2細(xì)胞化學(xué)染色-課件

臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗

第四章

造血檢驗的基本方法

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系陳萬新臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗

第四章造血檢驗的基本方法華中1第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色細(xì)胞化學(xué)（或組織化學(xué)）是在細(xì)胞形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上運用無機(jī)化學(xué)、有機(jī)化學(xué)或生物化學(xué)等技術(shù)研究細(xì)胞在發(fā)育、增殖分化過程中的主要化學(xué)成分的定位、定量及代謝功能狀態(tài)的學(xué)科，是細(xì)胞形態(tài)學(xué)的重要組成部分。第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色細(xì)胞化學(xué)（或組織化學(xué)）是在細(xì)胞形態(tài)學(xué)的2細(xì)胞化學(xué)染色一般包括固定、顯示、復(fù)染等步驟。主要用于：顯示細(xì)胞或組織的酶、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、無機(jī)鹽（如鐵）等化學(xué)成分的含量及分布狀況；研究細(xì)胞組織來源及分化程度；為疾病的診斷、鑒別診斷及治療提供重要的依據(jù)。細(xì)胞化學(xué)染色一般包括固定、顯示、復(fù)染等步驟。3中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）㈠.原理：方法一（偶氮偶聯(lián)法）：在PH9.2~9.8的堿性溶液中，細(xì)胞中的堿性磷酸酶能將底物磷酸萘酚鈉水解，生成a-萘酚和磷酸鈉，再以穩(wěn)定的重氮鹽與萘酚偶聯(lián)生成不溶性有色偶氮染料沉淀，定位于細(xì)胞漿中。

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）㈠.原理：4試劑：1.固定劑：1∶9福爾馬林乙醇液，即40％甲醛溶液（福爾馬林）10ml加無水乙醇90ml混合即得。2.a-磷酸萘酚鈉溶液：100mga-磷酸萘酚鈉溶于100ml0.2mol/L（pH9.1～9.7）Tris緩沖溶液中，混勻后4℃保存。3.Tris緩沖溶液（0.2mol/LpH9.2）：Tris粉（三羥甲基氨基甲烷）2.43g溶于100ml蒸餾水中，加濃鹽酸0.2ml（0.167ml）。4.工作液配制（臨用時現(xiàn)配）：取a-磷酸萘酚鈉溶液1.5ml于試管內(nèi)37oC水溫箱中預(yù)熱5分鐘，加堅固籃BB鹽1.5mg，混勻即可。試劑：1.固定劑：1∶9福爾馬林乙醇液，即40％甲醛溶液（福5染色步驟：

1、干燥涂片（觀察片及陽性對照片），滴加固定劑布滿血膜固定5秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2、滴加作用液室溫下（或37oC）染色15～20分鐘，流水沖洗，待干。3、中性紅溶液復(fù)染3分鐘，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。染色步驟：6計數(shù)方法：按堿性磷酸酶活性強(qiáng)弱，分為5級(0－IV或0－++++)。0級0胞漿呈原色，無顆粒。Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，陽性顆粒占胞漿的25%－50%。Ⅱ級++陽性顆粒約占胞漿面積的50%－75%。III級+++陽性顆粒占胞漿面積的75%－100%。Ⅳ級++++胞漿充滿藍(lán)黑色致密的陽性顆粒，占胞漿面積的l00%，甚至遮蓋胞核。每例的血片，均計數(shù)100個中性粒細(xì)胞（桿狀核及分葉核粒細(xì)胞），求出NAP陽性細(xì)胞的百分比(陽性率)，并按酶活性的強(qiáng)弱不同，求得陽性指數(shù)(積分)。計數(shù)方法：72細(xì)胞化學(xué)染色-課件80級0胞漿呈原色，無顆粒。

Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，細(xì)小藍(lán)黑色顆粒占胞漿面積的25%～50%。

Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，細(xì)小藍(lán)黑色顆粒占胞漿面積的25%～50%。Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50%～75%。0級0胞漿呈原色，無顆粒。Ⅰ級+胞漿呈淺灰色9Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50%－75%。Ⅲ級+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75%－100%。

Ⅲ級+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75%－100%。

Ⅳ級++++胞漿充滿深黑色致密的團(tuán)塊狀沉淀，甚至遮蓋胞核，中到大顆粒占胞漿面積的l00%。

Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積102細(xì)胞化學(xué)染色-課件11注意事項：1.

重氮鹽以堅固籃BB鹽為最佳，其次為堅固籃B鹽及堅固籃RR鹽。2.

也可用新鮮配制的六偶氮副品紅為重氮鹽，配方為：10mla-磷酸萘酚鈉溶液中加六偶氮副品紅50μl，其NAP陽性反應(yīng)呈紅色顆粒狀。六偶氮副品紅：4%副品紅（2N鹽酸）溶液與4%亞硝酸鈉溶液1∶1混合，靜置1min。3.

重氮鹽應(yīng)適量，過量會導(dǎo)致染色失敗，出現(xiàn)假陰性；量不足，則陽性反應(yīng)較弱。4.

工作液配好后應(yīng)立即使用（5min以內(nèi)）。需用感染發(fā)熱病人或正常人外周血涂片作為陽性對照。注意事項：12㈡.正常分布：

陽性反應(yīng)主要見于成熟中性粒細(xì)胞（桿狀及分葉粒細(xì)胞）中，反應(yīng)結(jié)果以陽性率和積分值報告。正常參考值：成人NAP陽性率28.7％（20%－40%），積分32.1（20－80）。㈡.正常分布：13㈢.臨床意義：⒈類白血病反應(yīng)與慢性粒細(xì)胞白血病的鑒別診斷：前者顯著增高，陽性率常達(dá)90%以上，積分常高于200分；后者顯著減低，積分可為0。⒉細(xì)菌性化膿性感染時，積分顯著增高；病毒性感染時多為正?；蛏缘汀＂沉馨图?xì)胞白血病時常增高；單核細(xì)胞白血病時正?；蛟龈?；慢性中性粒細(xì)胞白血病時增高，其它各型粒細(xì)胞白血病時減低；白血病伴感染時增高。⒋真性紅細(xì)胞增多癥、骨髓纖維化、再生障礙性貧血時增高，PNH時常減低。5.某些腫瘤的鑒別診斷，如骨腫瘤、消化道腫瘤的腫瘤細(xì)胞堿性磷酸酶常為較強(qiáng)陽性反應(yīng)。

㈢.臨床意義：142細(xì)胞化學(xué)染色-課件152細(xì)胞化學(xué)染色-課件16酸性磷酸酶染色（ACP）方法一：Gomori硫化鉛法原理：在酸性條件下（pH4.7）酸性磷酸酶能將底物（甘油磷酸鈉）水解，產(chǎn)生－PO43-，與Pb2+作用生成磷酸鉛沉淀，定位于胞漿中酶活性存在處，再與硫化銨作用，生成棕黑色的硫化鉛沉淀。

酸性磷酸酶染色（ACP）方法一：Gomori硫化鉛法17試劑：1.固定劑：40%甲醛溶液（福爾馬林）。2.

工作液配制：蒸餾水37ml0.2mol/LpH4.7醋酸緩沖溶液6ml0.15mol/L（5%）硝酸鉛1ml0.1mol/L（3.2%）β－甘油磷酸鈉2ml3.稀硫化銨溶液（臨用時現(xiàn)配）：取硫化銨水劑0.75ml加蒸餾水至50ml。4.甲基綠溶液：1g甲基綠溶于50ml蒸餾水中。

試劑：18染色步驟：1.

新鮮干燥涂片甲醛蒸氣固定5～10min，流水沖洗5min，待干。2.

入工作液37℃孵育2～3h，流水沖洗數(shù)次。3.

稀硫化銨溶液浸泡2～3min，流水沖洗。4.

甲基綠溶液復(fù)染10min，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈棕黃色至棕黑色定位于胞漿中。

染色步驟：19注意事項：1.

固定劑以甲醛蒸氣為最佳。2.涂片應(yīng)薄而干燥，否則固定后易脫落。3.

此法穩(wěn)定性、重復(fù)性好，染色效果最為理想。注意事項：20正常分布1.巨噬細(xì)胞、部分網(wǎng)狀細(xì)胞呈較強(qiáng)陽性反應(yīng)。2.單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞呈中等強(qiáng)度陽性。3.

粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板為陰性或弱陽性。4.紅細(xì)胞系統(tǒng)、B淋巴細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。5.大多數(shù)組織的細(xì)胞含有酸性磷酸酶，前列腺細(xì)胞中此酶活性最強(qiáng)。正常分布21臨床意義1.

單核細(xì)胞性白血病、真性組織細(xì)胞性淋巴瘤、T細(xì)胞白血病及淋巴瘤、毛細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞均呈較強(qiáng)陽性反應(yīng)。2.高雪細(xì)胞為強(qiáng)陽性；尼曼－匹克細(xì)胞為陰性。3.某些白血病，成熟中性粒細(xì)胞酸性磷酸酶活性增強(qiáng)，可呈弱陽性至中等強(qiáng)度陽性。4.

用于某些腫瘤細(xì)胞的鑒別診斷。臨床意義22蘇丹黑B染色（SBB）原理蘇丹黑B是一種脂溶性染料，能將細(xì)胞內(nèi)的脂類顯示出來，呈棕黑色顆粒狀定位于胞漿中。蘇丹黑B染色（SBB）23試劑1.

固定劑1∶9福爾馬林乙醇液，即40％甲醛溶液（福爾馬林）10ml加無水乙醇90ml混合即得。2.

蘇丹黑B溶液（5g/L）0.5g蘇丹黑B粉劑溶于100ml70%乙醇中，可用1月。試劑24染色步驟1.

涂片用1∶9福爾馬林乙醇液固定5s，流水沖洗，待干。2.

入蘇丹黑B溶液37℃孵育1h，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3.

瑞氏染色液復(fù)染，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷陽性反應(yīng)呈棕黑色顆粒狀定位于胞漿中。染色步驟25注意事項1.

涂片可不固定，直接入蘇丹黑B溶液孵育。2.

蘇丹黑B溶液的溫度升至37℃后開始計時。3.

通常蘇丹黑B溶液使用1月后，染色效果會有所減弱；此時加入1g聚乙烯吡咯啉酮K30（吡咯烷酮）于100ml蘇丹黑B溶液中，可延長使用時間。注意事項26正常分布：1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：粒細(xì)胞系統(tǒng)除早期原始粒細(xì)胞外，下階段細(xì)胞均為陽性反應(yīng)。2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：部分細(xì)胞為弱陽性反應(yīng)，顆粒細(xì)小疏松，彌散分布；部分細(xì)胞可呈陰性反應(yīng)。3.組織細(xì)胞及巨噬細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng)。4.淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞均為陰性反應(yīng)。臨床意義

同髓過氧化物酶染色。

正常分布：27髓過氧化物酶染色

（MPO或POX）方法一

Washurn聯(lián)苯胺法原理：當(dāng)細(xì)胞中存在具有活性的髓過氧化物酶時，能分解底物H2O2釋放新生態(tài)氧，將聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，后者與亞硝基鐵氫化鈉形成穩(wěn)定的藍(lán)色顆粒定位于胞漿中。

髓過氧化物酶染色

（MPO或POX）28試劑：1.

聯(lián)苯胺溶液0.3g聯(lián)苯胺溶于99ml88%～95%的乙醇溶液中，加360g/L亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液1ml，儲存于棕色瓶中，可保存8個月。2.

稀雙氧水（新鮮配制）50ml蒸餾水中加30%H2O250μl。3.

瑞氏－姬姆薩染色液瑞氏粉1g、姬姆薩粉0.5g、甘油10ml溶于500ml甲醇中。試劑：29染色步驟1、

干燥涂片，滴加聯(lián)苯胺溶液1ml布滿血膜作用1分鐘，保留。2、

加等量稀雙氧水，混勻，染色4～5分鐘，流水充分沖洗。3、瑞氏－姬姆薩染色液復(fù)染5～10分鐘，流水沖洗，待干后鏡檢。結(jié)果判斷

陽性反應(yīng)呈棕黑色至藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。染色步驟302細(xì)胞化學(xué)染色-課件31注意事項

1.

稀雙氧水易失效，最好臨用時現(xiàn)配，一次配制的稀H2O2最多能用1～2周。若發(fā)現(xiàn)成熟粒細(xì)胞MPO反應(yīng)較弱或呈陰性、或染色時血膜上不產(chǎn)生氣泡，則表明稀H2O2可能失效，需重新配制。2.

稀H2O2的最適濃度為0.05mol/L,濃度過高，會抑制MPO的活性。若涂片中成熟紅細(xì)胞呈棕色或藍(lán)綠色顆粒狀陽性反應(yīng)，而成熟中性粒細(xì)胞陽性較弱或無陽性顆粒，則表明H2O2過濃。3.

陽性細(xì)胞較多的增生極度活躍的骨髓涂片，部分細(xì)胞的MPO陽性顆?？沙首攸S色。4.

Washurn聯(lián)苯胺法不必預(yù)先固定血膜；預(yù)先固定了的血膜應(yīng)盡快做MPO染色，超過48h酶的活性會顯著降低或消失。5.

復(fù)染也可用瑞氏染液、姬姆薩染液或中性紅溶液等。注意事項32髓過氧化物酶染色

（MPO或POX）方法二

氧化亞甲藍(lán)－碘化鉀法原理：細(xì)胞中的過氧化物酶作用于染料（氧化亞甲藍(lán)）中的過氧化鍵產(chǎn)生新生態(tài)氧，后者與KI作用產(chǎn)生碘，碘與亞甲藍(lán)等顯色劑中的有效成分結(jié)合形成有色顆粒定位于胞漿中。髓過氧化物酶染色

（MPO或POX）方法二氧化亞甲藍(lán)－碘33試劑：

1.固定劑：1∶9甲醛乙醇液，即40%甲醛溶液10ml加無水乙醇90ml混合即得。2.磷酸鹽緩沖溶液：0.067mol/LpH5.8。3.KI溶液：500mg碘化鉀溶于50ml蒸餾水中。4.氧化MB溶液：500mg亞甲藍(lán)（Methyleneblue）溶于100ml50%甲醇中，待完全溶解后，加30%H2O250μl。5工作液（臨用時現(xiàn)配）：取磷酸鹽緩沖溶液1ml，加KI溶液150μl、氧化亞甲藍(lán)溶液300μl（邊滴邊搖），2小時內(nèi)使用。

試劑：34染色步驟：1干燥的骨髓涂片或外周血涂片，滴加固定劑布滿血膜固定30~60s，流水沖洗，晾干或濾紙吸干。2滴加工作液于涂片上，染色40~60s后傾去（不用水沖洗），濾紙吸干，鏡檢。結(jié)果判斷：本法MPO陽性產(chǎn)物呈棕色至棕黑色顆粒狀定位于胞漿中；

染色步驟：352細(xì)胞化學(xué)染色-課件362細(xì)胞化學(xué)染色-課件37注意事項1.

氧化MB-KI法，使其一步到位達(dá)到最佳氧化成熟程度，以后每次配制MPO染色工作液時不必加H2O2。2.

固定劑可用1∶9甲醛甲醇液或4∶3甲醇乙醇液。3.

本法在顯示MPO的同時，細(xì)胞核能被染成淺紅色，可不需另外復(fù)染細(xì)胞核。4.

