厭氧菌-病原生物學(xué)教研室

厭氧菌病原生物學(xué)教研室梭菌屬(Clostridium)

是一群專(zhuān)性厭氧、能形成芽胞、G＋的粗大桿菌。它們廣泛分布于自然界的土壤中，有些可寄生在動(dòng)物和人體的腸道內(nèi)。模式種為丁酸梭菌(C.butyricum)。破傷風(fēng)梭菌(C.tetani)：破傷風(fēng)；

產(chǎn)氣莢膜梭菌(C.perfringens)：氣性壞疽；

肉毒梭菌(C.botulinum)：肉毒中毒；

艱難梭菌(C.difficile)：假膜性結(jié)腸炎。生物學(xué)性狀

形態(tài)與染色生物學(xué)性狀培養(yǎng)特性破傷風(fēng)梭菌

平板培養(yǎng)基：不規(guī)則菌落；肉渣培養(yǎng)基：肉渣部分被消化，微變黑；肉毒梭菌(C.botulinum)平板培養(yǎng)基：不規(guī)則菌落；肉渣培養(yǎng)基：肉渣被消化，有惡臭。產(chǎn)氣莢膜梭菌血平板培養(yǎng)基：繁殖極快，有雙環(huán)溶血內(nèi)-----窄的乙型溶血環(huán)；外-----寬的半溶血環(huán)；肉渣培養(yǎng)基：不消化肉渣，粉紅色；

牛乳培養(yǎng)基：洶涌發(fā)酵(stormyfermentation)；生物學(xué)性狀培養(yǎng)特性生物學(xué)性狀抵抗力繁殖體的抵抗力與一般細(xì)菌相似。但芽胞抵抗力很強(qiáng)，能耐煮沸15～90min，5%石炭酸經(jīng)15h才能殺滅，芽胞在土壤中可存活數(shù)十年。

破傷風(fēng)梭菌

致病物質(zhì)

破傷風(fēng)痙攣毒素(tetanospasmin)：1）一種強(qiáng)毒性蛋白質(zhì)，不耐熱，可被腸道蛋白酶破壞。2）由細(xì)菌質(zhì)粒編碼，由兩條肽鏈借二硫鍵聯(lián)結(jié)而成：α輕鏈：具有毒性作用；β重鍵：能與神經(jīng)節(jié)苷脂(ganglioside)結(jié)合；3）神經(jīng)毒素，對(duì)腦干神經(jīng)和脊髓前角細(xì)胞有高度親合力。

4）毒性極強(qiáng)，每毫克純化的結(jié)晶可殺死2000萬(wàn)只小鼠。具有免疫原性，經(jīng)0.3%甲醛作用4w后脫毒成為類(lèi)毒素。致病性與免疫性致病性與免疫性致病條件1）傷口深而窄；2）混有泥土、異物，壞死組織較多、局部組織缺血；3）同時(shí)伴有需氧菌混合感染。

