過(guò)氧化氫（H2O2）含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書- 微量法UPLC-MS-4547

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微量法產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件試劑一100mL×1瓶（自備）4℃保存試劑二粉劑×1瓶4℃保存試劑三液體6mL×1瓶4℃保存試劑四液體30mL×1瓶4℃保存標(biāo)準(zhǔn)品液體1mL×1支4℃保存溶液的配制：1、試劑一：丙酮自備。2、試劑二：臨用前加入3mL濃鹽酸充分溶解備用，用不完的試劑4℃保存。3、標(biāo)準(zhǔn)品：1mmol/mLH2O2標(biāo)準(zhǔn)液。產(chǎn)品說(shuō)明：H2O2SOD和XODCAT和PODH2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面，H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害，從而加速細(xì)胞的衰老和解體；另一方面H2O2也是許多氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。H2O2與硫酸鈦生成黃色的過(guò)氧化鈦復(fù)合物，在415nm有特征吸收。技術(shù)指標(biāo)：最低檢出限：0.0027μmol/mL線性范圍：0.0195-3μmol/mL注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。需自備的儀器和用品：可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、丙酮、濃鹽酸、研缽/勻漿器和冰。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）5001mL劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（20%3s10s30次；8000g4℃10in冰上待測(cè)。組織樣本的制備：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿；8000g4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。血清（漿）100μL血清（漿）0.9mL4℃10min清，置冰上待測(cè)。二、測(cè)定步驟1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至415nm，蒸餾水調(diào)零。2、將試劑二、三和四37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。3、如果用96孔板將則用丙酮將1mmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液稀釋為2μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微量玻璃比色皿則用丙酮將試劑名稱（μL）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本250標(biāo)準(zhǔn)溶液試劑名稱（μL）測(cè)定管標(biāo)準(zhǔn)管空白管樣本250標(biāo)準(zhǔn)溶液250試劑一250試劑二252525試劑三5050504000g，常溫離心10min，棄上清，留沉淀（可先用丙酮清洗3-5次來(lái)洗去植物色素）試劑四2502502505mn200μL轉(zhuǎn)移至微量玻璃比色皿或96孔板中測(cè)定415nm（1-2次即可）。計(jì)算?A測(cè)定=A測(cè)定管-A空白管，?A標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。三、H2O2含量計(jì)算A、按96孔板計(jì)算1、按照細(xì)菌、細(xì)胞數(shù)量計(jì)算：H2O2含量（μmol/104cell）=?A測(cè)定÷(?A標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)液)×V樣本÷(500×V樣本÷V提取)=0.004×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)2、按組織質(zhì)量計(jì)算：H2O2含量（μmol/g質(zhì)量）=?A測(cè)定÷（?A標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)液）×V樣本÷(V樣本÷V提取×W)=2×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷W3、按照蛋白濃度計(jì)算：H2O2含量（μmol/mgprot）=?A測(cè)定÷（?A標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)液）×V樣本÷（Cpr×V樣本）=2×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)÷Cpr4、按血清（漿）體積計(jì)算：H2O2含量(μmol/mL)=?A測(cè)定÷（?A標(biāo)準(zhǔn)÷C標(biāo)液）×10=20×?A測(cè)定÷?A標(biāo)準(zhǔn)[0.1mL血清（漿）+0.9mL試劑一]÷0.1mL血清（漿）=10。B、按微量玻璃比色皿計(jì)算將公式中的C標(biāo)液-2μmol/mL改為C標(biāo)液-1μmol/mL進(jìn)行計(jì)算即可。注意事項(xiàng)：1、由于試劑一