顯微鏡使用1課件

實驗一顯微鏡的構(gòu)造和使用

植物細胞

一、目的要求

1、了解顯微鏡的構(gòu)造及其維護

2、初步掌握顯微鏡的使用方法

3、了解植物細胞的基本結(jié)構(gòu)

4、認識紋孔和胞間連絲的形狀，并理解其功能

5、學習臨時裝片技術和方法

二、實驗用品和材料

用品（以后各次實驗基本相同）：顯微鏡、擴大鏡、鑷子、實驗剪、解剖針、載玻片、蓋玻片、紗布、吸水紙、單面刀片、雙面刀片、蒸餾水、番紅、碘液、70%酒精、醋酸洋紅、蘇丹Ⅲ等。

實驗報告紙及繪圖工具自備。

三、實驗內(nèi)容和方法

（一）顯微鏡的構(gòu)造

一般光學顯微鏡的構(gòu)造包括兩大部分，即保證成象的光學系統(tǒng)和用以裝置光學系統(tǒng)的機械部分。

1、機械部分

（1）鏡座：是顯微鏡的底座，支持整個鏡體，使顯微鏡放置穩(wěn)固。

（2）鏡柱：鏡座上面直立的短柱，支持鏡體上部的各部分。

（3）鏡臂：彎曲如臂，下連鏡柱，上連鏡筒，這取放鏡體時手握的部位。鏡臂的下端與鏡柱連接處有一活動關節(jié)，可使鏡體在一定范圍內(nèi)后傾，便于觀察。

（4）鏡筒：為顯微鏡上部圓形中空的長筒，其上端放置目鏡，下端與物鏡轉(zhuǎn)換器相連，并使目鏡和物鏡的配合保持一定的距離，其作用是保護成象的光路與亮度。

（5）物鏡轉(zhuǎn)換器：接于鏡筒下端的圓盤，可自由轉(zhuǎn)動，盤上有3-4個螺旋圓孔，為安裝物鏡的部位，當旋動轉(zhuǎn)換器時，物鏡即可固定在使用的位置上，保證物鏡與目鏡的光線合軸。

（6）載物臺：為放置玻片標本的平臺，中央有一圓孔，以通過光線。兩旁裝有壓片夾或移動器，可固定玻片標本和移動玻片。

（7）調(diào)焦裝置：為了得到清晰的物像，必須調(diào)節(jié)物鏡與標本之間的距離，使它與物鏡的工作距離相等。這種操作叫調(diào)焦。在鏡臂兩側(cè)有粗、細調(diào)焦螺旋各一對，旋轉(zhuǎn)時可使鏡筒上升或下降。大的一對是粗調(diào)焦螺旋，調(diào)動鏡筒升降距離大，旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒移動2毫米左右。小的一對是細焦螺旋，調(diào)動鏡筒的升降距離很小，旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒移動約0.1毫米。在用低倍物鏡觀察時，使用粗調(diào)焦螺旋；用高倍物鏡觀察時，用細調(diào)焦螺旋。

（8）聚光器調(diào)節(jié)螺旋：在鏡柱的左側(cè)或右側(cè)，旋轉(zhuǎn)它時使聚光器上下移動，以調(diào)節(jié)光線。

2、光學部分

由成像系統(tǒng)和照明系統(tǒng)組成，成像系統(tǒng)包括物鏡和目鏡，照明系統(tǒng)包括反光鏡和聚光器。

（1）物鏡：這是決定顯微鏡質(zhì)量的最主要部件，安裝在鏡筒下端的物鏡轉(zhuǎn)換器上，一般有三個放大倍數(shù)不同的物鏡，即低倍（10×）、高倍（40×）、油鏡（100×）。使用油鏡時，必須在蓋玻片上和聚光器上滴加一滴香柏油（鏡油），然后才能使用。

