最新14遺傳病診斷課件

進(jìn)入夏天，少不了一個熱字當(dāng)頭，電扇空調(diào)陸續(xù)登場，每逢此時，總會想起那一把蒲扇。蒲扇，是記憶中的農(nóng)村，夏季經(jīng)常用的一件物品。記憶中的故鄉(xiāng)，每逢進(jìn)入夏天，集市上最常見的便是蒲扇、涼席，不論男女老少，個個手持一把，忽閃忽閃個不停，嘴里叨叨著“怎么這么熱”，于是三五成群，聚在大樹下，或站著，或隨即坐在石頭上，手持那把扇子，邊嘮嗑邊乘涼。孩子們卻在周圍跑跑跳跳，熱得滿頭大汗，不時聽到“強(qiáng)子，別跑了，快來我給你扇扇”。孩子們才不聽這一套，跑個沒完，直到累氣喘吁吁，這才一跑一踮地圍過了，這時母親總是，好似生氣的樣子，邊扇邊訓(xùn)，“你看熱的，跑什么？”此時這把蒲扇，是那么涼快，那么的溫馨幸福，有母親的味道！蒲扇是中國傳統(tǒng)工藝品，在我國已有三千年多年的歷史。取材于棕櫚樹，制作簡單，方便攜帶，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常會在上面作畫。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇諸名，實(shí)即今日的蒲扇，江浙稱之為芭蕉扇。六七十年代，人們最常用的就是這種，似圓非圓，輕巧又便宜的蒲扇。蒲扇流傳至今，我的記憶中，它跨越了半個世紀(jì)，也走過了我們的半個人生的軌跡，攜帶著特有的念想，一年年，一天天，流向長長的時間隧道，裊14遺傳病診斷進(jìn)入夏天，少不了一個熱字當(dāng)頭，電扇空調(diào)陸續(xù)登場，每逢此時1臨床遺傳學(xué)clinicalgenetics：是醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的重要組成部分，其內(nèi)容是運(yùn)用醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)理論知識，通過家系調(diào)查和各項(xiàng)臨床檢查來診斷、治療和預(yù)防遺傳病。臨床遺傳學(xué)clinicalgenetics：是醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的2最新14遺傳病診斷課件3最新14遺傳病診斷課件4最新14遺傳病診斷課件5最新14遺傳病診斷課件6最新14遺傳病診斷課件7最新14遺傳病診斷課件81.孟德爾遺傳病包括AD遺傳病、AR遺傳病、XD遺傳病、XR遺傳病、YL疾病等。系譜分析對這類疾病的分析非常有用，分析時要考慮到某些疾病的遺傳異質(zhì)性、不規(guī)則外顯、外顯不全和延遲顯性等情況，可能會造成一些臨床假象，由于遺傳的異質(zhì)性可能將不同的遺傳病誤認(rèn)為同一種遺傳病進(jìn)行分析。1.孟德爾遺傳病92.非孟德爾遺傳?、倬€粒體遺傳?。壕€粒體基因突變所致的遺傳病只通過母系遺傳，女性患者的子女都可能患病。線粒體遺傳病表現(xiàn)為晚發(fā)、進(jìn)行性。②多基因?。浩浼易逍跃奂钥赡茴愃朴诿系聽栠z傳，但不嚴(yán)格遵循孟德爾分離規(guī)律。2.非孟德爾遺傳病103.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病①基因組印記來自雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達(dá)不是等同的，這些等位基因在傳遞上符合孟德爾規(guī)律，但在表達(dá)方面受傳遞的雙親性別影響,因而產(chǎn)生母源印記或父源印記時，在系譜分析中要加以注意。②動態(tài)突變在孟德爾遺傳疾病中，突變后的基因在世代傳遞中穩(wěn)定存在，但在三核苷酸重復(fù)序列擴(kuò)展所致的遺傳病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復(fù)單元的數(shù)目發(fā)生改變。3.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病11三、細(xì)胞遺傳學(xué)cytogenetics檢查（一）、CS檢查—核型分析又稱核型分析（karyotapeanalysis)，即通過血液或組織培養(yǎng)制備染色體標(biāo)本，進(jìn)而顯帶、顯微攝影，分組排列對比分析。是確診染色體病的主要方法。隨著顯帶技術(shù)的應(yīng)用以及高分辯率染色體顯帶技術(shù)的出現(xiàn)和改進(jìn)，能更準(zhǔn)確地判斷和發(fā)現(xiàn)更多的染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常綜合征，還可以發(fā)現(xiàn)新的微畸變綜合征。三、細(xì)胞遺傳學(xué)cytogenetics檢查（一）、CS檢查12CS檢查指征：①智能低下、生長遲緩或伴有其他先天畸形者。②夫婦中有染色體異常，如平衡結(jié)構(gòu)重排、嵌合體等。③家族中已發(fā)現(xiàn)染色體異?；蛳忍旎蝹€體。④多發(fā)性流產(chǎn)的婦女及其丈夫。⑤原發(fā)閉經(jīng)和男女不育癥者。⑥35歲以上的高齡孕婦。⑦有兩性內(nèi)外生殖器畸形者。⑧身材高大，性情粗暴的男性⑨惡性血液病患者⑩長期接受X線、電離輻射的人員CS檢查指征：①智能低下、生長遲緩或伴有其他先天畸形者。13（二）、性染色質(zhì)檢查：性染色體數(shù)目異常。不分裂細(xì)胞：X染色體數(shù)=X染色質(zhì)數(shù)+1Y染色體數(shù)=Y染色質(zhì)數(shù)最新14遺傳病診斷課件14（三）、染色體原位雜交insituhybridizationofchromosome用標(biāo)記的DNA片段與玻片上的細(xì)胞、染色體或間期核的DNA或RNA雜交，在不改變原來結(jié)構(gòu)的情況下，研究核酸片段的位置、相互關(guān)系。染色體熒光原位雜交

