真菌及檢驗(yàn)課件

真菌學(xué)及檢驗(yàn)真菌學(xué)及檢驗(yàn)1

1、掌握真菌的概念2、掌握真菌的生物學(xué)性狀。3、了解真菌的致病性與免疫性。4、掌握真菌的常規(guī)檢查法。目的與要求目的與要求2真菌的基本性狀真菌的基本性狀3真菌（Fungus）概念:是一類有典型的細(xì)胞核和完整細(xì)胞器，不含葉綠素，不分根、莖、葉的真核細(xì)胞型微生物。

細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。

真菌（Fungus）概念:4具有典型細(xì)胞結(jié)構(gòu)（細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞壁）細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和（或）纖維素?zé)o根、莖、葉，不含葉綠素以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料能進(jìn)行有性生殖和（或）無性繁殖Fungus特點(diǎn)具有典型細(xì)胞結(jié)構(gòu)（細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞壁）Fungus特點(diǎn)5第一節(jié)真菌的生物學(xué)地位與分類生物學(xué)地位：真菌界分類：真菌界粘菌門(Myxomycota)真菌門(Eumycota)接合菌亞門子囊菌亞門擔(dān)子菌亞門半知菌亞門第一節(jié)真菌的生物學(xué)地位與分類生物學(xué)地位：真菌界真粘菌門真6對人類致病的真菌分為：

淺部真菌：侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲，為慢性，對治療有頑固性，但影響身體較小

深部真菌：可侵犯全身內(nèi)臟，嚴(yán)重的可引起死亡。此外有些真菌寄生于糧食、飼料、食品中，能產(chǎn)生毒素引起中毒性真菌病。對人類致病的真菌分為：7

第二節(jié)真菌的生物學(xué)性狀一、形態(tài)與結(jié)構(gòu)二、培養(yǎng)與繁殖三、變異性與抵抗力第二節(jié)真菌的生物學(xué)性狀一、形態(tài)與結(jié)構(gòu)8一、真菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：比細(xì)菌復(fù)雜細(xì)胞壁缺乏肽聚糖，為幾丁質(zhì)(Chitin)（多聚N－乙酰葡萄糖組成），并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白質(zhì)，某些酵母菌還含類脂體。細(xì)胞內(nèi)有較為典型的核結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器。

大小：比細(xì)菌大幾倍～幾十倍一、真菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：比細(xì)菌復(fù)雜大?。罕燃?xì)菌大幾倍～幾十9單細(xì)胞真菌多細(xì)胞真菌菌絲(hypha)孢子(spore)據(jù)功能分據(jù)是否有隔分據(jù)形狀分葉狀孢子分生孢子孢子囊孢子（霉菌Mold）無性孢子有性孢子許多病原性真菌因生活的環(huán)境如營養(yǎng)、溫度氧氣等的改變，孢子與菌絲兩種形態(tài)可以互變，這類真菌稱為二相性真菌。真菌（如：酵母菌、類酵母菌）單細(xì)胞真菌菌絲據(jù)功能分葉狀孢子（霉菌Mold）無性孢子10真菌孢子和細(xì)菌芽胞的區(qū)別真菌孢子細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60-70短時(shí)間殺死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個孢子一個細(xì)菌體只形成一個芽孢作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細(xì)胞內(nèi)外形成只在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成形狀形態(tài)、色澤多樣圓形或橢圓形真菌孢子和細(xì)菌芽胞的區(qū)別真菌孢子細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60-711培養(yǎng)特性：

營養(yǎng)要求不高，在沙保（Sabouraud）培養(yǎng)基上，PH4～6生長良好。

淺部真菌：22～28℃，生長緩慢，大多于1～2周出現(xiàn)典型菌落。

深部感染真菌：37℃長的最好，生長較快，3～4天即長出菌落。

二、真菌的培養(yǎng)培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求不高，在沙保（Sabourau12

