病原學(xué)診斷與防治課件

致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原檢測其它檢測形態(tài)、結(jié)構(gòu)、染色性涂片鏡檢菌落特征生化反應(yīng)藥敏試驗血清學(xué)反應(yīng)沉淀反應(yīng)協(xié)同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）細菌核酸（PCR）噬菌體分離細菌素測定分子生物學(xué)技術(shù)動物試驗致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原1人體受致病菌感染后，其免疫系統(tǒng)被刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答而產(chǎn)生特異性抗體。抗體的量常隨感染過程而增多，表現(xiàn)為效價（滴度）的升高。因此，用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。常用方法：直接凝集試驗、乳膠凝集試驗、沉淀試驗、補體結(jié)合試驗、中和試驗、ELISA。第二節(jié)血清學(xué)診斷人體受致病菌感染后，其免疫系統(tǒng)被刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答而產(chǎn)生特異2第二節(jié)病毒學(xué)診斷

一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）1早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前1~2天）2根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標本3病毒易被滅活（細胞內(nèi)寄生，怕熱不怕冷），低溫保存，快速送檢4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）5血清學(xué)實驗檢查抗體（雙分血清）第二節(jié)病毒學(xué)診斷一標本的采集與送檢（principl3二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒的分離方法動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況雞胚培養(yǎng)不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationa4病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標細胞的變化（1）出現(xiàn)細胞病變效應(yīng)（CPE）：即某些病毒在細胞內(nèi)增殖引起的特有的細胞病變（細胞變圓、聚集、壞死、脫落等）（2）形成細胞融合（多巨核細胞）（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。（病毒增殖場所）紅細胞吸附干擾現(xiàn)象細胞代謝改變（pH）病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標細胞的變化5正常細胞病變細胞正常細胞病變細胞6（二）病毒的數(shù)量與感染性測定（三）新分離病毒的鑒定核酸類型、理化性狀、形態(tài)、血清學(xué)鑒定、基因測序和生物對比。（二）病毒的數(shù)量與感染性測定7一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。2根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標本酶免疫技術(shù)（EIA）等。細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法四、病毒感染的快速診斷（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)?；蛑委煟ǚ戳x寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）四、病毒感染的快速診斷基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction，PCRDNA）光鏡——大病毒和包涵體——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒DNA印跡雜交（Southernblot）4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄（2）形成細胞融合（多巨核細胞）（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。三、病毒感染的血清學(xué)診斷用已知病毒抗原檢測病人血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾?。ㄖ泻蛯嶒?、補體結(jié)合實驗、血凝抑制實驗、凝膠免疫擴散等）一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serolog8

四、病毒感染的快速診斷

(一)

形態(tài)學(xué)

電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒光鏡——大病毒和包涵體四、病毒感染的快速診斷(一)

形態(tài)學(xué)9基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）酶免疫技術(shù)（EIA）等。RNA印跡雜交（northernblot）光鏡——大病毒和包涵體4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。人工被動免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細胞因子等免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）人工被動免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細胞因子等免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時。動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。5血清學(xué)實驗檢查抗體（雙分血清）胎盤球蛋白、丙種球蛋白（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來?；蛑委煟ǚ戳x寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）10病原學(xué)診斷與防治課件11病原學(xué)診斷與防治課件12病原學(xué)診斷與防治課件13病原學(xué)診斷與防治課件14病原學(xué)診斷與防治課件15（二）檢測病毒蛋白抗原用已知特異性抗體直接檢測病毒蛋白抗原（簡便、敏感、特異）常用方法：免疫熒光技術(shù)（IF）

固相放射免疫測定（SPRIT）

酶免疫技術(shù)（EIA）等。（二）檢測病毒蛋白抗原16（三）檢測病毒特異性IgM抗體

檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染或證明病毒復(fù)制。（三）檢測病毒特異性IgM抗體 檢17（四）檢測病毒核酸

1核酸雜交

斑點雜交（dothybridization）

原位雜交（insitehybridization）

DNA印跡雜交（Southernblot）

RNA印跡雜交（northernblot）

2

核酸擴增聚合酶鏈反應(yīng)

（polymerasechainreaction，PCRDNA）連接酶鏈反應(yīng)（ligasechainreaction，LCR）反轉(zhuǎn)錄PCR（ReversetranscrptasePCR，RT—PCR(RNA)