fluorescenceinsituhybridization,FISH（三）、染色體原位雜交insituhybridizati15最新14遺傳病診斷課件16X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體1713號染色體21號染色體13號染色體21號染色體18SpectralKaryotyping(SKY)NormalmaleSpectralKaryotyping(SKY)Norm19TumorcellfromfemaleTumorcellfromfemale2024colorsFISH24colorsFISH21四、生化檢查1.Pr和酶的分析確定單基因病2.代謝產(chǎn)物的檢測反映酶活性四、生化檢查1.Pr和酶的分析確定單基因病22基因診斷特點(diǎn):①針對直接病因診斷。②特異性強(qiáng),靈敏度高。③適應(yīng)性強(qiáng),診斷范圍廣,因基因探針可為任何來源、任何種類,其探針序列可為未知或已知,待檢測的目的基因可為一個特定基因或基因組合。④目的基因是否處于活化狀態(tài)均可,無組織和發(fā)育特異性,因此可用于檢測一些具有組織表達(dá)特異性和分化階段表達(dá)特異性的基因。五、基因診斷(genediagnosis）基因診斷特點(diǎn):五、基因診斷(genediagnosis）23（一）基因診斷的基本技術(shù)*分子雜交技術(shù)*聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)*DNA序列測定技術(shù)*基因芯片技術(shù)（一）基因診斷的基本技術(shù)24分子雜交技術(shù)molecularhybridization

原理：雙鏈DNA在加熱到一定溫度以上或在堿性溶液中會變性成為兩條單鏈，互補(bǔ)的兩條DNA單鏈在一定條件下結(jié)合成為雙鏈。即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的，即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行，它不僅能在DNA和DNA之間進(jìn)行，也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。分子雜交技術(shù)25聚合酶鏈反應(yīng)及相關(guān)技術(shù)

（polymerasechainreaction,PCR聚合酶鏈反應(yīng)及相關(guān)技術(shù)

（polymerasechain26例：診斷Barts胎兒水腫綜合癥。1）建立反應(yīng)體系2）DNA擴(kuò)增3）電泳檢測待測DNAα基因引物dTNPTaq酶950C→560C→720C