1．酵母型菌落為單細(xì)胞真菌的菌落，形態(tài)與一般細(xì)菌菌落相似，以出芽形式繁殖，如新型隱球菌。2．類酵母型菌落外觀似酵母菌落，但可見伸入培養(yǎng)基中的假菌絲，它是由伸長的芽生孢子形成，如白色念珠菌。3.絲狀菌落為多細(xì)胞真菌的菌落，由許多菌絲體組成。絲狀菌落呈棉絮狀、絨球狀、粉末狀或石膏粉樣，在下面和背面可顯示不同顏色，這些以及菌絲、孢子的形狀都是真菌的鑒別依據(jù)。1．酵母型菌落為單細(xì)胞真菌的菌落，形態(tài)與一般13三、變異性與抵抗力易變異：經(jīng)多次傳代或培養(yǎng)時(shí)間過久，其形態(tài)、菌落性狀、色素及毒力等都可以發(fā)生改變。用不同的培養(yǎng)基和不同溫度培養(yǎng)，其性狀也可不同。三、變異性與抵抗力易變異：經(jīng)多次傳代或培養(yǎng)時(shí)間過久，其形態(tài)、14抵抗力

真菌對干燥、陽光、紫外線及一般化學(xué)消毒劑抵抗力較強(qiáng)；對熱敏感，一般60℃1小時(shí)可殺死真菌菌絲和孢子。對2.5%碘酒，10%福爾馬林都敏感，一般可用福爾馬林薰蒸被真菌感染的房間。對抗細(xì)菌的抗生素不敏感；灰黃霉素、制霉菌素、二性霉素克霉唑等對其有抑制作用。抵抗力15第三節(jié)真菌的致病性與免疫性一、致病性（一）病原性真菌感染（二）條件致病性真菌感染（三）真菌超敏反應(yīng)性疾?。ㄋ模┱婢灾卸荆ㄎ澹┱婢c腫瘤第三節(jié)真菌的致病性與免疫性一、致病性16

1.病原性真菌感染：主要是外源性感染，淺部真菌：有親嗜表皮角質(zhì)特性，侵犯皮膚、指甲及須發(fā)等組織，頑強(qiáng)繁殖，發(fā)生機(jī)械刺激損害，同時(shí)產(chǎn)生酶及酸等代謝產(chǎn)物，引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞病變。深部真菌：可侵犯皮下，內(nèi)臟及腦膜等處，引起慢性肉芽腫及壞死。

2.條件致病性真菌感染

主要是內(nèi)源性感染（如白色念珠菌），此類感染與機(jī)體抵抗力，免疫力降低及菌落失調(diào)有關(guān)，常發(fā)生于長期應(yīng)用抗生素、激素、免疫抑制劑、化療和放療的患者。1.病原性真菌感染：主要是外源性感染，淺部真菌：有親嗜表173．真菌變態(tài)反應(yīng)性疾病

由真菌性過敏原（如孢子抗原）引起過敏癥，如哮喘，變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎和癬菌疹等。4．真菌毒素中毒癥：

侵犯害肝、腎、腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及造血組織。如黃曲霉毒素、某些鐮刀菌素和黑葡萄穗素。5、真菌毒素與腫瘤

如：黃曲霉素誘發(fā)肝癌。3．真菌變態(tài)反應(yīng)性疾病4．真菌毒素中毒癥：18

二、免疫性

1．非特異性免疫：人類對真菌感染有天然免疫力。皮膚分泌短鏈脂肪酸和乳酸、血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白、中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞的吞噬作用，以及正常菌群的拮抗作用。2．特異性免疫：真菌感染中細(xì)胞免疫是機(jī)體排菌殺菌及復(fù)原的關(guān)鍵。

由于皮膚癬真菌與腐生性真菌間有共同抗原，因此一般不做血清學(xué)檢查Ab輔助診斷此類真菌感染。二、免疫性1．非特異性免疫：人類對真菌感染有天然免19第四節(jié)真菌的常規(guī)檢驗(yàn)法實(shí)驗(yàn)室檢查：標(biāo)本采集分離培養(yǎng)直接鏡檢生化反應(yīng)染色鏡檢免疫學(xué)試驗(yàn)以直接鏡檢和分離培養(yǎng)最重要。第四節(jié)真菌的常規(guī)檢驗(yàn)法實(shí)驗(yàn)室檢查：以直接鏡檢和分離培養(yǎng)最重20一、臨床標(biāo)本的采集

1．皮膚的角質(zhì)性物質(zhì)：毛發(fā)、指(趾)甲、皮屑等。2．各種分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、糞便、尿液等。3．血液和體液：體液包括胸水、腹水、腦脊液、淋巴穿刺液等。4．膿汁及滲出物。一、臨床標(biāo)本的采集211.采集的標(biāo)本要適宜