（3）反光鏡（反射鏡）：是個圓形的兩面鏡。一面是平面鏡，能反光；另一面是凹面鏡，兼有反光和匯集光線的作用，可選擇使用，反光鏡具有能轉(zhuǎn)動的關節(jié)，可作各種方向的翻轉(zhuǎn)，面向光源，能將光線反射在聚光器上。二、使用顯微鏡的主要步驟和方法

1、取鏡和放置：

按固定編號從柜中提取顯微鏡木箱，用鑰匙打開箱門，從中取出顯微鏡，取鏡時應右手握住鏡臂，左手平托鏡座，保持鏡體直立，不可歪斜。放置桌面時，動作要輕。一般就放在座位左側(cè)，距桌邊緣約5-6厘米的地方，以便觀察和防止掉落。特別要禁止用單手提著顯微鏡走，防止目鏡從鏡筒中滑出。

3、低倍鏡的使用

觀察任何標本，都必須先用低倍鏡，因為低倍鏡的視野范圍大，容易發(fā)現(xiàn)目標和確定觀察的部位。

（1）放置切片：升高鏡筒，把玻片標本放在載物臺中央，使材料正對通光孔的中心，然后用壓片夾壓住載玻片的兩端。

（2）調(diào)整焦點：兩眼從側(cè)面注視物鏡，并慢慢按順時針方向轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦螺旋，使鏡筒徐徐下必至物鏡玻片約5毫米處，接著用左眼注視鏡筒內(nèi)，同是按反時針方向，向右、向內(nèi)轉(zhuǎn)動粗調(diào)焦螺旋使鏡筒緩慢上升，直到看見清晰的物像為止（注意不可在調(diào)焦點時邊觀察邊下必鏡筒，否則會使物鏡和玻片觸碰，壓碎破片，損壞物鏡）。如一次調(diào)節(jié)看不到物像，應重新檢查材料是否在光軸線上，重新移正材料，再重復上述操作過程直至物像出現(xiàn)和清晰為止。

為了使物像更加清晰，此時可使用細調(diào)焦螺旋，輕微轉(zhuǎn)動到使物像最清楚時為止，但切忌連續(xù)轉(zhuǎn)動多圈，以免損傷儀器的精確度。當細調(diào)焦螺旋向上或向下轉(zhuǎn)不動時，就是轉(zhuǎn)到了極限，千萬不能再硬擰，而應重新調(diào)粗調(diào)焦螺旋，把物鏡與標本的距離稍稍拉開后，再反擰細焦螺旋，約10圈左右（因一般可動范圍為20圈）。

（3）低倍物鏡的觀察：焦點調(diào)好后，可根據(jù)需要，移動玻片，把要觀察的部分移到最有利的位置上。找到物像后還可根據(jù)材料的厚薄、顏色、成像的反差強弱等是否合適再進行調(diào)節(jié)，如果太亮，可降低聚光器或縮小虹彩光圈，反之則升高聚光器或開大光圈。

4、高倍物鏡的使用

在觀察較小的物體或細微結(jié)構(gòu)時使用。

（1）選好目標：由于高倍鏡只能把低倍鏡視野中心的一小部分加以放大。因此，使用高倍鏡前，應先在低倍鏡中選好之合軸，即使其與鏡筒成一直線（因高倍鏡的工作距離很短，操作時要十分仔細，以防鏡頭碰擊玻片）。

（3）在換用高倍鏡觀察時，視野變小變暗，所以要重新調(diào)節(jié)視野的亮度，此時或升高聚光器或放大虹彩光圈。

5、顯微鏡使用后的整理

觀察完畢，應將鏡頭轉(zhuǎn)為低倍鏡，再水平取下切片，取下時要注意勿使切片觸及鏡頭，切片取下后，再轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡鏡頭與通光孔錯開，再下降鏡筒，使兩個物鏡位于載物臺上通光孔的兩側(cè)，并將反光鏡還原成與桌面垂直，擦凈鏡體，仍用右手握住鏡臂，左手平托顯微鏡，送回鏡箱中。

