幾丁質(zhì)酶活性檢測試劑盒說明書- 可見分光光度法UPLC-MS-4230

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網(wǎng)址：本產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質(zhì)檢測技術(shù)有限公司第第頁幾丁質(zhì)酶活性檢測試劑盒說明書貨號：UPLC-MS-4230

可見分光光度法產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體30mL×1瓶2-8℃保存試劑一液體15mL×1瓶2-8℃保存試劑二液體12mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體5mL×1瓶2-8℃保存試劑四A粉劑×2瓶2-8℃保存試劑四B液體70mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制：1、試劑二：此試劑為懸濁液，使用前需搖勻；2、試劑三：飽和溶液，低溫（2-8℃）條件取出會有晶體析出，60℃加熱使其溶解即可；332mLB2-8℃445mgN-1mL5mg/mL5000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，2-8℃可以保存4周。產(chǎn)品說明：幾丁質(zhì)酶主要存在于蝦、蟹、昆蟲等甲殼類動物的外殼與軟體動物的器官（例如烏賊的軟骨），以及真菌類的細(xì)胞壁中。而幾丁質(zhì)酶（EC4）可催化幾丁質(zhì)水解，具有抵御真菌侵染的作用，成為抗真菌病害的研究熱點(diǎn)。幾丁質(zhì)酶水解幾丁質(zhì)產(chǎn)生N-585nmChitin

Chitinase

N-Acetylglucosamine

OH-

GlucoseOxazolineGlucoseOxazoline+P-Dimethylaminobenzaldehyde

Chromogenicsubstances（585nm）2-3可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋/恒溫培養(yǎng)箱、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1L為1~1001g1L，10000g4℃20min25001mL（2300次1000離心0n3、液體：直接測定。(若溶液呈現(xiàn)渾濁，則離心取上清后再測定)二、測定步驟1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到585nm，蒸餾水調(diào)零。2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：將標(biāo)準(zhǔn)品用試劑一分別稀釋為100、80、40、20、10、5、2.5、1.25μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。3、標(biāo)準(zhǔn)液稀釋表序號稀釋前濃度（μg/mL）試劑一）稀釋后濃度（μg/mL）15000100400100021000200180010003100800200804805005004054050050020620500500107105005005855005002.592.55005001.25實(shí)驗(yàn)中每個標(biāo)準(zhǔn)管需250μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。4、操作表：試劑名稱（μL）對照管測定管空白管標(biāo)準(zhǔn)管粗酶液200200--試劑一100100--試劑二200200--37℃酶促反應(yīng)1小時-上清液250250--試劑一--250-標(biāo)準(zhǔn)液250試劑三50505050混勻，常溫靜置5min混勻，沸水浴5min，流水冷卻至常溫試劑四75075075075037℃20min1mL585nm處吸光值，分別記為AAAA標(biāo)準(zhǔn)。計(jì)算ΔA=A測定-A對照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。（標(biāo)準(zhǔn)曲線和空白管只需測1-2次即可）三、幾丁質(zhì)酶活性計(jì)算LAA代入x（μg/mL）。37℃1μgN-（U/g樣酶活性定義：37℃下，每mg蛋白每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。幾丁質(zhì)酶活性（U/mgprot）=x×V酶促÷（V樣×Cpr）÷T=2.5×x÷Cpr酶活性定義：37℃下，每104個細(xì)胞每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。幾丁質(zhì)酶活性（U/104cell）=x×V酶促÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T=2.5×x÷細(xì)胞數(shù)量酶活性定義：37℃下，每mL液體每小時分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生1μgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量為一個酶活性單位。幾丁質(zhì)酶活性（U/mL）=x×V酶促÷V樣÷T=2.5×xV樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.5mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W