若出現(xiàn)因細(xì)胞太多，MPO反應(yīng)較弱或著色不理想，可用工作液對涂片進(jìn)行再次染色，以增強(qiáng)染色效果。KI的量對MPO的反應(yīng)強(qiáng)度也有一定的調(diào)節(jié)作用。5.碘化鉀法MPO染色陽性顆粒易溶于水，應(yīng)避免用水沖洗。

注意事項38正常分布：1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：中性粒細(xì)胞除早期原始粒細(xì)胞外，下階段細(xì)胞均為陽性反應(yīng)；嗜酸性粒細(xì)胞反應(yīng)最快，著色最強(qiáng)；嗜堿性粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)。2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：部分細(xì)胞為弱陽性反應(yīng)，顆粒細(xì)小疏松，彌散分布；部分細(xì)胞可呈陰性反應(yīng)。3.組織細(xì)胞及巨噬細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng)。4.淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞均為陰性反應(yīng)。正常分布：392細(xì)胞化學(xué)染色-課件402細(xì)胞化學(xué)染色-課件41臨床意義：⒈用于急性白血病的類型鑒別：⑴.急性粒細(xì)胞白血病較分化的原始粒細(xì)胞為陽性，Auer小體為陽性。⑵.急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞為陰性或弱陽性。⑶.急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞為陰性。⒉用于Chediak-Higashi綜合征等疾病的診斷及鑒別診斷。臨床意義：422細(xì)胞化學(xué)染色-課件432細(xì)胞化學(xué)染色-課件442細(xì)胞化學(xué)染色-課件452細(xì)胞化學(xué)染色-課件46氯醋酸AS-D奈酚酯酶染色（CE）原理：氯醋酸AS-D萘酯能被酯酶水解生成AS-D萘酚，再與穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性的藍(lán)色沉淀定位于細(xì)胞漿中。陽性反應(yīng)通常僅出現(xiàn)于粒細(xì)胞中，故又稱特異性酯酶染色。氯醋酸AS-D奈酚酯酶染色（CE）原理：47試劑1.固定劑：緩沖甲醛丙酮溶液①0.076mol/LNa2HPO411.25ml②0.076mol/LKH2PO418.75ml③丙酮45ml④40%甲醛25ml，混合。2.磷酸鹽緩沖液：M/15Na2HPO485mlM/15KH2PO415ml混合。試劑483.工作液配制：①PBS0.95ml②0.2%氯醋酸AS-D萘酯50ul

（N，N－二甲基甲酰胺）③堅固籃BB1mg，混勻。3.工作液配制：49染色步驟：1、干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定5秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2、滴加工作液室溫下染色15～20分鐘，流水沖洗，待干。3、10g/L藏紅花紅或中性紅溶液復(fù)染1分鐘，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。

染色步驟：502細(xì)胞化學(xué)染色-課件512細(xì)胞化學(xué)染色-課件52注意事項1.

氯醋酸AS-D萘酯溶液應(yīng)避光、保存于4℃冰箱。2.

氯醋酸AS-D萘酯溶液變黃及混濁則失效。3.

重氮鹽以堅固籃BB最佳，也可用堅固籃B、堅固籃RR鹽。注意事項53正常分布：1.粒細(xì)胞系統(tǒng)除早期的原始粒細(xì)胞外，均為陽性反應(yīng)；2.其它各系細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。臨床意義：主要用于急性白血病的鑒別診斷。⒈急性粒細(xì)胞白血病時，白血病細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng)。2.急性粒-單核細(xì)胞白血病時，部分白血病細(xì)胞呈陽性反應(yīng)（粒細(xì)胞成分）。3.其它類型白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。4.其它少數(shù)（實體瘤）腫瘤細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng)。正常分布：臨床意義：主要用于急性白血病的鑒別診斷。542細(xì)胞化學(xué)染色-課件552細(xì)胞化學(xué)染色-課件562細(xì)胞化學(xué)染色-課件572細(xì)胞化學(xué)染色-課件582細(xì)胞化學(xué)染色-課件592細(xì)胞化學(xué)染色-課件602細(xì)胞化學(xué)染色-課件612細(xì)胞化學(xué)染色-課件62酸性非特異性酯酶染色（ANAE）㈠原理鹽酸副品紅與亞硝酸鈉反應(yīng)生成六偶氮副品紅（重氮鹽），底物a-醋酸萘酯在酯酶的作用下分解為a-萘酚，a-萘酚與六偶氮副品紅結(jié)合生成棕紅色沉淀，定位于胞漿中。酸性非特異性酯酶染色（ANAE）63工作液配制：40g/L副品紅溶液（2NHCL）0.1ml、40g/L亞硝酸鈉溶液0.1ml，混勻，靜置1分鐘，磷酸鹽緩沖溶液3.0ml,α－醋酸萘酯溶液0.1ml［乙二醇（單）甲醚］混勻，置2分鐘備用。工作液配制：64染色步驟：1、干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定1秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2、滴加工作液布滿血膜室溫下（或37oC）30分鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3、10g/L甲基綠溶液復(fù)染15～30秒鐘或0.1%孔雀綠溶液復(fù)染2秒鐘，流水沖洗，待干后鏡檢。染色步驟：65結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色，定位于細(xì)胞漿中。①點樣型：主要見于成熟T淋巴細(xì)胞，陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色1～4個圓形、團(tuán)塊、邊界清楚的大點狀顆粒定位于胞漿中。②彌散型：陽性反應(yīng)呈棕紅色塵粒狀，彌散分布，可位于細(xì)胞漿的某一局部，邊界不清。③單核細(xì)胞型：陽性反應(yīng)為均勻棕紅色彌漫性遍布整個細(xì)胞漿。

結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色，定位于細(xì)胞漿中。662細(xì)胞化學(xué)染色-課件67注意事項1.工作液的pH值為5.8，小鼠為6.4，可用冰醋酸調(diào)pH值。2.涂片可不固定而直接加工作液做ANAE染色，陽性反應(yīng)強(qiáng)于固定者；37℃時陽性反應(yīng)強(qiáng)于室溫。3.

磷酸鹽緩沖液的pH值約為7.53，用其配制工作液時不必用冰醋酸調(diào)pH值。4.

Na2HPO4、KH2PO4的稱量應(yīng)準(zhǔn)確，特別是有些試劑含有結(jié)晶水，計算時要注意。5.

做NaF抑制試驗時，NaF的用量為每ml工作液中加NaF1.5mg。注意事項68正常分布：1.單核細(xì)胞系統(tǒng)：呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，其反應(yīng)可被氟化鈉抑制。2.粒細(xì)胞系統(tǒng)：各期粒細(xì)胞多呈陰性反應(yīng)，有時少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng)，其反應(yīng)不被氟化鈉抑制。3.巨核細(xì)胞及血小板為陽性。4.成熟T淋巴細(xì)胞呈點狀陽性，B淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞為陰性反應(yīng)。5.單核細(xì)胞源性的組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，高雪氏細(xì)胞、海藍(lán)組織細(xì)胞為陽性。6.有核紅細(xì)胞常呈陰性反應(yīng)，部分病例的有核紅細(xì)胞可呈弱至中等強(qiáng)度的陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。正常分布：69臨床意義⒈主要用于急性白血病的鑒別診斷：⑴.急性單核細(xì)胞白血病的原始單核細(xì)胞至成熟單核細(xì)胞大多呈陽性反應(yīng)，其反應(yīng)能被NaF抑制。⑵.急性粒細(xì)胞白血病時，其白血病細(xì)胞為陰性（M3除外）；有時少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽性，其反應(yīng)不被NaF抑制。⑶.急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3）時，白血病細(xì)胞可呈中度至弱的陽性。⑷.急性粒-單核細(xì)胞白血病時，部分細(xì)胞（單核細(xì)胞成分）為陽性反應(yīng)。⑸.急性T淋巴細(xì)胞白血病時，白血病細(xì)胞可呈陽性；B淋巴細(xì)胞白血病則為陰性。⑹.急性巨核細(xì)胞白血病時，可呈陽性。臨床意義702細(xì)胞化學(xué)染色-課件712細(xì)胞化學(xué)染色-課件722細(xì)胞化學(xué)染色-課件732細(xì)胞化學(xué)染色-課件742細(xì)胞化學(xué)染色-課件752細(xì)胞化學(xué)染色-課件762細(xì)胞化學(xué)染色-課件77⒉可用于惡性腫瘤的鑒別診斷：⑴.癌細(xì)胞多為強(qiáng)陽性，肉瘤細(xì)胞多為陰性或弱陽性。特別是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌為陽性，而淋巴瘤細(xì)胞為陰性。⑵.單核-巨噬細(xì)胞源性的真性組織細(xì)胞型淋巴瘤(組織細(xì)胞肉瘤)細(xì)胞為陽性。⒉可用于惡性腫瘤的鑒別診斷：78ANAE－CE酯酶雙染色原理、試劑：見ANAE及CE。染色步驟1.

干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定1秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2.

滴加ANAE染色工作液布滿血膜室溫下（或37oC）30分鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3.

滴加CE染色工作液室溫下染色15～20分鐘，流水沖洗，待干。結(jié)果判斷

ANAE陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色，定位于細(xì)胞漿中。CE陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。酯酶雙染陽性為同一細(xì)胞的胞漿中見上述兩種陽性反應(yīng)。ANAE－CE酯酶雙染色原理、試劑：見ANAE及CE。79臨床意義1.