變性退火延伸α基因例：診斷Barts胎兒水腫綜合癥。待測DNAα基因引物dTN27

DNA測序技術(shù)(DNAsequenceing）

Maxan和Gilbert首先建立了化學(xué)方法，Sanger建立了DNA測序的酶學(xué)方法。最新的DNA自動測序法以不同熒光色素標(biāo)記的四種不同脫氧核苷酸為原料進(jìn)行酶促合成反應(yīng)，經(jīng)過凝膠電泳分離，應(yīng)用激光分析及計(jì)算機(jī)處理就能直接讀出堿基順序。極大地推進(jìn)了生命科學(xué)的發(fā)展和人類基因組計(jì)劃的進(jìn)程，而且測序的長度可以達(dá)到1000bp以上。DNA測序技術(shù)(DNAsequenceing）28基因芯片技術(shù)

基本原理是核酸雜交，其基本過程是將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規(guī)律地排列固定于支持物上，形成矩陣點(diǎn)。樣品DNA/RNA通過PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入熒光標(biāo)記分子，然后按堿基配對原理進(jìn)行雜交，再通過熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進(jìn)行掃描，并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對每一探針上的熒光信號做出比較和檢測，得出所要的信息?；蛐酒夹g(shù)29最新14遺傳病診斷課件30最新14遺傳病診斷課件31（二）基因診斷的途經(jīng)1.直接診斷——檢測突變基因

直接診斷是直接檢測致病突變的基因。它通常使用基因本身或緊鄰的DNA序列作為探針，或通過PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以探查基因無突變、缺失等異常及其性質(zhì)，這稱為直接基因診斷，它適用已知基因異常的疾病。（二）基因診斷的途經(jīng)32當(dāng)致病基因的某種突變類型與發(fā)病有直接的因果關(guān)系,或者對致病基因以及分子機(jī)制已完全了解,或者對致病基因以及分子機(jī)制部分了解但已知其中規(guī)律,可應(yīng)用此途徑。當(dāng)致病基因的某種突變類型與發(fā)病有直接的因果關(guān)系,332.間接診斷——基因連鎖分析當(dāng)致病基因雖然已知但其異常尚屬未知或突變類型較多時；或致病基因本身尚屬未知時，但被檢測基因有緊密連鎖的DNA多態(tài)標(biāo)記，可以通過對受檢者及其家系進(jìn)行連鎖分析，以推斷前者是否獲得了帶有致病基因的染色體。

2.間接診斷——基因連鎖分析34連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性位，特別是基因突變部位或緊鄰的多態(tài)性位點(diǎn)作為標(biāo)記。RFLP、VNTR、SSCP、AMP－FLP等技術(shù)均可用于連鎖分析。連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性35（三）基因診斷的方法選擇：各種遺傳病的基因異常是不同的，同一遺傳病也可以有不同的基因異常，但這些異常大體可分為基因缺失和突變兩大類型。根據(jù)對基因異常類型的了解，可以采用不同的診斷方法。（三）基因診斷的方法選擇：各種遺傳病的基因異常是不同36

遺傳的基因診斷方法基因異常方法探針、引物或限制酶基因缺失基因組DNA印跡雜交\PCR擴(kuò)增缺失基因的探針引物包括缺失或在缺失部位內(nèi)點(diǎn)突變RFLP分析\ASO雜交突變導(dǎo)致其切點(diǎn)消失的限制酶PCR產(chǎn)物的多態(tài)性分析正常和異常的ASO探針（RFLP、SSCP、DGGE）引物包括突變部位基因已知基因內(nèi)或旁側(cè)序列多態(tài)性基因內(nèi)或旁但異常不明（RFLP、SSCP、AMP－FLP）側(cè)序列探針或引物連鎖分析基因未知與疾病連鎖的多態(tài)性，與疾病連鎖的多態(tài)如SSCP、AMP－FLP連鎖分析，位點(diǎn)探針或引物RFLP位點(diǎn)單體型連鎖分析遺傳的基因診斷37（四）基因診斷在遺傳病診斷中的應(yīng)用例：Hbs病β6GAG（谷）→GTG（纈）MstⅡ可識別并切割βA:CCTGAGG序列不能切割βs:CCTGTGG序列此切點(diǎn)消失（四）基因診斷在遺傳病診斷中的應(yīng)用例：Hbs病38IVS-Ⅰ1.15kbMstⅡ切點(diǎn)