不同真菌感染應(yīng)采取不同的臨床標(biāo)本。淺部真菌感染如體癬，應(yīng)刮取病變邊緣的痂、皮屑，發(fā)癬應(yīng)取病發(fā)。深部真菌感染應(yīng)取血液、腦脊液、膿汁等。2.在用藥前采集標(biāo)本

一般真菌標(biāo)本須在用藥前采集，對已用藥者則需停藥一段時(shí)間后再采集標(biāo)本。采集標(biāo)本注意事項(xiàng)1.采集的標(biāo)本要適宜不同真菌感染應(yīng)采取不同的臨223.采集的標(biāo)本量要足血液和腦脊液標(biāo)本5ml，胸腔液20ml，皮屑標(biāo)本兩塊，活體組織兩份(一份送病理科檢查，一份作鏡檢和培養(yǎng))。4.嚴(yán)格無菌操作并進(jìn)行消毒處理，尤其是采集血液和腦脊液標(biāo)本，要避免污染雜菌。5.采集標(biāo)本立即送檢深部真菌標(biāo)本最長不得超過2h。3.采集的標(biāo)本量要足血液和腦脊液標(biāo)本5m23二、檢驗(yàn)程序二、檢驗(yàn)程序24三、檢驗(yàn)方法（一）標(biāo)本直接檢查不染色標(biāo)本檢查染色標(biāo)本檢查（二）培養(yǎng)檢查（三）鑒定

三、檢驗(yàn)方法（一）標(biāo)本直接檢查251.不染色標(biāo)本的直接鏡檢：

直接采取標(biāo)本制片、顯微鏡下直接觀察，若發(fā)現(xiàn)真菌菌絲或孢子存在時(shí)，即可初步判定為真菌感染。1）標(biāo)本制備：2）檢查方法：3）封固液：（一）標(biāo)本直接檢查1.不染色標(biāo)本的直接鏡檢：（一）標(biāo)本直接檢查26①KOH溶液：本液適于檢查致密的難以透明的材料（如毛發(fā)、指甲、鱗屑等）。②墨汁：主要用于檢查有莢膜的真菌（如新型隱球菌等）③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力較強(qiáng)，只限于不透明的標(biāo)本。④生理鹽水：為觀察真菌的出芽現(xiàn)象可用生理鹽水代替氫氧化鉀溶液。

①KOH溶液：②墨汁：③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：④生理27直接鏡檢的意義

①有診斷意義，如淺部真菌病等；②通過真菌的形態(tài)，可確定某些致病性真菌的屬或種,如假絲酵母菌的厚膜孢子等；

直接鏡檢的局限性：

①陰性結(jié)果不能排除真菌感染；②有假陽性結(jié)果。因此，對直接鏡檢可疑結(jié)果應(yīng)作復(fù)查或用其他檢驗(yàn)方法鑒定。直接鏡檢的意義直接鏡檢的局限性：282.染色標(biāo)本檢查（1）革蘭染色：各種真菌均染成革蘭陽性。（2）乳酸酚棉藍(lán)染色（3）糖原染色：

又稱過碘Schiff（簡稱PAS或PASH）。真菌細(xì)胞壁由纖維素和幾丁質(zhì)組成，含有多糖。過碘酸使糖氧化成醛，再與品紅－亞硫酸結(jié)合，成為紅色，故菌體均染成紅色。為真菌染色最常用的方法之一。2.染色標(biāo)本檢查（2）乳酸酚棉藍(lán)染色（3）糖原染色：29（4）嗜銀染色（GMS）：染成黑色。

