病理組織切片制作技術(shù)課件

病理組織切片制作技術(shù).病理組織切片制作技術(shù).1實驗內(nèi)容

掌握組織材料的取材、固定、脫水、透明、包埋、切片、烤片、脫蠟、染色及封固的基本操作。.實驗內(nèi)容.2一、取材及固定（一）取材注意事項：

1、材料新鮮

2、組織塊力求小而薄3、勿使組織塊受擠壓

4、盡量保持組織的原有形態(tài)5、熟悉取材部位.一、取材及固定（一）取材注意事項：.3（一）取材注意事項：6、選好組織塊的切面7、保持材料的清潔8、切除不需要的部位.（一）取材注意事項：6、選好組織塊的切面.4（二）固定及目的：應(yīng)用化學(xué)試劑使組織或細(xì)胞中的無機(jī)成分和有機(jī)成分凝固或沉淀，以保持其生活狀態(tài)的過程稱為固定。.（二）固定及目的：應(yīng)用化學(xué)試劑使組織5固定液是10%福爾馬林溶液（4%甲醛溶液），固定24小時以上。.固定液是10%福爾馬林溶液（4%甲醛6固定的目的1、迅速阻止組織、細(xì)胞死后變化，防止自溶與腐敗，使之盡量保持生前的狀態(tài)與結(jié)構(gòu)。2、使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持其原有狀態(tài)。3、使組織內(nèi)各種物質(zhì)成分產(chǎn)生不同的折光率，以便染色后易于鑒別和觀察。4、使組織塊硬化，便于制作薄片。.固定的目的.7固定的注意事項1、組織塊不宜大，厚度小于5mm，長寬也應(yīng)小于15×15mm。2、固定液與組織塊的比例應(yīng)大于10：1。3、軟組織或較大組織塊可先經(jīng)2-3小時固定后再修整成小塊，重新投入新配制的固定液中繼續(xù)固定。4、腸道可在漿膜面貼上一層厚紙，以防固定組織變形。.固定的注意事項1、組織塊不宜大，厚度小于5mm，長寬也應(yīng)小于8二、固定后處理及切片(一)、洗滌與修切(二)、脫水與透明脫水：將組織塊內(nèi)水分置換的過程。透明：乙醇和石蠟不互溶，最常用的透明劑是二甲苯。既能溶于脫水劑又能溶于包埋劑（石蠟），透明必須適度。

.二、固定后處理及切片(一)、洗滌與修切.950%乙醇30-60min70%乙醇1-2小時或過夜80%乙醇1-2小時95%乙醇1-1.5小時100%乙醇30min100%乙醇20min1：1無水乙醇：二甲苯20min二甲苯10-30min.50%乙醇30-60min.10(三)、浸蠟與包埋52-58℃石蠟，浸蠟的全過程在60℃的溫箱中進(jìn)行。1：1二甲苯：石蠟30min石蠟一30min石蠟二30min 石蠟三30min.(三)、浸蠟與包埋52-58℃石蠟，浸蠟的全過11（四）切片、粘片1、切片前處理及切片2、載玻片處理3、粘片（展片）4、烤片

.（四）切片、粘片1、切片前處理及切片.12三、脫蠟和染色（一）、脫蠟1、二甲苯Ⅰ5-10min2、二甲苯Ⅱ1-2min3、1：1二甲苯：乙醇（冬天20min）5min4、無水乙醇、95%、80%、70、50%梯度乙醇每級1-2min5、蒸餾水1-2min.三、脫蠟和染色（一）、脫蠟.13（二）、染色（HE染色法）

6、蘇木素染液5～15min7、蒸餾水（洗去多余的染液）8、分色:1%鹽酸-70%乙醇分色30-60sec8、藍(lán)化:自來水沖洗（堿化，核藍(lán)色）15-20min9、蒸餾水（洗去多余的堿）1-2min10、逐級入50%、70%、85%乙醇，每級1-2min

11、伊紅-95%乙醇染液15sec～2min12、95%、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ逐級脫水，每級1-2min13、1：1無水乙醇：二甲苯

