出凝血實驗課件

出凝血相關(guān)實驗止血機制

當血管發(fā)生破損時，首先是局部血管發(fā)生短暫地收縮，使血流變緩，破損傷口縮小，之后血管內(nèi)皮細胞表達并釋放出vWF粘附于暴露的膠原組織上，血小板通過膜糖蛋白GPⅠb與vWF相連接而粘附于膠原纖維，同時血小板以膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa復合物為纖維蛋白原的受體，通過纖維蛋白原介導血小板間的聚集，在ADP、腎上腺素、膠原、凝血酶等誘導劑的參與下，聚集的血小板釋放出ADP、5-羥色胺、血栓素A2、β-血小板球蛋白等，導致血小板非可逆性聚集,形成血小板血栓。同時，血管受損后暴露的膠原纖維和釋放的組織因子，啟動內(nèi)源性和外源性凝血途徑,形成牢固的止血血栓，血小板釋放出血栓收縮蛋白，使血塊退縮，加強止血作用，使出血停止。凝血機制出血時間測定

※基本原理

皮膚毛細血管被刺破后出血自然停止所需的時間稱為出血時間。出血時間的變化主要受血小板數(shù)量和功能的影響，其次是血管壁的完整性和收縮功能。血漿凝血因子的影響較小。

※簡要步驟

出血時間測定器測定法：將出血時間測定

器（雙刀片或單刀片彈簧裝置）在肘窩下2橫指

處常規(guī)消毒后貼于皮膚表面，按動按鈕，開動秒

表計時。※實驗結(jié)果參考值：2～6分鐘※臨床意義

出血時間延長見于：

1、血小板明顯減少或功能異常如原發(fā)性血小板減少性紫癜、血小板無力癥等；

2、嚴重缺乏血漿有關(guān)因子如vWD、DIC；

3、其他異常，如：遺傳性出血性毛細血管擴張癥、服用抗血小板藥物※基本原理

靜脈血放在玻璃試管中，觀察自采血開始至血凝所需的時間稱為凝血時間。本試驗反映自因子Ⅻ被負電荷表面激活，至纖維蛋白形成所需的時間，主要反映內(nèi)源性凝血過程有無異常。

※簡要步驟

抽靜脈血3ml分別注入3支小試管內(nèi)。置37℃水浴中，3分鐘后每隔30秒鐘輕輕傾斜第1支試管1次，直至血液不再流動為止，依次傾斜第2和第3支試管，記錄第3管血液凝固所需時間。※實驗結(jié)果參考值：玻璃試管法4～12min凝血時間測定※臨床意義

凝血時間延長見于1、因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ明顯減少如血友病、血管性血友病等；2、凝血酶原和纖維蛋白原高度減少如嚴重的肝病、阻塞性黃疸、先天性纖維蛋白原減少癥等；3、纖溶亢進；4、循環(huán)抗凝物質(zhì)增多及使用※簡要步驟

取抗凝血,分離血漿,加APTT試劑，37℃溫育3分鐘后加Ca2+,記錄血漿凝固所需時間。※實驗結(jié)果

參考值:30～45秒。與正常對照相差在5秒以內(nèi)為正常，延長10秒以上為異常。凝血酶原時間測定※基本原理

在被檢血漿中加入因子Ⅲ和Ca2+后，激活凝血酶原，使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白，觀察血漿凝固所需時間即為凝血酶原時間。本試驗是外源性凝血過程的過篩試驗。因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅹ、Ⅶ質(zhì)和量異常影響此試驗.※臨床意義

凝血酶原時間延長見于：（1）先天性凝血因子異常如因子Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ之一或兩種以上的凝血因子有質(zhì)量異常時。（2）后天性凝血因子異常如嚴重肝病、維生素K缺乏、DIC后期、使用抗凝藥物、纖溶亢進等。凝血酶原時間縮短見于：血液高凝狀態(tài)（DIC早期、心肌梗死、腦血栓形成、急性血栓性靜脈炎）、血栓性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、洋地黃中毒、口服避孕藥等。凝血酶時間測定※基本原理

在被檢血漿中加入標準凝血酶溶液后，血漿凝固所需時間，為凝血酶凝固時間。當纖維蛋白原明顯減少或有結(jié)構(gòu)異常或血循環(huán)中有抗凝血酶物質(zhì)時，本試驗時間長?！喴襟E

取待檢血漿，加入標準凝血酶溶液中，記錄血漿凝固時間?！鶎嶒灲Y(jié)果

參考值：16～18S，較正常對照延長3S以上有診斷意義。※臨床意義凝血酶時間延長見于：（1）患者血循環(huán)中AT-Ⅲ活性明顯增高；（2）肝素樣物質(zhì)增多，如嚴重肝病、胰腺病及過敏性休克等；（3）纖溶亢進，如DIC；（4）纖維蛋白原少或有異常纖維蛋白時；（5）異常球蛋白增多，如多發(fā)性骨髓瘤。束臂試驗※基本原理束臂試驗也稱為毛細血管抵抗力試驗（

capillaryresistancetest，CRT）。毛細血管

壁的完整性有賴于毛細血管的結(jié)構(gòu)以及血小板的正

常。通過對毛細血管施以壓力，觀察出血點的多少

，可反映血管壁、血管內(nèi)皮細胞和血小板的綜合止

血作用?！喴襟E在前臂屈側(cè)肘下4cm出劃一直徑5cm圓圈，并用血壓計袖帶束于該側(cè)上臂,使壓力保持在收縮壓和舒張壓之間，持續(xù)8分鐘，解除壓力觀察出血點?！鶎嶒灲Y(jié)果Rumpel-leede法：正常人不超過10個出血點（陰性），10個以上出血點為陽性。血漿魚精蛋白副凝試驗※基本原理

硫酸魚精蛋白能分離FDP與非交聯(lián)的纖維蛋白單體（FM）聚合的可溶性復合物，使FM沉析出來，呈凝膠狀態(tài)?！喴襟E

取患者靜脈血，分離血漿，在受檢血漿中加入硫酸魚精蛋白，觀察是否出現(xiàn)纖維狀物?！鶎嶒灲Y(jié)果正常