3

基因芯片技術(shù)（genechip）

（四）檢測病毒核酸1核酸雜交18第三節(jié)真菌學(xué)診斷標本直接鏡檢深部標本染色標本G染色G+圓形大小不均有芽生孢子分離培養(yǎng)沙氏培養(yǎng)基菌落觀察角質(zhì)標本不染色標本10%KOH觀察菌絲、孢子類型大小顏色皺摺鑒定動物實驗（致病性真菌）接種觀察發(fā)病情況死亡后取標本進一步鑒定皮膚超敏反應(yīng)快速診斷血清學(xué)實驗核酸檢測真菌毒素檢測第三節(jié)真菌學(xué)診斷標本直接鏡檢深部標本分離培養(yǎng)角質(zhì)標本類19死疫苗活疫苗類毒素新型活疫苗基因工程疫苗重組載體疫苗第四節(jié)特異性預(yù)防與治療一、人工主動免疫(artificialactiveimmunity)：將疫苗(vaccine)或類毒素接種于人體，使機體產(chǎn)生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于預(yù)防。合成疫苗亞單位疫苗DNA疫苗轉(zhuǎn)基因植物疫苗治療性疫苗死疫苗第四節(jié)特異性預(yù)防與治療一、人工主動免疫(artifi20抗毒素抗菌血清胎盤球蛋白、丙種球蛋白細胞免疫制劑二、人工被動免疫人工被動免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細胞因子等免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時。但這些免疫物質(zhì)不是病人自己產(chǎn)生的，故維持時間短。主要用于治療或緊急預(yù)防?？苟舅囟⑷斯け粍用庖呷斯け粍用庖?artificial21二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）（三）檢測病毒特異性IgM抗體（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）RNA印跡雜交（northernblot）一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。干擾素及干擾素誘生劑治療一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）類型大小顏色皺?。ǘ┎《镜臄?shù)量與感染性測定酶免疫技術(shù)（EIA）等。血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代?！种撇《净蜣D(zhuǎn)錄雞胚培養(yǎng)不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。兩種人工免疫的比較區(qū)別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或細胞因子等接種次數(shù)1-3次1次免疫出現(xiàn)時間慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出現(xiàn)）免疫維持時間長（數(shù)月~數(shù)年）短（2-3W）用途多用于預(yù)防多用于治療或應(yīng)急預(yù)防二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationa22三、細菌感染的治療抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）主要作用機制影響細胞壁合成影響細胞膜功能影響細菌蛋白合成影響細菌核酸合成三、細菌感染的治療抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）23四、病毒感染的治療藥物治療核苷類藥物——抑制病毒基因復(fù)制

——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄蛋白酶抑制劑天然藥物（中草藥）其他藥物（金剛烷胺）干擾素及干擾素誘生劑治療基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）免疫治療（特異性抗體、免疫調(diào)節(jié)劑、治療性疫苗等。四、病毒感染的治療藥物治療24五、真菌的治療各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）深部真菌病——除去誘因，提高免疫力，用抗真菌藥物（副作用大）五、真菌的治療各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）25致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原檢測其它檢測形態(tài)、結(jié)構(gòu)、染色性涂片鏡檢菌落特征生化反應(yīng)藥敏試驗血清學(xué)反應(yīng)沉淀反應(yīng)協(xié)同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）細菌核酸（PCR）噬菌體分離細菌素測定分子生物學(xué)技術(shù)動物試驗致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原26二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒的分離方法動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況雞胚培養(yǎng)不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationa27

四、病毒感染的快速診斷

(一)

形態(tài)學(xué)

電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒光鏡——大病毒和包涵體四、病毒感染的快速診斷(一)