1.15kb0.2kbHbA1.35kbA→THbS

1.15kb1.35kb0.2kb正常雜和體HbS病失IVS-Ⅰ1.15kbMstⅡ切點(diǎn)1.15kb0.2kb39第三節(jié)產(chǎn)前診斷（prenataldiagnosis)產(chǎn)前診斷又稱宮內(nèi)診斷（intrauterinediagnosis）是對胚胎或胎兒在出生前是否患有某種遺傳病或先天畸形作出準(zhǔn)確的診斷。第三節(jié)產(chǎn)前診斷（prenataldiagnosis)產(chǎn)401．35歲以上的高齡孕婦或夫婦一方有明顯致畸因素接觸史；2．夫婦之一有染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常者；或曾生育過染色體病患兒的孕婦；3．已知或推測孕婦是AR或XR攜帶者；曾生育過某種單基因遺傳病患兒的孕婦；4．曾生育過先天畸形（尤其是神經(jīng)管畸形）的孕婦；5．有原因不明的自然流產(chǎn)，畸胎，死產(chǎn)及新生兒死亡的孕婦。一、產(chǎn)前診斷的對象1．35歲以上的高齡孕婦或夫婦一方有明顯致畸因素接觸史；一41㈠儀器診斷包括：①X線檢查②超聲波檢查③胎兒鏡檢查㈡細(xì)胞學(xué)方法（染色體檢查；染色質(zhì)檢查）

㈢生物化學(xué)方法（蛋白質(zhì)或酶檢查；代謝產(chǎn)物檢查）

㈣分子生物學(xué)方法（基因分析）二、產(chǎn)前診斷的方法㈠儀器診斷二、產(chǎn)前診斷的方法42三、產(chǎn)前診斷的標(biāo)本及采集技術(shù)㈠羊膜穿刺術(shù)（amniocentesis）㈡絨毛吸取術(shù)㈢臍帶穿刺術(shù)（cordocentesis）㈣孕婦外周血分離胎兒細(xì)胞分離三、產(chǎn)前診斷的標(biāo)本及采集技術(shù)㈠羊膜穿刺術(shù)（amniocent43四、植入前診斷（preimplantationdiagnosis）植入前診斷是利用微操作技術(shù)和DNA擴(kuò)增技術(shù)對胚泡植入前進(jìn)行檢測。植入前遺傳學(xué)診斷（preimplantationgeneticdiagnosis,PSD）是指用分子或細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)對體外受精的胚胎進(jìn)行遺傳學(xué)診斷，確定正常后再將胚胎植入子宮。