（5）粘蛋白卡紅染色法（MCS）：

主要用于新生隱球菌莢膜的染色。隱球菌莢膜和細(xì)胞壁呈紅色，細(xì)胞核呈黑色。（6）熒光染色：

主要使用吖啶橙和氫氧化鉀來染直接涂片、培養(yǎng)涂片及組織切片。（4）嗜銀染色（GMS）：染成黑色。（5）粘蛋白卡紅染色法30（二）培養(yǎng)檢查法1、培養(yǎng)基常用真菌培養(yǎng)基及用途培養(yǎng)基用途沙保培養(yǎng)基真菌的常規(guī)培養(yǎng)放線菌酮－氯霉素瓊脂同上玉米粉聚山梨酯－80瓊脂觀察白假絲酵母菌的厚膜孢子馬鈴薯葡萄糖瓊脂觀察真菌菌落色素，用于鑒別尿素瓊脂用生化反應(yīng)鑒別真菌（紅色癬菌和石膏樣癬菌）心腦浸液葡萄糖血瓊脂深部真菌培養(yǎng)（二相性真菌）（二）培養(yǎng)檢查法1、培養(yǎng)基常用真菌培養(yǎng)基及用途培養(yǎng)基用31

2、培養(yǎng)方法

接種工具為接種鉤、接種針和接種環(huán)

（1）直接培養(yǎng)

（2）試管培養(yǎng)：多用于菌種傳代接種與保存。

（3）大培養(yǎng)：用平皿或培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

（4）小培養(yǎng)

可觀察結(jié)構(gòu)特征及發(fā)育的全過程。

1）

玻片培養(yǎng)

2）郭可大鋼圈小培養(yǎng)法：

材料：培養(yǎng)基、鋼環(huán)（用鐵環(huán)或廢電線之鋁絲制成）、載玻片、蓋玻片、毛細(xì)管、石蠟等。2、培養(yǎng)方法接種工具為接種鉤、接種針和接種環(huán)32先將無菌鋼圈以熱石蠟固定在玻片和蓋玻片之間，鋼環(huán)開口處深入底部加入培養(yǎng)基。加夠半環(huán)即可凝固。用接種針取少量材料，接種在培養(yǎng)基表面。將接種好的玻片，放在平皿內(nèi)，并放濕紗布以防干燥。逐日鏡

檢，一般約7ｄ即可長好。根據(jù)菌絲和孢子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行真菌類別的鑒定。真菌培養(yǎng)是目前鑒定真菌的唯一方法。培養(yǎng)真菌的溫度為28℃，但深部真菌為37℃。菌落是鑒別真菌的方法。先將無菌鋼圈以熱石蠟固定在玻片和蓋玻片之間，鋼環(huán)開口33（三）真菌的鑒定

方法：1、生化反應(yīng)2、芽管形成3、厚膜孢子生成4、免疫學(xué)及分子生物學(xué)試驗(yàn)等。

（三）真菌的鑒定341.真菌的生化反應(yīng)

用于主要深部感染真菌如假絲酵母菌、隱球菌等。

1）糖(醇)類發(fā)酵試驗(yàn)37℃，觀察糖發(fā)酵情況。2）同化碳源試驗(yàn)

含菌生理鹽水與已融化的固體同化碳源培養(yǎng)基(45℃)混合，然后在培養(yǎng)基上分別加糖，置25℃孵育觀察結(jié)果。若24h后無變化可重復(fù)加糖。如能同化則在糖周圍有生長圈，否則無生長。一般對雙糖發(fā)酵的真菌能同化或利用糖類或碳源。主要用于酵母菌的鑒定。1.真菌的生化反應(yīng)2）同化碳源試驗(yàn)含菌生理鹽水與已融化的35

3）同化氮源試驗(yàn)同化碳源試驗(yàn)相同，但需用無氮源的培養(yǎng)基，不要加糖類，而加入硝酸鉀。用于觀察酵母菌對硝酸鉀的利用情況。4）明膠液化試驗(yàn)：某些真菌可液化明膠。5）尿素分解試驗(yàn)石膏樣癬菌、新生隱球菌等可分解尿素。6）測定淀粉樣化合物：某些真菌可產(chǎn)生淀粉樣化合物，遇碘后變成蘭色。7）牛乳分解試驗(yàn)；真菌可使牛乳酸化、凝固、胨化、堿化等3）同化氮源試驗(yàn)同化碳源試驗(yàn)相同，但需用無氮源362.核酸檢測