致病性性與免疫性性發(fā)病機(jī)機(jī)理破傷風(fēng)風(fēng)梭菌菌及芽芽胞機(jī)機(jī)體局局部部生長(zhǎng)長(zhǎng)繁殖殖外外毒毒素脊髓前前角，，并可可到達(dá)達(dá)腦干干封封閉抑抑制性性突觸觸的介質(zhì)釋釋放伸伸肌、、屈肌肌同時(shí)時(shí)強(qiáng)烈烈收縮縮強(qiáng)強(qiáng)直直痙攣攣傷口附附近肌肌肉痙痙攣，，嚼肌痙痙攣(引起起牙關(guān)關(guān)緊閉閉和吞吞咽困困難);軀干及及四肢肢肌肉肉強(qiáng)直直(呈呈特有有的角角弓反反張?bào)w體征);膈肌痙痙攣，，呼吸吸困難難窒窒息而而死。創(chuàng)傷神經(jīng)纖纖維的的間隙隙淋巴液液和血血液致病性性與免疫性性免疫性性破傷風(fēng)風(fēng)免疫疫是典典型的的抗毒毒素免免疫：：微量毒毒素即即可致致病，，不足足以引引起免免疫；；并且且毒素素迅速速與神神經(jīng)組組織牢牢固結(jié)結(jié)合，，不能能有效效地刺刺激免免疫系系統(tǒng)引引起免免疫應(yīng)應(yīng)答。。有效地地獲得得抗毒毒素的的途徑徑是通通過(guò)類(lèi)類(lèi)毒素素的預(yù)預(yù)防注注射而而獲得得的自自動(dòng)免免疫，，或通通過(guò)注注入大大劑量量抗毒毒素而而獲得得的被被動(dòng)免免疫。。破傷風(fēng)的的臨床診診斷主要要結(jié)合創(chuàng)創(chuàng)傷史和和觀察特特有的體體征。微微生物學(xué)學(xué)檢查對(duì)對(duì)早期診診斷意義義不大，，一般不不做。必要時(shí)可可取傷口口滲出物物或壞死死組織涂涂片染色色鏡檢及及厭氧菌菌培養(yǎng)，，并以培培養(yǎng)物濾濾液做動(dòng)動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)，以確確定有無(wú)無(wú)毒素產(chǎn)產(chǎn)生。微生物學(xué)學(xué)檢查法法1.人工工自動(dòng)免免疫注射精制制破傷風(fēng)風(fēng)類(lèi)毒素。（1）平平時(shí)：對(duì)部隊(duì)?wèi)?zhàn)戰(zhàn)士、建建筑工人人及其他他易受外外傷的人人群：2次基基礎(chǔ)免疫疫/第一一年；1年后加加強(qiáng)免疫疫1次；；加強(qiáng)免免疫1次次/5～～10年年。滿(mǎn)3個(gè)月月至6歲歲兒童：白-百百-破(DPT)3聯(lián)疫苗，，3次，，4～6w/次。孕婦：預(yù)防新新生兒破破傷風(fēng)。。（2）患患者愈后后/早期期接受治治療者：注射類(lèi)類(lèi)毒素-----獲得得有效免免疫。2.人工工被動(dòng)免免疫注射破傷傷風(fēng)抗毒素(tetanusantitoxin,TAT)。緊急預(yù)防防肌肌肉注射射1500～3000單位TAT(防止血清清過(guò)敏反反應(yīng))。。特異治療療早早期足量量用TAT治療。一一般須用用10～～20萬(wàn)萬(wàn)單位。。3.抗生素的的使用大劑量青青霉素或或甲硝唑唑能有效效地抑制制破傷風(fēng)風(fēng)梭菌在在局部病病灶繁殖殖，并對(duì)混合合感染的的細(xì)菌也也有作用用。