四、植入前診斷（preimplantationdiagno44經(jīng)腹壁羊膜腔穿刺經(jīng)腹壁羊膜腔穿刺45經(jīng)陰道、子宮頸進(jìn)入子宮絨毛樣品經(jīng)陰道、子宮頸進(jìn)入子宮絨毛樣品46最新14遺傳病診斷課件47謝謝！謝謝！48最新14遺傳病診斷課件49進(jìn)入夏天，少不了一個熱字當(dāng)頭，電扇空調(diào)陸續(xù)登場，每逢此時，總會想起那一把蒲扇。蒲扇，是記憶中的農(nóng)村，夏季經(jīng)常用的一件物品。記憶中的故鄉(xiāng)，每逢進(jìn)入夏天，集市上最常見的便是蒲扇、涼席，不論男女老少，個個手持一把，忽閃忽閃個不停，嘴里叨叨著“怎么這么熱”，于是三五成群，聚在大樹下，或站著，或隨即坐在石頭上，手持那把扇子，邊嘮嗑邊乘涼。孩子們卻在周圍跑跑跳跳，熱得滿頭大汗，不時聽到“強(qiáng)子，別跑了，快來我給你扇扇”。孩子們才不聽這一套，跑個沒完，直到累氣喘吁吁，這才一跑一踮地圍過了，這時母親總是，好似生氣的樣子，邊扇邊訓(xùn)，“你看熱的，跑什么？”此時這把蒲扇，是那么涼快，那么的溫馨幸福，有母親的味道！蒲扇是中國傳統(tǒng)工藝品，在我國已有三千年多年的歷史。取材于棕櫚樹，制作簡單，方便攜帶，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常會在上面作畫。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇諸名，實(shí)即今日的蒲扇，江浙稱之為芭蕉扇。六七十年代，人們最常用的就是這種，似圓非圓，輕巧又便宜的蒲扇。蒲扇流傳至今，我的記憶中，它跨越了半個世紀(jì)，也走過了我們的半個人生的軌跡，攜帶著特有的念想，一年年，一天天，流向長長的時間隧道，裊14遺傳病診斷進(jìn)入夏天，少不了一個熱字當(dāng)頭，電扇空調(diào)陸續(xù)登場，每逢此時50臨床遺傳學(xué)clinicalgenetics：是醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的重要組成部分，其內(nèi)容是運(yùn)用醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)理論知識，通過家系調(diào)查和各項(xiàng)臨床檢查來診斷、治療和預(yù)防遺傳病。臨床遺傳學(xué)clinicalgenetics：是醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)的51最新14遺傳病診斷課件52最新14遺傳病診斷課件53最新14遺傳病診斷課件54最新14遺傳病診斷課件55最新14遺傳病診斷課件56最新14遺傳病診斷課件571.孟德爾遺傳病包括AD遺傳病、AR遺傳病、XD遺傳病、XR遺傳病、YL疾病等。系譜分析對這類疾病的分析非常有用，分析時要考慮到某些疾病的遺傳異質(zhì)性、不規(guī)則外顯、外顯不全和延遲顯性等情況，可能會造成一些臨床假象，由于遺傳的異質(zhì)性可能將不同的遺傳病誤認(rèn)為同一種遺傳病進(jìn)行分析。1.孟德爾遺傳病582.非孟德爾遺傳?、倬€粒體遺傳?。壕€粒體基因突變所致的遺傳病只通過母系遺傳，女性患者的子女都可能患病。線粒體遺傳病表現(xiàn)為晚發(fā)、進(jìn)行性。②多基因病：其家族性聚集性可能類似于孟德爾遺傳，但不嚴(yán)格遵循孟德爾分離規(guī)律。2.非孟德爾遺傳病593.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾?、倩蚪M印記來自雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達(dá)不是等同的，這些等位基因在傳遞上符合孟德爾規(guī)律，但在表達(dá)方面受傳遞的雙親性別影響,因而產(chǎn)生母源印記或父源印記時，在系譜分析中要加以注意。②動態(tài)突變在孟德爾遺傳疾病中，突變后的基因在世代傳遞中穩(wěn)定存在，但在三核苷酸重復(fù)序列擴(kuò)展所致的遺傳病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復(fù)單元的數(shù)目發(fā)生改變。3.具有特殊遺傳學(xué)現(xiàn)象的疾病60三、細(xì)胞遺傳學(xué)cytogenetics檢查（一）、CS檢查—核型分析又稱核型分析（karyotapeanalysis)，即通過血液或組織培養(yǎng)制備染色體標(biāo)本，進(jìn)而顯帶、顯微攝影，分組排列對比分析。是確診染色體病的主要方法。隨著顯帶技術(shù)的應(yīng)用以及高分辯率染色體顯帶技術(shù)的出現(xiàn)和改進(jìn)，能更準(zhǔn)確地判斷和發(fā)現(xiàn)更多的染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)異常綜合征，還可以發(fā)現(xiàn)新的微畸變綜合征。三、細(xì)胞遺傳學(xué)cytogenetics檢查（一）、CS檢查61CS檢查指征：①智能低下、生長遲緩或伴有其他先天畸形者。②夫婦中有染色體異常，如平衡結(jié)構(gòu)重排、嵌合體等。③家族中已發(fā)現(xiàn)染色體異?；蛳忍旎蝹€體。④多發(fā)性流產(chǎn)的婦女及其丈夫。⑤原發(fā)閉經(jīng)和男女不育癥者。⑥35歲以上的高齡孕婦。⑦有兩性內(nèi)外生殖器畸形者。⑧身材高大，性情粗暴的男性⑨惡性血液病患者⑩長期接受X線、電離輻射的人員CS檢查指征：①智能低下、生長遲緩或伴有其他先天畸形者。62（二）、性染色質(zhì)檢查：性染色體數(shù)目異常。不分裂細(xì)胞：X染色體數(shù)=X染色質(zhì)數(shù)+1Y染色體數(shù)=Y染色質(zhì)數(shù)最新14遺傳病診斷課件63（三）、染色體原位雜交insituhybridizationofchromosome用標(biāo)記的DNA片段與玻片上的細(xì)胞、染色體或間期核的DNA或RNA雜交，在不改變原來結(jié)構(gòu)的情況下，研究核酸片段的位置、相互關(guān)系。染色體熒光原位雜交