醫(yī)學(xué)真菌的鑒定手段引入了分子生物學(xué)的鑒定方法，從核酸堿基G+Cmol％分析、限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)Southern印跡分析到脈沖場凝膠電泳(PFGE)PCR指紋、隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)以及DNA特殊片段測序等。2.核酸檢測37單細(xì)胞真菌（酵母菌）多細(xì)胞真菌單細(xì)胞真菌多細(xì)胞真菌38真菌及檢驗(yàn)課件39真菌菌絲的形態(tài)真菌菌絲的形態(tài)40真菌無性孢子形態(tài)芽生孢子厚膜孢子關(guān)節(jié)孢子小分生孢子大分生孢子1葉狀孢子2分生孢子真菌無性孢子形態(tài)芽生孢子厚膜孢子關(guān)節(jié)孢子小分生41芽生孢子芽生孢子42Candidaalbicans--chlamydosporeformationoncornmealagar假絲酵母菌厚膜孢子Candidaalbicans--chlamydosp433、孢子囊孢子3、孢子囊孢子44孢子囊孢子孢子囊孢子45真菌及檢驗(yàn)課件46真菌及檢驗(yàn)課件47真菌的有性孢子（根霉菌的接合孢子）真菌的有性孢子48假絲酵母菌菌落假絲酵母菌菌落49真菌及檢驗(yàn)課件50真菌及檢驗(yàn)課件51

青霉菌青霉菌52石膏樣癬菌石膏樣癬菌53真菌及檢驗(yàn)課件54真菌及檢驗(yàn)課件55真菌及檢驗(yàn)課件56真菌及檢驗(yàn)課件57真菌及檢驗(yàn)課件58

新型隱球菌新型隱球菌59真菌及檢驗(yàn)課件60嗜銀染色（GMS）嗜銀染色（GMS）61真菌學(xué)及檢驗(yàn)真菌學(xué)及檢驗(yàn)62

1、掌握真菌的概念2、掌握真菌的生物學(xué)性狀。3、了解真菌的致病性與免疫性。4、掌握真菌的常規(guī)檢查法。目的與要求目的與要求63真菌的基本性狀真菌的基本性狀64真菌（Fungus）概念:是一類有典型的細(xì)胞核和完整細(xì)胞器，不含葉綠素，不分根、莖、葉的真核細(xì)胞型微生物。

細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。

真菌（Fungus）概念:65具有典型細(xì)胞結(jié)構(gòu)（細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞壁）細(xì)胞壁含幾丁質(zhì)和（或）纖維素?zé)o根、莖、葉，不含葉綠素以腐生或寄生方式攝取養(yǎng)料能進(jìn)行有性生殖和（或）無性繁殖Fungus特點(diǎn)具有典型細(xì)胞結(jié)構(gòu)（細(xì)胞核、細(xì)胞器、細(xì)胞壁）Fungus特點(diǎn)66第一節(jié)真菌的生物學(xué)地位與分類生物學(xué)地位：真菌界分類：真菌界粘菌門(Myxomycota)真菌門(Eumycota)接合菌亞門子囊菌亞門擔(dān)子菌亞門半知菌亞門第一節(jié)真菌的生物學(xué)地位與分類生物學(xué)地位：真菌界真粘菌門真67對人類致病的真菌分為：

淺部真菌：侵犯皮膚、毛發(fā)、指甲，為慢性，對治療有頑固性，但影響身體較小

深部真菌：可侵犯全身內(nèi)臟，嚴(yán)重的可引起死亡。此外有些真菌寄生于糧食、飼料、食品中，能產(chǎn)生毒素引起中毒性真菌病。對人類致病的真菌分為：68

第二節(jié)真菌的生物學(xué)性狀一、形態(tài)與結(jié)構(gòu)二、培養(yǎng)與繁殖三、變異性與抵抗力第二節(jié)真菌的生物學(xué)性狀一、形態(tài)與結(jié)構(gòu)69一、真菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：比細(xì)菌復(fù)雜細(xì)胞壁缺乏肽聚糖，為幾丁質(zhì)(Chitin)（多聚N－乙酰葡萄糖組成），并含葡聚糖，甘露聚糖及蛋白質(zhì)，某些酵母菌還含類脂體。細(xì)胞內(nèi)有較為典型的核結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器。