急性單核細(xì)胞白血病的白血病細(xì)胞ANAE呈陽性反應(yīng)；CE呈陰性反應(yīng)。2.

急性粒細(xì)胞白血病的白血病細(xì)胞ANAE呈陰性反應(yīng)（M3除外）；CE可呈不同程度的陽性反應(yīng)。3.

急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3）的白血病細(xì)胞可為ANAE－CE酯酶雙染陽性反應(yīng)。4.

急性粒-單核細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞成分ANAE為陽性反應(yīng)；粒細(xì)胞成分CE為陽性反應(yīng)；其中M4C的白血病細(xì)胞ANAE－CE酯酶雙染陽性反應(yīng)。臨床意義80α－丁酸萘酯酶染色（NBE）原理在堿性條件下，a-丁酸萘酚被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解，產(chǎn)生a-萘酚，與重氮鹽偶聯(lián)生成不溶性有色沉淀，定位于胞漿中。α－丁酸萘酯酶染色（NBE）81試劑1.

固定劑：緩沖甲醛丙酮溶液2.a-丁酸萘酚溶液：a-丁酸萘酚500mg溶于25ml乙二醇－甲醚中。3.

磷酸鹽緩沖液：0.1mol/L,pH8.0。4.

工作液配制：4%副品紅（2N鹽酸）溶液0.25ml、4%亞硝酸鈉溶液0.25ml，混勻，靜置1分鐘，磷酸鹽緩沖溶液95ml,α－丁酸萘酯（乙二醇－甲醚）溶液5ml，混勻，過濾后均分于兩個染色缸中，其中一缸加氟化鈉75mg。試劑82染色步驟：1.

干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定30s，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2.

滴加工作液布滿血膜室溫下（或37oC孵育）45min，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3.

10g/L甲基綠溶液復(fù)染5min或0.1%孔雀綠溶液復(fù)染5s，流水沖洗，待干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈紅色或棕紅色，定位于細(xì)胞漿中。染色步驟：83注意事項1.標(biāo)本要新鮮。2.工作液配制后應(yīng)及時應(yīng)用，以免影響染色效果。3.重氮鹽也可用堅固籃BB鹽或固醬紫GBC鹽，以代替六偶氮副品紅。注意事項84正常分布：1.

單核細(xì)胞系統(tǒng)：呈陽性反應(yīng)，其反應(yīng)可被氟化鈉抑制。2.

粒細(xì)胞系統(tǒng)：各階段粒細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。3.

成熟T淋巴細(xì)胞呈點狀陽性，B淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞為陰性反應(yīng)。4.

巨核細(xì)胞及血小板為陰性。5.單核細(xì)胞源性的組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，高雪氏細(xì)胞、海藍(lán)組織細(xì)胞為陽性。正常分布：85臨床意義主要用于急性白血病的鑒別診斷：1.

急性單核細(xì)胞白血病的原始單核細(xì)胞至成熟單核細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，其反應(yīng)能被氟化鈉抑制。2.

急性粒細(xì)胞白血?。∕1、M2）時，其白血病細(xì)胞為陰性。3.

急性早幼粒細(xì)胞白血病（M3）的白血病細(xì)胞為陰性。4.

急性粒-單核細(xì)胞白血病的部分白血病細(xì)胞（單核細(xì)胞成分）為陽性反應(yīng)。5.

急性巨核細(xì)胞白血病，為陰性。臨床意義86糖原染色（PAS）

原理：高碘酸能使細(xì)胞內(nèi)多糖的乙二醇基（-CHOH-CHOH）氧化，形成二醛基（-CHO-CHO）。醛基與雪夫氏（schiff）試劑中的無色品紅結(jié)合生成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞漿中。反應(yīng)的強(qiáng)弱程度與細(xì)胞內(nèi)參與反應(yīng)的乙二醇基的量成正比。糖原染色（PAS）原理：高碘酸能使細(xì)胞內(nèi)多糖的乙二醇基（-87試劑1.

固定劑：1∶9福爾馬林乙醇液，即40％甲醛溶液（福爾馬林）10ml加無水乙醇90ml混合即得。2.

schiff試劑：堿性品紅（中國品紅）1g溶于200ml沸水中；當(dāng)冷卻至55℃～50℃時，加20ml1N鹽酸；冷卻至30℃～25℃時，加入亞硫酸鈉2g，塞緊瓶口過夜；次日，溶液應(yīng)為無色透明，否則，應(yīng)加入300mg活性炭振搖均勻，過慮后，塞緊瓶口，保存于冰箱中。溶液變紅則失效。試劑881.

染色步驟：1、干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定15秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2、滴加高碘酸溶液1.0ml作用10－15分鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3、滴加Schiff溶液1.0ml作用30分鐘，流水沖洗5分鐘。4、20g/L甲基綠溶液復(fù)染15分鐘或0.1%孔雀綠溶液復(fù)染2秒鐘，流水沖洗，干后鏡檢。1.

染色步驟：89結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈紅色至紫紅色顆粒狀或塊狀，定位于細(xì)胞漿中。有核紅細(xì)胞陽性程度可分為5級：0：胞漿中無彌漫型紅色物質(zhì)或紅色顆粒；+：胞漿呈淺紅色或有少量細(xì)小紅色顆粒；++：胞漿內(nèi)見1～10粒中等大小的紅色顆粒；+++：胞漿內(nèi)見11～20粒較粗大的紅色顆粒；++++：胞漿內(nèi)見20粒以上紅色顆粒，粗大而致密，著色較深，可溶合成塊狀。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈紅色至紫紅色顆粒狀或塊狀，定位于細(xì)胞漿中902細(xì)胞化學(xué)染色-課件91注意事項：1.

固定劑以95%乙醇為首選，用10%甲醛甲醇溶液或10%甲醛乙醇溶液，效果也很好。2.

保存良好的（已固定或未固定的）陳舊涂片、已做過瑞氏染色的涂片，均可進(jìn)行PAS染色。但做過瑞氏染色的涂片做PAS前，最好先用乙醇脫色。3.

過碘酸粉末易受潮，保存時應(yīng)注意防潮或保存于干燥器中。4.

Schiff溶液應(yīng)密封（塞緊瓶口）、避光保存，或小瓶分裝存放。使用時不要暴露于空氣中過久，否則溶液中的SO2外逸，導(dǎo)致溶液變紅而失效。注意事項：925.

變紅了的Schiff溶液可通入SO2氣體，至紅色消失后再用。但應(yīng)注意，溶液中過量的SO2越少，反應(yīng)越靈敏。6.

某些酮類（如丙酮）、堿類、不飽和化合物或某些能與SO2作用的物質(zhì)，均不宜與Schiff溶液接觸；否則，易發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，使溶液變?yōu)樘壹t色而失效。7.

染色時，Schiff反應(yīng)最好在室溫下進(jìn)行。因為37℃下孵育或水浴時，容易損失SO2而使Schiff溶液失效變紅。8.

PAS染色后的涂片應(yīng)及時鏡檢觀察結(jié)果，放置1W后，陽性反應(yīng)開始逐漸褪色。9.

配制Schiff溶液時堿性品紅可用副品紅替代，亞硫酸鈉可用亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、偏重亞硫酸鈉替代。5.