fluorescenceinsituhybridization,FISH（三）、染色體原位雜交insituhybridizati64最新14遺傳病診斷課件65X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體X染色體Y染色體13號染色體18號染色體21號染色體6613號染色體21號染色體13號染色體21號染色體67SpectralKaryotyping(SKY)NormalmaleSpectralKaryotyping(SKY)Norm68TumorcellfromfemaleTumorcellfromfemale6924colorsFISH24colorsFISH70四、生化檢查1.Pr和酶的分析確定單基因病2.代謝產(chǎn)物的檢測反映酶活性四、生化檢查1.Pr和酶的分析確定單基因病71基因診斷特點(diǎn):①針對直接病因診斷。②特異性強(qiáng),靈敏度高。③適應(yīng)性強(qiáng),診斷范圍廣,因基因探針可為任何來源、任何種類,其探針序列可為未知或已知,待檢測的目的基因可為一個特定基因或基因組合。④目的基因是否處于活化狀態(tài)均可,無組織和發(fā)育特異性,因此可用于檢測一些具有組織表達(dá)特異性和分化階段表達(dá)特異性的基因。五、基因診斷(genediagnosis）基因診斷特點(diǎn):五、基因診斷(genediagnosis）72（一）基因診斷的基本技術(shù)*分子雜交技術(shù)*聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)*DNA序列測定技術(shù)*基因芯片技術(shù)（一）基因診斷的基本技術(shù)73分子雜交技術(shù)molecularhybridization

原理：雙鏈DNA在加熱到一定溫度以上或在堿性溶液中會變性成為兩條單鏈，互補(bǔ)的兩條DNA單鏈在一定條件下結(jié)合成為雙鏈。即能夠進(jìn)行雜交。這種結(jié)合是特異的，即嚴(yán)格按照堿基互補(bǔ)的原則進(jìn)行，它不僅能在DNA和DNA之間進(jìn)行，也能在DNA和RNA之間進(jìn)行。分子雜交技術(shù)74聚合酶鏈反應(yīng)及相關(guān)技術(shù)

（polymerasechainreaction,PCR聚合酶鏈反應(yīng)及相關(guān)技術(shù)

（polymerasechain75例：診斷Barts胎兒水腫綜合癥。1）建立反應(yīng)體系2）DNA擴(kuò)增3）電泳檢測待測DNAα基因引物dTNPTaq酶950C→560C→720C