大?。罕燃?xì)菌大幾倍～幾十倍一、真菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)：比細(xì)菌復(fù)雜大小：比細(xì)菌大幾倍～幾十70單細(xì)胞真菌多細(xì)胞真菌菌絲(hypha)孢子(spore)據(jù)功能分據(jù)是否有隔分據(jù)形狀分葉狀孢子分生孢子孢子囊孢子（霉菌Mold）無性孢子有性孢子許多病原性真菌因生活的環(huán)境如營養(yǎng)、溫度氧氣等的改變，孢子與菌絲兩種形態(tài)可以互變，這類真菌稱為二相性真菌。真菌（如：酵母菌、類酵母菌）單細(xì)胞真菌菌絲據(jù)功能分葉狀孢子（霉菌Mold）無性孢子71真菌孢子和細(xì)菌芽胞的區(qū)別真菌孢子細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60-70短時(shí)間殺死強(qiáng)，煮沸短時(shí)間不死數(shù)目一條菌絲可產(chǎn)生多個孢子一個細(xì)菌體只形成一個芽孢作用為繁殖方式之一不是繁殖方式形成位置可在細(xì)胞內(nèi)外形成只在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)形成形狀形態(tài)、色澤多樣圓形或橢圓形真菌孢子和細(xì)菌芽胞的區(qū)別真菌孢子細(xì)菌芽胞抵抗力不強(qiáng)，60-772培養(yǎng)特性：

營養(yǎng)要求不高，在沙保（Sabouraud）培養(yǎng)基上，PH4～6生長良好。

淺部真菌：22～28℃，生長緩慢，大多于1～2周出現(xiàn)典型菌落。

深部感染真菌：37℃長的最好，生長較快，3～4天即長出菌落。

二、真菌的培養(yǎng)培養(yǎng)特性：營養(yǎng)要求不高，在沙保（Sabourau73

1．酵母型菌落為單細(xì)胞真菌的菌落，形態(tài)與一般細(xì)菌菌落相似，以出芽形式繁殖，如新型隱球菌。2．類酵母型菌落外觀似酵母菌落，但可見伸入培養(yǎng)基中的假菌絲，它是由伸長的芽生孢子形成，如白色念珠菌。3.絲狀菌落為多細(xì)胞真菌的菌落，由許多菌絲體組成。絲狀菌落呈棉絮狀、絨球狀、粉末狀或石膏粉樣，在下面和背面可顯示不同顏色，這些以及菌絲、孢子的形狀都是真菌的鑒別依據(jù)。1．酵母型菌落為單細(xì)胞真菌的菌落，形態(tài)與一般74三、變異性與抵抗力易變異：經(jīng)多次傳代或培養(yǎng)時(shí)間過久，其形態(tài)、菌落性狀、色素及毒力等都可以發(fā)生改變。用不同的培養(yǎng)基和不同溫度培養(yǎng)，其性狀也可不同。三、變異性與抵抗力易變異：經(jīng)多次傳代或培養(yǎng)時(shí)間過久，其形態(tài)、75抵抗力

真菌對干燥、陽光、紫外線及一般化學(xué)消毒劑抵抗力較強(qiáng)；對熱敏感，一般60℃1小時(shí)可殺死真菌菌絲和孢子。對2.5%碘酒，10%福爾馬林都敏感，一般可用福爾馬林薰蒸被真菌感染的房間。對抗細(xì)菌的抗生素不敏感；灰黃霉素、制霉菌素、二性霉素克霉唑等對其有抑制作用。抵抗力76第三節(jié)真菌的致病性與免疫性一、致病性（一）病原性真菌感染（二）條件致病性真菌感染（三）真菌超敏反應(yīng)性疾?。ㄋ模┱婢灾卸荆ㄎ澹┱婢c腫瘤第三節(jié)真菌的致病性與免疫性一、致病性77

1.病原性真菌感染：主要是外源性感染，淺部真菌：有親嗜表皮角質(zhì)特性，侵犯皮膚、指甲及須發(fā)等組織，頑強(qiáng)繁殖，發(fā)生機(jī)械刺激損害，同時(shí)產(chǎn)生酶及酸等代謝產(chǎn)物，引起炎癥反應(yīng)和細(xì)胞病變。深部真菌：可侵犯皮下，內(nèi)臟及腦膜等處，引起慢性肉芽腫及壞死。

2.條件致病性真菌感染

主要是內(nèi)源性感染（如白色念珠菌），此類感染與機(jī)體抵抗力，免疫力降低及菌落失調(diào)有關(guān)，常發(fā)生于長期應(yīng)用抗生素、激素、免疫抑制劑、化療和放療的患者。1.病原性真菌感染：主要是外源性感染，淺部真菌：有親嗜表783．真菌變態(tài)反應(yīng)性疾病