變紅了的Schiff溶液可通入SO2氣體，至紅色消失后93正常分布：1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：原粒細(xì)胞多為陰性反應(yīng)，早幼粒細(xì)胞至分葉粒細(xì)胞陽性反應(yīng)逐漸增強(qiáng)，呈細(xì)顆粒狀。2.單核細(xì)胞呈弱陽性反應(yīng)，巨噬細(xì)胞呈較強(qiáng)的陽性反應(yīng)。3.淋巴細(xì)胞多呈陰性反應(yīng)，少數(shù)呈弱陽性反應(yīng)。4.幼紅細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。5.巨核細(xì)胞及血小板呈陽性反應(yīng)。6.對PAS呈陽性反應(yīng)的除了糖原外，還有粘多糖、粘蛋白、醣蛋白、醣脂、磷脂及硫酸軟骨素等，對PAS呈陽性反應(yīng)的細(xì)胞組織很多，應(yīng)用非常廣泛。肝、腎、心肌、骨骼肌、腎小管上皮細(xì)胞等富含糖原。

正常分布：942細(xì)胞化學(xué)染色-課件952細(xì)胞化學(xué)染色-課件962細(xì)胞化學(xué)染色-課件972細(xì)胞化學(xué)染色-課件98臨床意義：⒈急性淋巴細(xì)胞白血病的原始及幼稚細(xì)胞常為陽性，陽性物質(zhì)呈粗大顆粒狀或塊狀。⒉急性粒細(xì)胞白血病的原始細(xì)胞多為陰性反應(yīng)，較分化的原始粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞可呈弱陽性，陽性物質(zhì)為紅色細(xì)顆粒狀，均勻分布。⒊急性單核細(xì)胞白血病的原始單核細(xì)胞可呈陽性反應(yīng)，為紅色細(xì)顆粒狀，彌散分布。⒋急性及慢性巨核細(xì)胞白血病的原始及幼稚巨核細(xì)胞、MDS的小巨核細(xì)胞可呈較強(qiáng)的陽性反應(yīng)。⒌紅白血病及某些MDS的幼紅細(xì)胞可呈較強(qiáng)陽性反應(yīng)；巨幼細(xì)胞性貧血及再生障礙性貧血幼紅細(xì)胞為陰性反應(yīng)。⒍高-雪氏細(xì)胞、海藍(lán)組織細(xì)胞為較強(qiáng)的陽性反應(yīng)，尼曼-匹克氏細(xì)胞為陰性至弱陽性反應(yīng)。7.在某些腫瘤細(xì)胞的鑒別診斷中具有廣泛的應(yīng)用，如精原細(xì)胞瘤、軟骨肉瘤、腺癌為強(qiáng)陽性，神經(jīng)母細(xì)胞瘤可呈不同程度的陽性，等。臨床意義：992細(xì)胞化學(xué)染色-課件1002細(xì)胞化學(xué)染色-課件1012細(xì)胞化學(xué)染色-課件1022細(xì)胞化學(xué)染色-課件1032細(xì)胞化學(xué)染色-課件1042細(xì)胞化學(xué)染色-課件1052細(xì)胞化學(xué)染色-課件1062細(xì)胞化學(xué)染色-課件1072細(xì)胞化學(xué)染色-課件1082細(xì)胞化學(xué)染色-課件1092細(xì)胞化學(xué)染色-課件110MPOCEANAEPASALL---粗+/-M0----M1++/--細(xì)+/-M2++/--/弱+細(xì)+M3++++++++細(xì)+M4+++細(xì)+M5+/--+細(xì)+M6++/--/+細(xì)+M7--+粗+MPOCEANAEPASALL---粗+/-M0----M1111鐵染色㈠.

原理：正常骨髓中存在一定量的儲存鐵，以含鐵血黃素的形式儲存于組織巨噬細(xì)胞中，可供有核紅細(xì)胞利用合成血紅蛋白。這種存在于紅細(xì)胞以外的儲存鐵稱為細(xì)胞外鐵；部分中、晚幼紅細(xì)胞及少數(shù)成熟紅細(xì)胞也含有鐵顆粒，分別稱為鐵粒幼紅細(xì)胞及鐵粒紅細(xì)胞，它們屬于細(xì)胞內(nèi)鐵。酸性亞鐵氫化鉀能與細(xì)胞內(nèi)、外鐵發(fā)生普魯士藍(lán)反應(yīng)，形成藍(lán)色的亞鐵氫化鐵沉淀，定位于細(xì)胞漿中。鐵染色㈠.

原理：112試劑工作液配制：取濃鹽酸0.25ml于試管中，緩慢滴加200g/L亞鐵氰化鉀溶液1.25ml，邊滴邊搖。反應(yīng)過程由開始生成的白色沉淀至沉淀消失。試劑113染色步驟：

1、干燥涂片，滴加工作液布滿血膜染色30分鐘，流水充分沖洗5分鐘，待干或濾紙吸干。2、10g/L藏紅花紅溶液或中性紅溶液復(fù)染1分鐘，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀或塊狀，定位于細(xì)胞漿中。染色步驟：1141.

細(xì)胞外鐵判斷標(biāo)準(zhǔn)：低倍鏡下于片尾骨髓小粒觀察細(xì)胞外鐵，必要時需油鏡下證實。其陽性程度分為5級。0：全片無細(xì)胞外鐵的藍(lán)色陽性反應(yīng)及顆粒。+：見少量鐵顆?；蚺家娚僭S鐵小珠。++：見較多鐵顆粒和鐵小珠。+++：見很多鐵顆粒、鐵小珠和少量鐵小塊。++++：見極多鐵顆粒、鐵小珠和很多密集成堆的鐵小塊。

1.

細(xì)胞外鐵判斷標(biāo)準(zhǔn)：1152細(xì)胞化學(xué)染色-課件1162細(xì)胞化學(xué)染色-課件1172.細(xì)胞內(nèi)鐵判斷標(biāo)準(zhǔn)：油鏡計數(shù)100個中幼紅及晚幼紅細(xì)胞內(nèi)鐵陽性程度。陽性程度分為5級：0：細(xì)胞漿內(nèi)無鐵顆粒。+：細(xì)胞漿內(nèi)含1個鐵顆粒。++：細(xì)胞漿內(nèi)含2～5個鐵顆粒。+++：細(xì)胞漿內(nèi)含6～9個鐵顆粒。++++：細(xì)胞漿內(nèi)含10個以上鐵顆粒。環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞：含6個以上鐵顆粒，且2/3以上的鐵顆粒圍繞細(xì)胞核周圍排列成完全或不完全的環(huán)形（1/2以上的核周有鐵粒環(huán)繞）。2.細(xì)胞內(nèi)鐵判斷標(biāo)準(zhǔn)：1182細(xì)胞化學(xué)染色-課件1192細(xì)胞化學(xué)染色-課件120注意事項：1.

所用玻片及器具應(yīng)潔凈、無鐵污染。2.

亞鐵氰化鉀暴露于空氣或見光易變質(zhì)，應(yīng)密閉、儲存于棕色瓶中。3.

所用鹽酸純度要高，不能含鐵質(zhì)。4.

應(yīng)選擇骨髓小粒較多的骨髓涂片做鐵染色，同一涂片上既觀察細(xì)胞外鐵也觀察細(xì)胞內(nèi)鐵。5.

已做過瑞氏染色（著色好、無沉渣）的涂片，也可做鐵染色，且不需復(fù)染。6.

復(fù)染前，涂片應(yīng)充分沖洗，否則會產(chǎn)生較多針狀結(jié)晶體。注意事項：121㈠.

正常分布（參考值）：1.

骨髓細(xì)胞外鐵+～++。2.

骨髓細(xì)胞內(nèi)鐵：中晚幼紅細(xì)胞陽性率19%～44%，顆粒10粒以下，無環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞。㈠.

正常分布（參考值）：122臨床意義：⒈缺鐵性貧血時，骨髓細(xì)胞外鐵明顯減少，甚至消失；鐵粒幼紅細(xì)胞的百分率減低，常小于0.16，嚴(yán)重時小于0.10，鐵粒5粒以下。⒉鐵粒幼細(xì)胞性貧血時，鐵粒幼紅細(xì)胞高于0.40，可達(dá)0.70以上，鐵顆粒數(shù)目增多，顆粒粗大，可見環(huán)形鐵粒幼紅細(xì)胞，細(xì)胞外鐵多為“++”，可達(dá)“+++~++++”。⒊MDS-RAS時，鐵粒幼細(xì)胞百分率增高，鐵粒數(shù)目增多，環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞大于0.15。⒋溶血性貧血及多次輸血的病人細(xì)胞外鐵可明顯增多。5.痰涂片或胃液離心涂片做鐵染色，用以鑒別含鐵血黃素細(xì)胞，對于診斷慢性肺淤血（心衰細(xì)胞）、幼兒特發(fā)性肺含鐵血黃素沉著癥具有重要意義。6.用于證實某些腫瘤內(nèi)的陳舊性出血，通常認(rèn)為出血24h后，即可有含鐵血黃素細(xì)胞出現(xiàn)。臨床意義：1232細(xì)胞化學(xué)染色-課件1242細(xì)胞化學(xué)染色-課件1252細(xì)胞化學(xué)染色-課件1262細(xì)胞化學(xué)染色-課件1272細(xì)胞化學(xué)染色-課件1282細(xì)胞化學(xué)染色-課件129臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗

第四章

造血檢驗的基本方法

華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗系陳萬新臨床血液學(xué)和血液學(xué)檢驗

第四章造血檢驗的基本方法華中130第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色細(xì)胞化學(xué)（或組織化學(xué)）是在細(xì)胞形態(tài)學(xué)的基礎(chǔ)上運用無機(jī)化學(xué)、有機(jī)化學(xué)或生物化學(xué)等技術(shù)研究細(xì)胞在發(fā)育、增殖分化過程中的主要化學(xué)成分的定位、定量及代謝功能狀態(tài)的學(xué)科，是細(xì)胞形態(tài)學(xué)的重要組成部分。第二節(jié)細(xì)胞化學(xué)染色細(xì)胞化學(xué)（或組織化學(xué)）是在細(xì)胞形態(tài)學(xué)的131細(xì)胞化學(xué)染色一般包括固定、顯示、復(fù)染等步驟。主要用于：顯示細(xì)胞或組織的酶、蛋白質(zhì)、糖類、脂類、無機(jī)鹽（如鐵）等化學(xué)成分的含量及分布狀況；研究細(xì)胞組織來源及分化程度；為疾病的診斷、鑒別診斷及治療提供重要的依據(jù)。細(xì)胞化學(xué)染色一般包括固定、顯示、復(fù)染等步驟。132中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）㈠.原理：方法一（偶氮偶聯(lián)法）：在PH9.2~9.8的堿性溶液中，細(xì)胞中的堿性磷酸酶能將底物磷酸萘酚鈉水解，生成a-萘酚和磷酸鈉，再以穩(wěn)定的重氮鹽與萘酚偶聯(lián)生成不溶性有色偶氮染料沉淀，定位于細(xì)胞漿中。

中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色（NAP）㈠.原理：133試劑：1.固定劑：1∶9福爾馬林乙醇液，即40％甲醛溶液（福爾馬林）10ml加無水乙醇90ml混合即得。2.a-磷酸萘酚鈉溶液：100mga-磷酸萘酚鈉溶于100ml0.2mol/L（pH9.1～9.7）Tris緩沖溶液中，混勻后4℃保存。3.Tris緩沖溶液（0.2mol/LpH9.2）：Tris粉（三羥甲基氨基甲烷）2.43g溶于100ml蒸餾水中，加濃鹽酸0.2ml（0.167ml）。4.工作液配制（臨用時現(xiàn)配）：取a-磷酸萘酚鈉溶液1.5ml于試管內(nèi)37oC水溫箱中預(yù)熱5分鐘，加堅固籃BB鹽1.5mg，混勻即可。試劑：1.固定劑：1∶9福爾馬林乙醇液，即40％甲醛溶液（福134染色步驟：

1、干燥涂片（觀察片及陽性對照片），滴加固定劑布滿血膜固定5秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2、滴加作用液室溫下（或37oC）染色15～20分鐘，流水沖洗，待干。3、中性紅溶液復(fù)染3分鐘，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。染色步驟：135計數(shù)方法：按堿性磷酸酶活性強(qiáng)弱，分為5級(0－IV或0－++++)。0級0胞漿呈原色，無顆粒。Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，陽性顆粒占胞漿的25%－50%。Ⅱ級++陽性顆粒約占胞漿面積的50%－75%。III級+++陽性顆粒占胞漿面積的75%－100%。Ⅳ級++++胞漿充滿藍(lán)黑色致密的陽性顆粒，占胞漿面積的l00%，甚至遮蓋胞核。每例的血片，均計數(shù)100個中性粒細(xì)胞（桿狀核及分葉核粒細(xì)胞），求出NAP陽性細(xì)胞的百分比(陽性率)，并按酶活性的強(qiáng)弱不同，求得陽性指數(shù)(積分)。計數(shù)方法：1362細(xì)胞化學(xué)染色-課件1370級0胞漿呈原色，無顆粒。

Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，細(xì)小藍(lán)黑色顆粒占胞漿面積的25%～50%。

Ⅰ級+胞漿呈淺灰色，細(xì)小藍(lán)黑色顆粒占胞漿面積的25%～50%。Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50%～75%。0級0胞漿呈原色，無顆粒。Ⅰ級+胞漿呈淺灰色138Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積的50%－75%。Ⅲ級+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75%－100%。

Ⅲ級+++胞漿充滿棕黑色沉淀，分布均勻，中到大顆粒占胞漿面積的75%－100%。

Ⅳ級++++胞漿充滿深黑色致密的團(tuán)塊狀沉淀，甚至遮蓋胞核，中到大顆粒占胞漿面積的l00%。

Ⅱ級++胞漿呈棕色片狀沉淀，小到中等顆粒約占胞漿面積1392細(xì)胞化學(xué)染色-課件140注意事項：1.

重氮鹽以堅固籃BB鹽為最佳，其次為堅固籃B鹽及堅固籃RR鹽。2.

也可用新鮮配制的六偶氮副品紅為重氮鹽，配方為：10mla-磷酸萘酚鈉溶液中加六偶氮副品紅50μl，其NAP陽性反應(yīng)呈紅色顆粒狀。六偶氮副品紅：4%副品紅（2N鹽酸）溶液與4%亞硝酸鈉溶液1∶1混合，靜置1min。3.

重氮鹽應(yīng)適量，過量會導(dǎo)致染色失敗，出現(xiàn)假陰性；量不足，則陽性反應(yīng)較弱。4.

工作液配好后應(yīng)立即使用（5min以內(nèi)）。需用感染發(fā)熱病人或正常人外周血涂片作為陽性對照。注意事項：141㈡.正常分布：

陽性反應(yīng)主要見于成熟中性粒細(xì)胞（桿狀及分葉粒細(xì)胞）中，反應(yīng)結(jié)果以陽性率和積分值報告。正常參考值：成人NAP陽性率28.7％（20%－40%），積分32.1（20－80）。㈡.正常分布：142㈢.臨床意義：⒈類白血病反應(yīng)與慢性粒細(xì)胞白血病的鑒別診斷：前者顯著增高，陽性率常達(dá)90%以上，積分常高于200分；后者顯著減低，積分可為0。⒉細(xì)菌性化膿性感染時，積分顯著增高；病毒性感染時多為正?；蛏缘汀＂沉馨图?xì)胞白血病時常增高；單核細(xì)胞白血病時正?；蛟龈撸宦灾行粤＜?xì)胞白血病時增高，其它各型粒細(xì)胞白血病時減低；白血病伴感染時增高。⒋真性紅細(xì)胞增多癥、骨髓纖維化、再生障礙性貧血時增高，PNH時常減低。5.某些腫瘤的鑒別診斷，如骨腫瘤、消化道腫瘤的腫瘤細(xì)胞堿性磷酸酶常為較強(qiáng)陽性反應(yīng)。

㈢.臨床意義：1432細(xì)胞化學(xué)染色-課件1442細(xì)胞化學(xué)染色-課件145酸性磷酸酶染色（ACP）方法一：Gomori硫化鉛法原理：在酸性條件下（pH4.7）酸性磷酸酶能將底物（甘油磷酸鈉）水解，產(chǎn)生－PO43-，與Pb2+作用生成磷酸鉛沉淀，定位于胞漿中酶活性存在處，再與硫化銨作用，生成棕黑色的硫化鉛沉淀。

酸性磷酸酶染色（ACP）方法一：Gomori硫化鉛法146試劑：1.固定劑：40%甲醛溶液（福爾馬林）。2.

工作液配制：蒸餾水37ml0.2mol/LpH4.7醋酸緩沖溶液6ml0.15mol/L（5%）硝酸鉛1ml0.1mol/L（3.2%）β－甘油磷酸鈉2ml3.稀硫化銨溶液（臨用時現(xiàn)配）：取硫化銨水劑0.75ml加蒸餾水至50ml。4.甲基綠溶液：1g甲基綠溶于50ml蒸餾水中。

試劑：147染色步驟：1.

新鮮干燥涂片甲醛蒸氣固定5～10min，流水沖洗5min，待干。2.