、二甲苯

Ⅰ

、二甲苯Ⅱ各5min.（二）、染色（HE染色法）

6、蘇木素染液5～15min.14..15四、封固

滴加中性樹膠，加蓋玻片封片。.四、封固滴加中性樹膠，加蓋玻片封片16五、光鏡觀察.五、光鏡觀察.17放線菌病硫磺顆粒HE染色300倍

放線菌病硫磺顆粒HE染色300倍.放線菌病硫磺顆粒HE染色300倍

放線菌病硫磺顆粒HE染色318肺毛霉病病理HE染色

.肺毛霉病病理HE染色

.19肺曲霉球菌絲45度分枝HE染色.肺曲霉球菌絲45度分枝HE染色.20

概括主要流程取材固定脫水透明包埋切片封固染色脫蠟烤片.概括主要流程取材固定脫21Thankyou!.Thankyou!.22

病理組織切片制作技術(shù).病理組織切片制作技術(shù).23實驗內(nèi)容

掌握組織材料的取材、固定、脫水、透明、包埋、切片、烤片、脫蠟、染色及封固的基本操作。.實驗內(nèi)容.24一、取材及固定（一）取材注意事項：

1、材料新鮮

2、組織塊力求小而薄3、勿使組織塊受擠壓

4、盡量保持組織的原有形態(tài)5、熟悉取材部位.一、取材及固定（一）取材注意事項：.25（一）取材注意事項：6、選好組織塊的切面7、保持材料的清潔8、切除不需要的部位.（一）取材注意事項：6、選好組織塊的切面.26（二）固定及目的：應(yīng)用化學(xué)試劑使組織或細(xì)胞中的無機(jī)成分和有機(jī)成分凝固或沉淀，以保持其生活狀態(tài)的過程稱為固定。.（二）固定及目的：應(yīng)用化學(xué)試劑使組織27固定液是10%福爾馬林溶液（4%甲醛溶液），固定24小時以上。.固定液是10%福爾馬林溶液（4%甲醛28固定的目的1、迅速阻止組織、細(xì)胞死后變化，防止自溶與腐敗，使之盡量保持生前的狀態(tài)與結(jié)構(gòu)。2、使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì)，以保持其原有狀態(tài)。3、使組織內(nèi)各種物質(zhì)成分產(chǎn)生不同的折光率，以便染色后易于鑒別和觀察。4、使組織塊硬化，便于制作薄片。.固定的目的.29固定的注意事項1、組織塊不宜大，厚度小于5mm，長寬也應(yīng)小于15×15mm。2、固定液與組織塊的比例應(yīng)大于10：1。3、軟組織或較大組織塊可先經(jīng)2-3小時固定后再修整成小塊，重新投入新配制的固定液中繼續(xù)固定。4、腸道可在漿膜面貼上一層厚紙，以防固定組織變形。.固定的注意事項1、組織塊不宜大，厚度小于5mm，長寬也應(yīng)小于30二、固定后處理及切片(一)、洗滌與修切(二)、脫水與透明脫水：將組織塊內(nèi)水分置換的過程。透明：乙醇和石蠟不互溶，最常用的透明劑是二甲苯。既能溶于脫水劑又能溶于包埋劑（石蠟），透明必須適度。

.二、固定后處理及切片(一)、洗滌與修切.3150%乙醇30-60min70%乙醇1-2小時或過夜80%乙醇1-2小時95%乙醇1-1.5小時100%乙醇30min100%乙醇20min1：1無水乙醇：二甲苯20min二甲苯10-30min.50%乙醇30-60min.32(三)、浸蠟與包埋52-58℃石蠟，浸蠟的全過程在60℃的溫箱中進(jìn)行。1：1二甲苯：石蠟30min石蠟一30min石蠟二30min 石蠟三30min.(三)、浸蠟與包埋52-58℃石蠟，浸蠟的全過33（四）切片、粘片1、切片前處理及切片2、載玻片處理3、粘片（展片）4、烤片

.（四）切片、粘片1、切片前處理及切片.34三、脫蠟和染色（一）、脫蠟1、二甲苯Ⅰ5-10min2、二甲苯Ⅱ1-2min3、1：1二甲苯：乙醇（冬天20min）5min4、無水乙醇、95%、80%、70、50%梯度乙醇每級1-2min5、蒸餾水1-2min.三、脫蠟和染色（一）、脫蠟.35（二）、染色（HE染色法）

6、蘇木素染液5～15min7、蒸餾水（洗去多余的染液）8、分色:1%鹽酸-70%乙醇分色30-60sec8、藍(lán)化:自來水沖洗（堿化，核藍(lán)色）15-20min9、蒸餾水（洗去多余的堿）1-2min10、逐級入50%、70%、85%乙醇，每級1-2min

11、伊紅-95%乙醇染液15sec～2min12、95%、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ逐級脫水，每級1-2min13、1：1無水乙醇：二甲苯

、二甲苯

Ⅰ

、二甲苯Ⅱ各5min.（二）、染色（HE染色法）

6、蘇木素染液5～15min.36..37四、封固

滴加中性樹膠，加蓋玻片封片。.四、封固滴加中性樹膠，加蓋玻片封片38五、光鏡觀察.五、光鏡觀察.39放線菌病硫磺顆粒HE染色300倍

放線菌病硫磺顆粒HE染色300倍.放線菌病硫磺顆粒HE染色300倍

放線菌病硫磺顆粒HE染色340肺毛霉病病理HE染色

.肺毛霉病病理HE染色

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