由真菌性過敏原（如孢子抗原）引起過敏癥，如哮喘，變態(tài)反應(yīng)性肺泡炎和癬菌疹等。4．真菌毒素中毒癥：

侵犯害肝、腎、腦、中樞神經(jīng)系統(tǒng)及造血組織。如黃曲霉毒素、某些鐮刀菌素和黑葡萄穗素。5、真菌毒素與腫瘤

如：黃曲霉素誘發(fā)肝癌。3．真菌變態(tài)反應(yīng)性疾病4．真菌毒素中毒癥：79

二、免疫性

1．非特異性免疫：人類對真菌感染有天然免疫力。皮膚分泌短鏈脂肪酸和乳酸、血液中轉(zhuǎn)鐵蛋白、中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞的吞噬作用，以及正常菌群的拮抗作用。2．特異性免疫：真菌感染中細(xì)胞免疫是機(jī)體排菌殺菌及復(fù)原的關(guān)鍵。

由于皮膚癬真菌與腐生性真菌間有共同抗原，因此一般不做血清學(xué)檢查Ab輔助診斷此類真菌感染。二、免疫性1．非特異性免疫：人類對真菌感染有天然免80第四節(jié)真菌的常規(guī)檢驗(yàn)法實(shí)驗(yàn)室檢查：標(biāo)本采集分離培養(yǎng)直接鏡檢生化反應(yīng)染色鏡檢免疫學(xué)試驗(yàn)以直接鏡檢和分離培養(yǎng)最重要。第四節(jié)真菌的常規(guī)檢驗(yàn)法實(shí)驗(yàn)室檢查：以直接鏡檢和分離培養(yǎng)最重81一、臨床標(biāo)本的采集

1．皮膚的角質(zhì)性物質(zhì)：毛發(fā)、指(趾)甲、皮屑等。2．各種分泌物和排泄物：生殖道分泌物、耳垢、痰、糞便、尿液等。3．血液和體液：體液包括胸水、腹水、腦脊液、淋巴穿刺液等。4．膿汁及滲出物。一、臨床標(biāo)本的采集821.采集的標(biāo)本要適宜

不同真菌感染應(yīng)采取不同的臨床標(biāo)本。淺部真菌感染如體癬，應(yīng)刮取病變邊緣的痂、皮屑，發(fā)癬應(yīng)取病發(fā)。深部真菌感染應(yīng)取血液、腦脊液、膿汁等。2.在用藥前采集標(biāo)本

一般真菌標(biāo)本須在用藥前采集，對已用藥者則需停藥一段時(shí)間后再采集標(biāo)本。采集標(biāo)本注意事項(xiàng)1.采集的標(biāo)本要適宜不同真菌感染應(yīng)采取不同的臨833.采集的標(biāo)本量要足血液和腦脊液標(biāo)本5ml，胸腔液20ml，皮屑標(biāo)本兩塊，活體組織兩份(一份送病理科檢查，一份作鏡檢和培養(yǎng))。4.嚴(yán)格無菌操作并進(jìn)行消毒處理，尤其是采集血液和腦脊液標(biāo)本，要避免污染雜菌。5.采集標(biāo)本立即送檢深部真菌標(biāo)本最長不得超過2h。3.采集的標(biāo)本量要足血液和腦脊液標(biāo)本5m84二、檢驗(yàn)程序二、檢驗(yàn)程序85三、檢驗(yàn)方法（一）標(biāo)本直接檢查不染色標(biāo)本檢查染色標(biāo)本檢查（二）培養(yǎng)檢查（三）鑒定

三、檢驗(yàn)方法（一）標(biāo)本直接檢查861.不染色標(biāo)本的直接鏡檢：

直接采取標(biāo)本制片、顯微鏡下直接觀察，若發(fā)現(xiàn)真菌菌絲或孢子存在時(shí)，即可初步判定為真菌感染。1）標(biāo)本制備：2）檢查方法：3）封固液：（一）標(biāo)本直接檢查1.不染色標(biāo)本的直接鏡檢：（一）標(biāo)本直接檢查87①KOH溶液：本液適于檢查致密的難以透明的材料（如毛發(fā)、指甲、鱗屑等）。②墨汁：主要用于檢查有莢膜的真菌（如新型隱球菌等）③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：此液透明力較強(qiáng)，只限于不透明的標(biāo)本。④生理鹽水：為觀察真菌的出芽現(xiàn)象可用生理鹽水代替氫氧化鉀溶液。

