山梨醇脫氫酶（SDH）活性檢測(cè)試劑盒說明書-微量法UPLC-MS-4248

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微量法UPLC-MS-4248100T/96S試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體110mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×5瓶2-8℃保存試劑二液體4mL×1瓶2-8℃保存試劑三液體4mL×1瓶2-8℃保存試劑四粉劑×5支-20℃保存試劑五液體25mL×1瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支-20℃保存溶液的配制：1、試劑一：取3.4mL試劑五加入1瓶試劑一粉劑中溶解，再加入一支試劑四，現(xiàn)用現(xiàn)配，24h變質(zhì)；2、標(biāo)準(zhǔn)品：臨用前加入1.4mL蒸餾水，即10μmol/mLNADH標(biāo)準(zhǔn)品。-20℃保存4周，避免反復(fù)凍融。SDH（EC4）SDHNAD+NADHNADHNBTSDHSorbitol+NAD+

SDH

NADH+H++FructoseH++PMS+NBT Formazan（570nm）注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。//96一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）1104個(gè)（L為501001（501L（冰浴功率0031030次800×g℃102（L為15~100.1g1L，8000×g4℃10min3、血清（漿）樣本：直接檢測(cè)。二、測(cè)定步驟1、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570nm，可見分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。2、標(biāo)準(zhǔn)管的測(cè)定：將10μmol/mLNADH標(biāo)準(zhǔn)品用水稀釋至1.5、1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.3μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液(1)序號(hào)稀釋前濃度（μmol/mL）標(biāo)準(zhǔn)液體積（μL）蒸餾水體積（μL）110301701.5210100900131180200.941160400.851140600.761120800.6711001000.581801200.491601400.3實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需20μL標(biāo)準(zhǔn)溶液。（2）標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定表試劑名稱(μL)標(biāo)準(zhǔn)管空白管標(biāo)準(zhǔn)溶液20-蒸餾水-20試劑二3030試劑三3030試劑一12012020200μL/96570nm下的吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，計(jì)算ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管。標(biāo)準(zhǔn)曲線只需做1-2次。3、樣本的測(cè)定：試劑名稱(μL)測(cè)定管樣本20試劑二30試劑三30試劑一120/9610A1，3nm310秒時(shí)的吸光度，計(jì)算ΔA=A2-A1（）三、SDH活性計(jì)算1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：ΔA測(cè)定（y，ΔA測(cè)定）帶入公式計(jì)算樣本濃度（x，μmol/mL）。2、SDH活性計(jì)算：（）SDH單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘生成1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。SDH（U/mL）=1000×x×V樣÷V樣÷T=333×xSDH1）按樣本蛋白濃度計(jì)算單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。SDH（U/mg樣樣2）單位的定義：每g組織每分鐘消耗1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。SDH（U/g樣樣樣總3）按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算單位的定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成1nmolNADH定義為一個(gè)酶活力單位。SDH（U/104cell）=1000×x×V樣÷(