形態(tài)學(xué)28動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。死亡后取標本進一步鑒定DNA印跡雜交（Southernblot）（三）檢測病毒特異性IgM抗體動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒類型大小顏色皺?。?）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。RNA印跡雜交（northernblot）因此，用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。3基因芯片技術(shù)（genechip）一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。免疫治療（特異性抗體、免疫調(diào)節(jié)劑、治療性疫苗等。1早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前1~2天）——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄5血清學(xué)實驗檢查抗體（雙分血清）但這些免疫物質(zhì)不是病人自己產(chǎn)生的，故維持時間短。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況29光鏡——大病毒和包涵體一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）四、病毒感染的快速診斷（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。主要用于治療或緊急預(yù)防。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）抗體的量常隨感染過程而增多，表現(xiàn)為效價（滴度）的升高。用已知病毒抗原檢測病人血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾?。ㄖ泻蛯嶒灐⒀a體結(jié)合實驗、血凝抑制實驗、凝膠免疫擴散等）RNA印跡雜交（northernblot）基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法2根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標本血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。核苷類藥物——抑制病毒基因復(fù)制二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。光鏡——大病毒和包涵體30主要用于治療或緊急預(yù)防。（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。免疫治療（特異性抗體、免疫調(diào)節(jié)劑、治療性疫苗等。原位雜交（insitehybridization）1早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前1~2天）細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法DNA印跡雜交（Southernblot）4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒2根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標本（二）病毒的數(shù)量與感染性測定（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）RNA印跡雜交（northernblot）一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）酶免疫技術(shù)（EIA）等。第四節(jié)特異性預(yù)防與治療細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）（1）出現(xiàn)細胞病變效應(yīng)（CPE）：即某些病毒在細胞內(nèi)增殖引起的特有的細胞病變（細胞變圓、聚集、壞死、脫落等）細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）四、病毒感染的快速診斷（三）新分離病毒的鑒定斑點雜交（dothybridization）基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）人工被動免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細胞因子等免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時。常用方法：直接凝集試驗、乳膠凝集試驗、沉淀試驗、補體結(jié)合試驗、中和試驗、ELISA。四、病毒感染的快速診斷（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況（2）形成細胞融合（多巨核細胞）二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。四、病毒感染的快速診斷一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）3基因芯片技術(shù)（genechip）5血清學(xué)實驗檢查抗體（雙分血清）DNA印跡雜交（Southernblot）抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）細菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞?？贵w的量常隨感染過程而增多，表現(xiàn)為效價（滴度）的升高。RNA印跡雜交（northernblot）抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。雞胚培養(yǎng)不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。1早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前1~2天）（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）斑點雜交（dothybridization）基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）四、病毒感染的快速診斷二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）用已知病毒抗原檢測病人血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾?。ㄖ泻蛯嶒?、補體結(jié)合實驗、血凝抑制實驗、凝膠免疫擴散等）酶免疫技術(shù)（EIA）等。電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況（2）形成細胞融合（多巨核細胞）一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）3基因芯片技術(shù)（genechip）電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。細菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。四、病毒感染的治療藥物治療核苷類藥物——抑制病毒基因復(fù)制

——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄蛋白酶抑制劑天然藥物（中草藥）其他藥物（金剛烷胺）干擾素及干擾素誘生劑治療基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）免疫治療（特異性抗體、免疫調(diào)節(jié)劑、治療性疫苗等。主要用于治療或緊急預(yù)防。酶免疫技術(shù)（EIA）等。四、病毒感31致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原檢測其它檢測形態(tài)、結(jié)構(gòu)、染色性涂片鏡檢菌落特征生化反應(yīng)藥敏試驗血清學(xué)反應(yīng)沉淀反應(yīng)協(xié)同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）細菌核酸（PCR）噬菌體分離細菌素測定分子生物學(xué)技術(shù)動物試驗致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原32人體受致病菌感染后，其免疫系統(tǒng)被刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答而產(chǎn)生特異性抗體?？贵w的量常隨感染過程而增多，表現(xiàn)為效價（滴度）的升高。因此，用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。常用方法：直接凝集試驗、乳膠凝集試驗、沉淀試驗、補體結(jié)合試驗、中和試驗、ELISA。第二節(jié)血清學(xué)診斷人體受致病菌感染后，其免疫系統(tǒng)被刺激后發(fā)生免疫應(yīng)答而產(chǎn)生特異33第二節(jié)病毒學(xué)診斷

一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）1早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前1~2天）2根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標本3病毒易被滅活（細胞內(nèi)寄生，怕熱不怕冷），低溫保存，快速送檢4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）5血清學(xué)實驗檢查抗體（雙分血清）第二節(jié)病毒學(xué)診斷一標本的采集與送檢（principl34二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒的分離方法動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況雞胚培養(yǎng)不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationa35病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標細胞的變化（1）出現(xiàn)細胞病變效應(yīng)（CPE）：即某些病毒在細胞內(nèi)增殖引起的特有的細胞病變（細胞變圓、聚集、壞死、脫落等）（2）形成細胞融合（多巨核細胞）（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。（病毒增殖場所）紅細胞吸附干擾現(xiàn)象細胞代謝改變（pH）病毒在培養(yǎng)細胞中增殖的指標細胞的變化36正常細胞病變細胞正常細胞病變細胞37（二）病毒的數(shù)量與感染性測定（三）新分離病毒的鑒定核酸類型、理化性狀、形態(tài)、血清學(xué)鑒定、基因測序和生物對比。（二）病毒的數(shù)量與感染性測定38一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。2根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標本酶免疫技術(shù)（EIA）等。細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法四、病毒感染的快速診斷（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)?；蛑委煟ǚ戳x寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）四、病毒感染的快速診斷基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechainreaction，PCRDNA）光鏡——大病毒和包涵體——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒DNA印跡雜交（Southernblot）4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄（2）形成細胞融合（多巨核細胞）（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。三、病毒感染的血清學(xué)診斷用已知病毒抗原檢測病人血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾?。ㄖ泻蛯嶒?、補體結(jié)合實驗、血凝抑制實驗、凝膠免疫擴散等）一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serolog39