變性退火延伸α基因例：診斷Barts胎兒水腫綜合癥。待測DNAα基因引物dTN76

DNA測序技術(shù)(DNAsequenceing）

Maxan和Gilbert首先建立了化學(xué)方法，Sanger建立了DNA測序的酶學(xué)方法。最新的DNA自動測序法以不同熒光色素標(biāo)記的四種不同脫氧核苷酸為原料進(jìn)行酶促合成反應(yīng)，經(jīng)過凝膠電泳分離，應(yīng)用激光分析及計(jì)算機(jī)處理就能直接讀出堿基順序。極大地推進(jìn)了生命科學(xué)的發(fā)展和人類基因組計(jì)劃的進(jìn)程，而且測序的長度可以達(dá)到1000bp以上。DNA測序技術(shù)(DNAsequenceing）77基因芯片技術(shù)

基本原理是核酸雜交，其基本過程是將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規(guī)律地排列固定于支持物上，形成矩陣點(diǎn)。樣品DNA/RNA通過PCR擴(kuò)增、體外轉(zhuǎn)錄等技術(shù)摻入熒光標(biāo)記分子，然后按堿基配對原理進(jìn)行雜交，再通過熒光檢測系統(tǒng)等對芯片進(jìn)行掃描，并配以計(jì)算機(jī)系統(tǒng)對每一探針上的熒光信號做出比較和檢測，得出所要的信息?；蛐酒夹g(shù)78最新14遺傳病診斷課件79最新14遺傳病診斷課件80（二）基因診斷的途經(jīng)1.直接診斷——檢測突變基因

直接診斷是直接檢測致病突變的基因。它通常使用基因本身或緊鄰的DNA序列作為探針，或通過PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，以探查基因無突變、缺失等異常及其性質(zhì)，這稱為直接基因診斷，它適用已知基因異常的疾病。（二）基因診斷的途經(jīng)81當(dāng)致病基因的某種突變類型與發(fā)病有直接的因果關(guān)系,或者對致病基因以及分子機(jī)制已完全了解,或者對致病基因以及分子機(jī)制部分了解但已知其中規(guī)律,可應(yīng)用此途徑。當(dāng)致病基因的某種突變類型與發(fā)病有直接的因果關(guān)系,822.間接診斷——基因連鎖分析當(dāng)致病基因雖然已知但其異常尚屬未知或突變類型較多時；或致病基因本身尚屬未知時，但被檢測基因有緊密連鎖的DNA多態(tài)標(biāo)記，可以通過對受檢者及其家系進(jìn)行連鎖分析，以推斷前者是否獲得了帶有致病基因的染色體。

2.間接診斷——基因連鎖分析83連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性位，特別是基因突變部位或緊鄰的多態(tài)性位點(diǎn)作為標(biāo)記。RFLP、VNTR、SSCP、AMP－FLP等技術(shù)均可用于連鎖分析。連鎖分析多使用基因組中廣泛存在的各種DNA多態(tài)性84（三）基因診斷的方法選擇：各種遺傳病的基因異常是不同的，同一遺傳病也可以有不同的基因異常，但這些異常大體可分為基因缺失和突變兩大類型。根據(jù)對基因異常類型的了解，可以采用不同的診斷方法。（三）基因診斷的方法選擇：各種遺傳病的基因異常是不同85

遺傳的基因診斷方法基因異常方法探針、引物或限制酶基因缺失基因組DNA印跡雜交\PCR擴(kuò)增缺失基因的探針引物包括缺失或在缺失部位內(nèi)點(diǎn)突變RFLP分析\ASO雜交突變導(dǎo)致其切點(diǎn)消失的限制酶PCR產(chǎn)物的多態(tài)性分析正常和異常的ASO探針（RFLP、SSCP、DGGE）引物包括突變部位基因已知基因內(nèi)或旁側(cè)序列多態(tài)性基因內(nèi)或旁但異常不明（RFLP、SSCP、AMP－FLP）側(cè)序列探針或引物連鎖分析基因未知與疾病連鎖的多態(tài)性，與疾病連鎖的多態(tài)如SSCP、AMP－FLP連鎖分析，位點(diǎn)探針或引物RFLP位點(diǎn)單體型連鎖分析遺