(zhì)控過程中發(fā)現(xiàn)過刪的現(xiàn)象比較多，細(xì)胞核上面有點(diǎn)點(diǎn)不像就把它去掉或只留細(xì)胞看上去染色質(zhì)均勻的細(xì)胞，這些做法是危險(xiǎn)的，可能會(huì)漏檢掉很多病例甚至漏檢宮頸癌而引起醫(yī)療事故。不發(fā)不合要求的報(bào)告是對病人的負(fù)責(zé)也是對自己的保護(hù)。特殊情況可咨詢質(zhì)控部。細(xì)胞篩選注意事項(xiàng)滿足以下條件的標(biāo)本為滿意的標(biāo)本：1.標(biāo)本片的IOD值在100—140之間，且掃描達(dá)到細(xì)胞數(shù)目應(yīng)不少于8000；2.標(biāo)本片的IOD值在100—140之間，細(xì)胞數(shù)目不足8000，但被判定為陽性的標(biāo)本；3.標(biāo)本片的IOD值在100—140之間，且細(xì)胞數(shù)目為1000—8000，但掃描時(shí)間達(dá)到設(shè)定的上限60分鐘；4.標(biāo)本片的IOD值在100—140之間，且細(xì)胞數(shù)目為1000—8000，但標(biāo)本片完成全片掃描。滿足上述標(biāo)本滿意條件之一，即可出具DNA倍體定量檢測報(bào)告。

診斷質(zhì)控指標(biāo)對于實(shí)體瘤而言,