四、病毒感染的快速診斷

(一)

形態(tài)學(xué)

電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒光鏡——大病毒和包涵體四、病毒感染的快速診斷(一)

形態(tài)學(xué)40基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）酶免疫技術(shù)（EIA）等。RNA印跡雜交（northernblot）光鏡——大病毒和包涵體4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。人工被動免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細胞因子等免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）人工被動免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細胞因子等免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時。動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。5血清學(xué)實驗檢查抗體（雙分血清）胎盤球蛋白、丙種球蛋白（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）41病原學(xué)診斷與防治課件42病原學(xué)診斷與防治課件43病原學(xué)診斷與防治課件44病原學(xué)診斷與防治課件45病原學(xué)診斷與防治課件46（二）檢測病毒蛋白抗原用已知特異性抗體直接檢測病毒蛋白抗原（簡便、敏感、特異）常用方法：免疫熒光技術(shù)（IF）

固相放射免疫測定（SPRIT）

酶免疫技術(shù)（EIA）等。（二）檢測病毒蛋白抗原47（三）檢測病毒特異性IgM抗體

檢測病毒特異性IgM抗體可診斷急性感染或證明病毒復(fù)制。（三）檢測病毒特異性IgM抗體 檢48（四）檢測病毒核酸

1核酸雜交

斑點雜交（dothybridization）

原位雜交（insitehybridization）

DNA印跡雜交（Southernblot）

RNA印跡雜交（northernblot）

2

核酸擴增聚合酶鏈反應(yīng)

（polymerasechainreaction，PCRDNA）連接酶鏈反應(yīng)（ligasechainreaction，LCR）反轉(zhuǎn)錄PCR（ReversetranscrptasePCR，RT—PCR(RNA)

3

基因芯片技術(shù)（genechip）

（四）檢測病毒核酸1核酸雜交49第三節(jié)真菌學(xué)診斷標本直接鏡檢深部標本染色標本G染色G+圓形大小不均有芽生孢子分離培養(yǎng)沙氏培養(yǎng)基菌落觀察角質(zhì)標本不染色標本10%KOH觀察菌絲、孢子類型大小顏色皺摺鑒定動物實驗（致病性真菌）接種觀察發(fā)病情況死亡后取標本進一步鑒定皮膚超敏反應(yīng)快速診斷血清學(xué)實驗核酸檢測真菌毒素檢測第三節(jié)真菌學(xué)診斷標本直接鏡檢深部標本分離培養(yǎng)角質(zhì)標本類50死疫苗活疫苗類毒素新型活疫苗基因工程疫苗重組載體疫苗第四節(jié)特異性預(yù)防與治療一、人工主動免疫(artificialactiveimmunity)：將疫苗(vaccine)或類毒素接種于人體，使機體產(chǎn)生獲得性免疫力的一種防治微生物感染的措施，主要用于預(yù)防。合成疫苗亞單位疫苗DNA疫苗轉(zhuǎn)基因植物疫苗治療性疫苗死疫苗第四節(jié)特異性預(yù)防與治療一、人工主動免疫(artifi51抗毒素抗菌血清胎盤球蛋白、丙種球蛋白細胞免疫制劑二、人工被動免疫人工被動免疫(artificialpasstiveimmunity)：注射含有特異性抗體的免疫血清或純化免疫球蛋白，或細胞因子等免疫制劑，使機體即刻獲得特異性免疫，因而作用及時。但這些免疫物質(zhì)不是病人自己產(chǎn)生的，故維持時間短。主要用于治療或緊急預(yù)防?？苟舅囟?、人工被動免疫人工被動免疫(artificial52二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）（三）檢測病毒特異性IgM抗體（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）RNA印跡雜交（northernblot）一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。干擾素及干擾素誘生劑治療一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）類型大小顏色皺摺（二）病毒的數(shù)量與感染性測定酶免疫技術(shù)（EIA）等。血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代?！种撇《净蜣D(zhuǎn)錄雞胚培養(yǎng)不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。兩種人工免疫的比較區(qū)別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或細胞因子等接種次數(shù)1-3次1次免疫出現(xiàn)時間慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出現(xiàn)）免疫維持時間長（數(shù)月~數(shù)年）短（2-3W）用途多用于預(yù)防多用于治療或應(yīng)急預(yù)防二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationa53三、細菌感染的治療抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）主要作用機制影響細胞壁合成影響細胞膜功能影響細菌蛋白合成影響細菌核酸合成三、細菌感染的治療抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）54四、病毒感染的治療藥物治療核苷類藥物——抑制病毒基因復(fù)制