防治原則則產(chǎn)氣莢膜膜梭菌產(chǎn)氣莢膜膜梭菌產(chǎn)產(chǎn)生的毒毒素和酶酶類(lèi)毒素或者酶類(lèi)生物學(xué)活性α毒素（卵磷脂酶）增加血管通透性，溶解紅細(xì)胞、血小板β毒素組織壞死作用ε毒素具有通透酶活性ι毒素組織壞死作用、ADP的核糖基化作用δ毒素溶解紅細(xì)胞θ毒素溶血毒性和細(xì)胞毒活性κ毒素（膠原酶）膠原酶和明膠酶活性λ毒素蛋白酶活性μ毒素（透明質(zhì)酸酶）透明質(zhì)酸酶活性ν毒素脫氧核糖核酸酶活性、溶血毒性腸毒素增加腸粘膜細(xì)胞通透性神經(jīng)氨酸酶改變神經(jīng)細(xì)胞表面的神經(jīng)節(jié)苷脂受體、促進(jìn)毛細(xì)血管血栓形成致病物質(zhì)質(zhì)致病性致病性所致疾病病氣性壞疽疽(gasgangrene)：氣性壞疽疽是嚴(yán)重重的創(chuàng)傷傷感染性性疾病，，以局部部組織壞壞死、氣氣腫、水水腫、惡惡臭及全全身中毒毒為特征征。細(xì)菌8～48h內(nèi)迅速繁繁殖周周?chē)３＝M織（不入血血）分解肌肉肉和組織織中的糖糖類(lèi)大大量量氣體氣氣腫影響血液液供應(yīng)組組織壞死死。食物中毒毒：A型產(chǎn)氣莢莢膜梭菌菌所產(chǎn)生生的腸毒毒素可引引起食物物中毒。。傷口酶毒素氣性壞疽疽發(fā)病急急劇，后后果嚴(yán)重重，需要要盡早準(zhǔn)準(zhǔn)確的做做出微生生物學(xué)診斷斷，爭(zhēng)取取早期治治療：標(biāo)本鏡鏡檢：：可發(fā)現(xiàn)現(xiàn)G＋大桿菌，，并伴有有其他雜雜菌和少少量形態(tài)態(tài)不規(guī)則的的白細(xì)胞胞。培養(yǎng)基厭厭氧氧培養(yǎng)進(jìn)進(jìn)一步步鑒定:牛乳培養(yǎng)養(yǎng)基生化反應(yīng)應(yīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)微生物學(xué)學(xué)檢查法法預(yù)防措施施主要是是外科處處理：1）及時(shí)時(shí)處理傷傷口，擴(kuò)擴(kuò)創(chuàng)、局局部用H2O2反復(fù)沖洗洗，切除感染及及壞死組組織；2）早期期可用多多價(jià)抗毒毒素血清清；3）同時(shí)時(shí)使用抗抗生素抑抑制細(xì)菌菌繁殖。。由于該菌菌在環(huán)境境中很快快形成芽芽胞，故故必須嚴(yán)嚴(yán)密隔離離病人，，并對(duì)所所用器械械及敷料料徹底滅滅菌，避避免在醫(yī)醫(yī)院內(nèi)傳傳播。防治原則則肉毒梭菌菌致病物質(zhì)質(zhì)肉毒毒素素：根據(jù)Ag不同可將將肉毒桿桿菌分為為A、B、C1、C2、D、E、F和G等8個(gè)型。對(duì)對(duì)人致病病的主要要是A、B、E三個(gè)型。。肉毒毒素素具有嗜嗜神經(jīng)性性，進(jìn)入入機(jī)體后后作用于于腦及周周?chē)窠?jīng)經(jīng)末梢的的神經(jīng)肌肌肉接頭頭處，阻阻止乙酰酰膽堿的的釋放，，導(dǎo)致肌肌肉麻痹痹。眼部肌肉肉麻痹(出現(xiàn)復(fù)復(fù)視、斜斜視、眼眼瞼下垂垂、瞳孔孔散大)；進(jìn)而咽部部肌肉麻麻痹（出出現(xiàn)吞咽咽困難、、言語(yǔ)不不清和呼呼吸困難難）；若繼續(xù)發(fā)發(fā)展終因因呼吸肌肌、心肌肌麻痹而而死亡。。致病性所致疾病病肉毒中毒毒1.食物物肉毒中中毒毒素性食食物中毒毒。