①KOH溶液：②墨汁：③水合氯醛－石炭酸－乳酸封固液：④生理88直接鏡檢的意義

①有診斷意義，如淺部真菌病等；②通過真菌的形態(tài)，可確定某些致病性真菌的屬或種,如假絲酵母菌的厚膜孢子等；

直接鏡檢的局限性：

①陰性結(jié)果不能排除真菌感染；②有假陽性結(jié)果。因此，對直接鏡檢可疑結(jié)果應(yīng)作復(fù)查或用其他檢驗(yàn)方法鑒定。直接鏡檢的意義直接鏡檢的局限性：892.染色標(biāo)本檢查（1）革蘭染色：各種真菌均染成革蘭陽性。（2）乳酸酚棉藍(lán)染色（3）糖原染色：

又稱過碘Schiff（簡稱PAS或PASH）。真菌細(xì)胞壁由纖維素和幾丁質(zhì)組成，含有多糖。過碘酸使糖氧化成醛，再與品紅－亞硫酸結(jié)合，成為紅色，故菌體均染成紅色。為真菌染色最常用的方法之一。2.染色標(biāo)本檢查（2）乳酸酚棉藍(lán)染色（3）糖原染色：90（4）嗜銀染色（GMS）：染成黑色。

（5）粘蛋白卡紅染色法（MCS）：

主要用于新生隱球菌莢膜的染色。隱球菌莢膜和細(xì)胞壁呈紅色，細(xì)胞核呈黑色。（6）熒光染色：

主要使用吖啶橙和氫氧化鉀來染直接涂片、培養(yǎng)涂片及組織切片。（4）嗜銀染色（GMS）：染成黑色。（5）粘蛋白卡紅染色法91（二）培養(yǎng)檢查法1、培養(yǎng)基常用真菌培養(yǎng)基及用途培養(yǎng)基用途沙保培養(yǎng)基真菌的常規(guī)培養(yǎng)放線菌酮－氯霉素瓊脂同上玉米粉聚山梨酯－80瓊脂觀察白假絲酵母菌的厚膜孢子馬鈴薯葡萄糖瓊脂觀察真菌菌落色素，用于鑒別尿素瓊脂用生化反應(yīng)鑒別真菌（紅色癬菌和石膏樣癬菌）心腦浸液葡萄糖血瓊脂深部真菌培養(yǎng)（二相性真菌）（二）培養(yǎng)檢查法1、培養(yǎng)基常用真菌培養(yǎng)基及用途培養(yǎng)基用92

2、培養(yǎng)方法

接種工具為接種鉤、接種針和接種環(huán)

（1）直接培養(yǎng)

（2）試管培養(yǎng)：多用于菌種傳代接種與保存。

（3）大培養(yǎng)：用平皿或培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。

（4）小培養(yǎng)

可觀察結(jié)構(gòu)特征及發(fā)育的全過程。

1）

玻片培養(yǎng)

2）郭可大鋼圈小培養(yǎng)法：

材料：培養(yǎng)基、鋼環(huán)（用鐵環(huán)或廢電線之鋁絲制成）、載玻片、蓋玻片、毛細(xì)管、石蠟等。2、培養(yǎng)方法接種工具為接種鉤、接種針和接種環(huán)93先將無菌鋼圈以熱石蠟固定在玻片和蓋玻片之間，鋼環(huán)開口處深入底部加入培養(yǎng)基。加夠半環(huán)即可凝固。用接種針取少量材料，接種在培養(yǎng)基表面。將接種好的玻片，放在平皿內(nèi)，并放濕紗布以防干燥。逐日鏡

檢，一般約7ｄ即可長好。根據(jù)菌絲和孢子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行真菌類別的鑒定。真菌培養(yǎng)是目前鑒定真菌的唯一方法。培養(yǎng)真菌的溫度為28℃，但深部真菌為37℃。菌落是鑒別真菌的方法。先將無菌鋼圈以熱石蠟固定在玻片和蓋玻片之間，鋼環(huán)開口94