——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄蛋白酶抑制劑天然藥物（中草藥）其他藥物（金剛烷胺）干擾素及干擾素誘生劑治療基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）免疫治療（特異性抗體、免疫調(diào)節(jié)劑、治療性疫苗等。四、病毒感染的治療藥物治療55五、真菌的治療各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）深部真菌病——除去誘因，提高免疫力，用抗真菌藥物（副作用大）五、真菌的治療各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）56致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原檢測其它檢測形態(tài)、結(jié)構(gòu)、染色性涂片鏡檢菌落特征生化反應(yīng)藥敏試驗血清學(xué)反應(yīng)沉淀反應(yīng)協(xié)同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）細菌核酸（PCR）噬菌體分離細菌素測定分子生物學(xué)技術(shù)動物試驗致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原57二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）

（一）病毒的分離方法動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況雞胚培養(yǎng)不同病毒選擇不同接種部位（絨毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黃囊），分離流感病毒最常用。細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationa58

四、病毒感染的快速診斷

(一)

形態(tài)學(xué)

電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒光鏡——大病毒和包涵體四、病毒感染的快速診斷(一)

形態(tài)學(xué)59動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況（3）傳代細胞—能在體外無限傳代的細胞多由癌細胞或二倍體細胞突變而來。死亡后取標本進一步鑒定DNA印跡雜交（Southernblot）（三）檢測病毒特異性IgM抗體動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒類型大小顏色皺?。?）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。RNA印跡雜交（northernblot）因此，用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。3基因芯片技術(shù)（genechip）一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。免疫治療（特異性抗體、免疫調(diào)節(jié)劑、治療性疫苗等。1早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前1~2天）——抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄5血清學(xué)實驗檢查抗體（雙分血清）但這些免疫物質(zhì)不是病人自己產(chǎn)生的，故維持時間短。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）動物接種選擇易感動物及接種部位，觀察發(fā)病情況60光鏡——大病毒和包涵體一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）各種癬癥——外用抗真藥（易復(fù)發(fā)）四、病毒感染的快速診斷（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。主要用于治療或緊急預(yù)防。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）抗體的量常隨感染過程而增多，表現(xiàn)為效價（滴度）的升高。用已知病毒抗原檢測病人血清中相應(yīng)抗體以診斷病毒性疾?。ㄖ泻蛯嶒?、補體結(jié)合實驗、血凝抑制實驗、凝膠免疫擴散等）RNA印跡雜交（northernblot）基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法2根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標本血清學(xué)診斷試驗最好取患者急性期和恢復(fù)期雙份血清標本，當后者的抗體效價比前者升高大于等于4倍時方有意義。（2）二倍體細胞—在體外分裂50-100代后仍保持2倍體染色體數(shù)目的單層細胞。核苷類藥物——抑制病毒基因復(fù)制二病毒的分離培養(yǎng)與鑒定（virusisolationanddetermination）抗菌藥物種類（抗生素及人工合成化學(xué)制劑）4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。光鏡——大病毒和包涵體61主要用于治療或緊急預(yù)防。（1）原代細胞—來源于動物、雞胚、人胚組織細胞，對多種病毒敏感，但只能傳2-3代。一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。免疫治療（特異性抗體、免疫調(diào)節(jié)劑、治療性疫苗等。原位雜交（insitehybridization）1早期（前驅(qū)期、急性期、發(fā)病前1~2天）細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法DNA印跡雜交（Southernblot）4標本無菌采集與處理（加抗生素，除菌并防止污染）電鏡和免疫電鏡——直接觀察病毒2根據(jù)不同病毒感染，采集不同部位標本（二）病毒的數(shù)量與感染性測定（3）形成包涵體：某些病毒在細胞漿或核內(nèi)增殖后形成的嗜酸或嗜堿性的團塊狀結(jié)構(gòu)。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）RNA印跡雜交（northernblot）一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosis)。一標本的采集與送檢（principleofcollectionspecimen）基因治療（反義寡核苷酸、抑制病毒復(fù)制）酶免疫技術(shù)（EIA）等。第四節(jié)特異性預(yù)防與治療細胞培養(yǎng)：分離病毒最常用的方法一般采取病人的血清進行試驗，故稱為血清學(xué)診斷(serologicaldiagnosi