食入肉毒毒毒素后后，經(jīng)幾幾小時(shí)至至3d左右潛伏伏期，病病人開(kāi)始始出現(xiàn)惡惡心、嘔嘔吐、頭頭暈、頭頭痛、乏乏力。繼繼而出現(xiàn)現(xiàn)特有的的神經(jīng)麻麻痹癥狀狀和體征征。2.嬰兒兒肉毒中中毒嬰兒因喂喂食有該該菌芽胞胞污染的的蜂蜜或或其他食食物而感感染致病病。3.創(chuàng)傷肉毒毒中毒肉毒梭菌菌的芽胞胞污染了了創(chuàng)傷后后，如果果局部具具備厭氧氧條件，，芽胞發(fā)發(fā)芽形成成繁殖體體而產(chǎn)生生毒素，，毒素被被吸收后后而致病病。致病性動(dòng)物試驗(yàn)驗(yàn)檢出毒毒素：第1組：小鼠鼠腹腔注注入上清清液各0.5ml。如有毒素素，一般般于1～2d出現(xiàn)四肢肢麻痹、、眼瞼下下垂等中中毒癥狀狀，最后死于心心力衰竭和和呼吸困難難；第2組：小鼠注注射煮沸的的上清液，，一般不發(fā)發(fā)??；第3組：小鼠注注射不加熱熱上清液+多價(jià)肉毒抗抗血清，觀觀察保護(hù)作用用。如用分分型抗毒素素還可確定定毒素型別別。微生物學(xué)檢檢查法預(yù)防主要是是加強(qiáng)食品品管理和監(jiān)監(jiān)督，定期期抽樣檢查查。食品進(jìn)食前前加熱煮沸沸即可破壞壞毒素。治療應(yīng)盡早早注射A、B、E3型多價(jià)抗血血清；同時(shí)時(shí)加強(qiáng)護(hù)理及對(duì)對(duì)癥治療。。防治原則艱難梭菌艱難梭菌(C.difficile)為G＋粗大桿菌，，芽胞呈卵卵圓形位于于菌體近極極端。常規(guī)厭氧培培養(yǎng)生長(zhǎng)不不好，對(duì)培培養(yǎng)基的要要求較高，，故名。常常用的培養(yǎng)養(yǎng)基是以蛋蛋黃-果糖瓊脂為為基礎(chǔ)培養(yǎng)養(yǎng)基，加入入環(huán)絲氨酸酸和頭孢西西丁作為選選擇劑。艱難梭菌是是人類(lèi)腸道道中的正常常菌群，但但數(shù)量不多多。當(dāng)長(zhǎng)期期使用氨芐芐青霉素、、頭孢菌素素、紅霉素素、氯林可可霉素以及及抗腫瘤化化學(xué)制劑，，腸道中的的乳桿菌、、雙歧桿菌菌及真菌對(duì)對(duì)艱難梭菌菌的拮抗作作用受到影影響，耐藥藥的艱難梭梭菌可因藥藥物的選擇擇作用而大大量繁殖后后產(chǎn)生毒素素致病，引引發(fā)抗生素相關(guān)關(guān)性腹瀉(antibiotic-associateddiarrhea)；假膜性結(jié)腸腸炎(pseudomembranouscolitis)。臨床表現(xiàn)為為嚴(yán)重腹瀉瀉、腹痛、、伴有全身身中毒癥狀狀，常并發(fā)發(fā)有毒素性性巨結(jié)腸的的形成。治療可用萬(wàn)萬(wàn)古霉素或或甲硝唑，，并口服調(diào)調(diào)整正常菌菌群的制劑劑。擬桿菌屬生物學(xué)性狀狀G－桿菌，長(zhǎng)短短不一，呈呈多形性。。牛心腦浸液液血瓊脂平平板上厭氧氧培養(yǎng)。本屬模式種種為脆弱擬擬桿菌(B.fragilis)。致病性性致病物質(zhì)內(nèi)毒素、莢莢膜、菌毛毛以及所產(chǎn)產(chǎn)生的肝素素酶和膠原原酶。肝素酶可降降解肝素，，促進(jìn)凝血血，有利于于血栓性靜靜脈炎和遷遷徙性膿腫腫的形成，，膠原酶則則有利于細(xì)細(xì)菌的擴(kuò)散散。擬桿菌主要要引起顱內(nèi)內(nèi)、腹腔和和盆腔的感感染。致病條件①屏障作用受受損