入工作液37℃孵育2～3h，流水沖洗數(shù)次。3.

稀硫化銨溶液浸泡2～3min，流水沖洗。4.

甲基綠溶液復(fù)染10min，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈棕黃色至棕黑色定位于胞漿中。

染色步驟：148注意事項：1.

固定劑以甲醛蒸氣為最佳。2.涂片應(yīng)薄而干燥，否則固定后易脫落。3.

此法穩(wěn)定性、重復(fù)性好，染色效果最為理想。注意事項：149正常分布1.巨噬細(xì)胞、部分網(wǎng)狀細(xì)胞呈較強(qiáng)陽性反應(yīng)。2.單核細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞呈中等強(qiáng)度陽性。3.

粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板為陰性或弱陽性。4.紅細(xì)胞系統(tǒng)、B淋巴細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。5.大多數(shù)組織的細(xì)胞含有酸性磷酸酶，前列腺細(xì)胞中此酶活性最強(qiáng)。正常分布150臨床意義1.

單核細(xì)胞性白血病、真性組織細(xì)胞性淋巴瘤、T細(xì)胞白血病及淋巴瘤、毛細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞白血病、漿細(xì)胞瘤、多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞均呈較強(qiáng)陽性反應(yīng)。2.高雪細(xì)胞為強(qiáng)陽性；尼曼－匹克細(xì)胞為陰性。3.某些白血病，成熟中性粒細(xì)胞酸性磷酸酶活性增強(qiáng)，可呈弱陽性至中等強(qiáng)度陽性。4.

用于某些腫瘤細(xì)胞的鑒別診斷。臨床意義151蘇丹黑B染色（SBB）原理蘇丹黑B是一種脂溶性染料，能將細(xì)胞內(nèi)的脂類顯示出來，呈棕黑色顆粒狀定位于胞漿中。蘇丹黑B染色（SBB）152試劑1.

固定劑1∶9福爾馬林乙醇液，即40％甲醛溶液（福爾馬林）10ml加無水乙醇90ml混合即得。2.

蘇丹黑B溶液（5g/L）0.5g蘇丹黑B粉劑溶于100ml70%乙醇中，可用1月。試劑153染色步驟1.

涂片用1∶9福爾馬林乙醇液固定5s，流水沖洗，待干。2.

入蘇丹黑B溶液37℃孵育1h，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3.

瑞氏染色液復(fù)染，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷陽性反應(yīng)呈棕黑色顆粒狀定位于胞漿中。染色步驟154注意事項1.

涂片可不固定，直接入蘇丹黑B溶液孵育。2.

蘇丹黑B溶液的溫度升至37℃后開始計時。3.

通常蘇丹黑B溶液使用1月后，染色效果會有所減弱；此時加入1g聚乙烯吡咯啉酮K30（吡咯烷酮）于100ml蘇丹黑B溶液中，可延長使用時間。注意事項155正常分布：1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：粒細(xì)胞系統(tǒng)除早期原始粒細(xì)胞外，下階段細(xì)胞均為陽性反應(yīng)。2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：部分細(xì)胞為弱陽性反應(yīng)，顆粒細(xì)小疏松，彌散分布；部分細(xì)胞可呈陰性反應(yīng)。3.組織細(xì)胞及巨噬細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng)。4.淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞均為陰性反應(yīng)。臨床意義

同髓過氧化物酶染色。

正常分布：156髓過氧化物酶染色

（MPO或POX）方法一

Washurn聯(lián)苯胺法原理：當(dāng)細(xì)胞中存在具有活性的髓過氧化物酶時，能分解底物H2O2釋放新生態(tài)氧，將聯(lián)苯胺氧化成聯(lián)苯胺藍(lán)，后者與亞硝基鐵氫化鈉形成穩(wěn)定的藍(lán)色顆粒定位于胞漿中。

髓過氧化物酶染色

（MPO或POX）157試劑：1.

聯(lián)苯胺溶液0.3g聯(lián)苯胺溶于99ml88%～95%的乙醇溶液中，加360g/L亞硝基鐵氰化鈉飽和溶液1ml，儲存于棕色瓶中，可保存8個月。2.

稀雙氧水（新鮮配制）50ml蒸餾水中加30%H2O250μl。3.

瑞氏－姬姆薩染色液瑞氏粉1g、姬姆薩粉0.5g、甘油10ml溶于500ml甲醇中。試劑：158染色步驟1、

干燥涂片，滴加聯(lián)苯胺溶液1ml布滿血膜作用1分鐘，保留。2、

加等量稀雙氧水，混勻，染色4～5分鐘，流水充分沖洗。3、瑞氏－姬姆薩染色液復(fù)染5～10分鐘，流水沖洗，待干后鏡檢。結(jié)果判斷

陽性反應(yīng)呈棕黑色至藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。染色步驟1592細(xì)胞化學(xué)染色-課件160注意事項

1.

稀雙氧水易失效，最好臨用時現(xiàn)配，一次配制的稀H2O2最多能用1～2周。若發(fā)現(xiàn)成熟粒細(xì)胞MPO反應(yīng)較弱或呈陰性、或染色時血膜上不產(chǎn)生氣泡，則表明稀H2O2可能失效，需重新配制。2.

稀H2O2的最適濃度為0.05mol/L,濃度過高，會抑制MPO的活性。若涂片中成熟紅細(xì)胞呈棕色或藍(lán)綠色顆粒狀陽性反應(yīng)，而成熟中性粒細(xì)胞陽性較弱或無陽性顆粒，則表明H2O2過濃。3.

陽性細(xì)胞較多的增生極度活躍的骨髓涂片，部分細(xì)胞的MPO陽性顆?？沙首攸S色。4.

Washurn聯(lián)苯胺法不必預(yù)先固定血膜；預(yù)先固定了的血膜應(yīng)盡快做MPO染色，超過48h酶的活性會顯著降低或消失。5.

復(fù)染也可用瑞氏染液、姬姆薩染液或中性紅溶液等。注意事項161髓過氧化物酶染色

（MPO或POX）方法二

氧化亞甲藍(lán)－碘化鉀法原理：細(xì)胞中的過氧化物酶作用于染料（氧化亞甲藍(lán)）中的過氧化鍵產(chǎn)生新生態(tài)氧，后者與KI作用產(chǎn)生碘，碘與亞甲藍(lán)等顯色劑中的有效成分結(jié)合形成有色顆粒定位于胞漿中。髓過氧化物酶染色

（MPO或POX）方法二氧化亞甲藍(lán)－碘162試劑：

1.固定劑：1∶9甲醛乙醇液，即40%甲醛溶液10ml加無水乙醇90ml混合即得。2.磷酸鹽緩沖溶液：0.067mol/LpH5.8。3.KI溶液：500mg碘化鉀溶于50ml蒸餾水中。4.氧化MB溶液：500mg亞甲藍(lán)（Methyleneblue）溶于100ml50%甲醇中，待完全溶解后，加30%H2O250μl。5工作液（臨用時現(xiàn)配）：取磷酸鹽緩沖溶液1ml，加KI溶液150μl、氧化亞甲藍(lán)溶液300μl（邊滴邊搖），2小時內(nèi)使用。

試劑：163染色步驟：1干燥的骨髓涂片或外周血涂片，滴加固定劑布滿血膜固定30~60s，流水沖洗，晾干或濾紙吸干。2滴加工作液于涂片上，染色40~60s后傾去（不用水沖洗），濾紙吸干，鏡檢。結(jié)果判斷：本法MPO陽性產(chǎn)物呈棕色至棕黑色顆粒狀定位于胞漿中；

染色步驟：1642細(xì)胞化學(xué)染色-課件1652細(xì)胞化學(xué)染色-課件166注意事項1.

氧化MB-KI法，使其一步到位達(dá)到最佳氧化成熟程度，以后每次配制MPO染色工作液時不必加H2O2。2.

固定劑可用1∶9甲醛甲醇液或4∶3甲醇乙醇液。3.

本法在顯示MPO的同時，細(xì)胞核能被染成淺紅色，可不需另外復(fù)染細(xì)胞核。4.