3、用顯微鏡觀察時，切忌睜一眼閉一眼，要左眼窺鏡，右眼作圖。

4、標本必須加蓋玻片，制作帶水或藥液的玻片標本時，必須兩邊擦凈再觀察，千萬不可將藥水沾到鏡頭上。

5、注意防潮，在觀察時，顯微鏡上凝結(jié)的水珠（尤其在冬天觀察，呼吸中的水分常在顯微鏡上凝結(jié)成水珠），要及時擦掉，顯微鏡要放干燥處保存，鏡箱內(nèi)應放一袋蘭色硅膠干燥劑。

6、如遇機件不靈，使用困難時，千萬不可用力轉(zhuǎn)動，更不要任意拆修，應立即報告指導教師，要求協(xié)助排除故障，以免造成損壞。

（二）植物細胞的觀察

1、質(zhì)體的觀察

①葉綠體及細胞質(zhì)運動現(xiàn)象：

取一片黑藻莖尖嫩葉，放入載玻片的水滴中，蓋上蓋玻片，先在低倍鏡下找到清楚的細胞圖像，再轉(zhuǎn)高倍鏡下觀察。在高倍鏡下看更清楚，葉綠體是浸沒在細胞質(zhì)中的，緊貼細胞之內(nèi)，有時以其寬面正對視野，即緊貼細胞的上壁或下壁，常呈扁圓形；有時則緊貼側(cè)壁，使我們看到的是其窄面。同時，在黑藻葉片細胞里還可看到葉綠體隨胞質(zhì)運動而作一個或幾個方面的流動。溫度在25度左右最適宜。注意：觀察時，靠順脈部位細胞質(zhì)流動看得更清楚些。

2、單紋孔的觀察

取新鮮紅辣椒，用刀片沿辣椒表面切取薄片，然后以表皮外切向壁朝上裝片，先用低倍鏡觀察，選擇邊緣薄而清晰的區(qū)域，換用高倍鏡尋找呈念珠狀的相鄰兩細胞之間的細胞壁上多處發(fā)生相對的凹陷，這就是單紋孔對。

3、胞間連絲的觀察

取柿胚乳細胞永久制片，置低倍鏡下觀察，可以看到很多多邊形的細胞壁明顯增厚，而細胞腔小，其內(nèi)的原生質(zhì)體被染上顏色或在制片過程中丟失，使細胞成為空腔。在相鄰兩細胞加厚的細胞壁上，選擇胞間連絲清晰而比較集中的地方，換高倍鏡觀察。那些微細的暗色細絲即胞間連絲，它們把相鄰兩細胞原生質(zhì)體聯(lián)系起來。

柿胚乳細胞是具有生活原生質(zhì)體的“厚壁細胞”。實際上這種組織是一種特殊的薄壁，即貯藏組織，是貯藏的營養(yǎng)物質(zhì)半纖維素（一種多糖）沉積在細胞壁上，使其初生壁相當增厚。

②油滴：

用花生種子作徒手切生，挑選薄片放在凹玻片中用蘇丹Ⅲ溶液染色數(shù)分鐘，再夾到載玻片觀察，看到在細胞內(nèi)有染成紅色的油滴。

③蛋白質(zhì)：

用蓖麻種子胚乳作徒手切片，選擇薄片放入100%酒精中洗滌數(shù)分鐘，使切片中的脂肪溶解在酒精中，然后，取出切片用蒸餾水裝片觀察?？梢钥吹脚呷榧毎麅?nèi)的糊粉粒存在，它是由貯藏在液泡中一種蛋白擬晶體、球蛋白體充填的無定形的膠質(zhì)共同組成，如果在切片中加一滴碘液，其蛋白質(zhì)呈紅色。

四、作業(yè)：

1、繪一個黑藻葉片的細胞