若出現(xiàn)因細(xì)胞太多，MPO反應(yīng)較弱或著色不理想，可用工作液對涂片進(jìn)行再次染色，以增強(qiáng)染色效果。KI的量對MPO的反應(yīng)強(qiáng)度也有一定的調(diào)節(jié)作用。5.碘化鉀法MPO染色陽性顆粒易溶于水，應(yīng)避免用水沖洗。

注意事項167正常分布：1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：中性粒細(xì)胞除早期原始粒細(xì)胞外，下階段細(xì)胞均為陽性反應(yīng)；嗜酸性粒細(xì)胞反應(yīng)最快，著色最強(qiáng)；嗜堿性粒細(xì)胞為陰性反應(yīng)。2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：部分細(xì)胞為弱陽性反應(yīng)，顆粒細(xì)小疏松，彌散分布；部分細(xì)胞可呈陰性反應(yīng)。3.組織細(xì)胞及巨噬細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng)。4.淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、紅細(xì)胞、巨核細(xì)胞均為陰性反應(yīng)。正常分布：1682細(xì)胞化學(xué)染色-課件1692細(xì)胞化學(xué)染色-課件170臨床意義：⒈用于急性白血病的類型鑒別：⑴.急性粒細(xì)胞白血病較分化的原始粒細(xì)胞為陽性，Auer小體為陽性。⑵.急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞為陰性或弱陽性。⑶.急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞為陰性。⒉用于Chediak-Higashi綜合征等疾病的診斷及鑒別診斷。臨床意義：1712細(xì)胞化學(xué)染色-課件1722細(xì)胞化學(xué)染色-課件1732細(xì)胞化學(xué)染色-課件1742細(xì)胞化學(xué)染色-課件175氯醋酸AS-D奈酚酯酶染色（CE）原理：氯醋酸AS-D萘酯能被酯酶水解生成AS-D萘酚，再與穩(wěn)定的重氮鹽偶聯(lián)，生成不溶性的藍(lán)色沉淀定位于細(xì)胞漿中。陽性反應(yīng)通常僅出現(xiàn)于粒細(xì)胞中，故又稱特異性酯酶染色。氯醋酸AS-D奈酚酯酶染色（CE）原理：176試劑1.固定劑：緩沖甲醛丙酮溶液①0.076mol/LNa2HPO411.25ml②0.076mol/LKH2PO418.75ml③丙酮45ml④40%甲醛25ml，混合。2.磷酸鹽緩沖液：M/15Na2HPO485mlM/15KH2PO415ml混合。試劑1773.工作液配制：①PBS0.95ml②0.2%氯醋酸AS-D萘酯50ul

（N，N－二甲基甲酰胺）③堅固籃BB1mg，混勻。3.工作液配制：178染色步驟：1、干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定5秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2、滴加工作液室溫下染色15～20分鐘，流水沖洗，待干。3、10g/L藏紅花紅或中性紅溶液復(fù)染1分鐘，流水沖洗，干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。

染色步驟：1792細(xì)胞化學(xué)染色-課件1802細(xì)胞化學(xué)染色-課件181注意事項1.

氯醋酸AS-D萘酯溶液應(yīng)避光、保存于4℃冰箱。2.

氯醋酸AS-D萘酯溶液變黃及混濁則失效。3.

重氮鹽以堅固籃BB最佳，也可用堅固籃B、堅固籃RR鹽。注意事項182正常分布：1.粒細(xì)胞系統(tǒng)除早期的原始粒細(xì)胞外，均為陽性反應(yīng)；2.其它各系細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。臨床意義：主要用于急性白血病的鑒別診斷。⒈急性粒細(xì)胞白血病時，白血病細(xì)胞可呈不同程度的陽性反應(yīng)。2.急性粒-單核細(xì)胞白血病時，部分白血病細(xì)胞呈陽性反應(yīng)（粒細(xì)胞成分）。3.其它類型白血病細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。4.其它少數(shù)（實體瘤）腫瘤細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng)。正常分布：臨床意義：主要用于急性白血病的鑒別診斷。1832細(xì)胞化學(xué)染色-課件1842細(xì)胞化學(xué)染色-課件1852細(xì)胞化學(xué)染色-課件1862細(xì)胞化學(xué)染色-課件1872細(xì)胞化學(xué)染色-課件1882細(xì)胞化學(xué)染色-課件1892細(xì)胞化學(xué)染色-課件1902細(xì)胞化學(xué)染色-課件191酸性非特異性酯酶染色（ANAE）㈠原理鹽酸副品紅與亞硝酸鈉反應(yīng)生成六偶氮副品紅（重氮鹽），底物a-醋酸萘酯在酯酶的作用下分解為a-萘酚，a-萘酚與六偶氮副品紅結(jié)合生成棕紅色沉淀，定位于胞漿中。酸性非特異性酯酶染色（ANAE）192工作液配制：40g/L副品紅溶液（2NHCL）0.1ml、40g/L亞硝酸鈉溶液0.1ml，混勻，靜置1分鐘，磷酸鹽緩沖溶液3.0ml,α－醋酸萘酯溶液0.1ml［乙二醇（單）甲醚］混勻，置2分鐘備用。工作液配制：193染色步驟：1、干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定1秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2、滴加工作液布滿血膜室溫下（或37oC）30分鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3、10g/L甲基綠溶液復(fù)染15～30秒鐘或0.1%孔雀綠溶液復(fù)染2秒鐘，流水沖洗，待干后鏡檢。染色步驟：194結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色，定位于細(xì)胞漿中。①點樣型：主要見于成熟T淋巴細(xì)胞，陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色1～4個圓形、團(tuán)塊、邊界清楚的大點狀顆粒定位于胞漿中。②彌散型：陽性反應(yīng)呈棕紅色塵粒狀，彌散分布，可位于細(xì)胞漿的某一局部，邊界不清。③單核細(xì)胞型：陽性反應(yīng)為均勻棕紅色彌漫性遍布整個細(xì)胞漿。

結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色，定位于細(xì)胞漿中。1952細(xì)胞化學(xué)染色-課件196注意事項1.工作液的pH值為5.8，小鼠為6.4，可用冰醋酸調(diào)pH值。2.涂片可不固定而直接加工作液做ANAE染色，陽性反應(yīng)強(qiáng)于固定者；37℃時陽性反應(yīng)強(qiáng)于室溫。3.

磷酸鹽緩沖液的pH值約為7.53，用其配制工作液時不必用冰醋酸調(diào)pH值。4.

Na2HPO4、KH2PO4的稱量應(yīng)準(zhǔn)確，特別是有些試劑含有結(jié)晶水，計算時要注意。5.

做NaF抑制試驗時，NaF的用量為每ml工作液中加NaF1.5mg。注意事項197正常分布：1.單核細(xì)胞系統(tǒng)：呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，其反應(yīng)可被氟化鈉抑制。2.粒細(xì)胞系統(tǒng)：各期粒細(xì)胞多呈陰性反應(yīng)，有時少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽性反應(yīng)，其反應(yīng)不被氟化鈉抑制。3.巨核細(xì)胞及血小板為陽性。4.成熟T淋巴細(xì)胞呈點狀陽性，B淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞為陰性反應(yīng)。5.單核細(xì)胞源性的組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，高雪氏細(xì)胞、海藍(lán)組織細(xì)胞為陽性。6.有核紅細(xì)胞常呈陰性反應(yīng)，部分病例的有核紅細(xì)胞可呈弱至中等強(qiáng)度的陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。正常分布：198臨床意義⒈主要用于急性白血病的鑒別診斷：⑴.急性單核細(xì)胞白血病的原始單核細(xì)胞至成熟單核細(xì)胞大多呈陽性反應(yīng)，其反應(yīng)能被NaF抑制。⑵.急性粒細(xì)胞白血病時，其白血病細(xì)胞為陰性（M3除外）；有時少數(shù)粒細(xì)胞可呈弱陽性，其反應(yīng)不被NaF抑制。⑶.急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3）時，白血病細(xì)胞可呈中度至弱的陽性。⑷.急性粒-單核細(xì)胞白血病時，部分細(xì)胞（單核細(xì)胞成分）為陽性反應(yīng)。⑸.急性T淋巴細(xì)胞白血病時，白血病細(xì)胞可呈陽性；B淋巴細(xì)胞白血病則為陰性。⑹.急性巨核細(xì)胞白血病時，可呈陽性。臨床意義1992細(xì)胞化學(xué)染色-課件2002細(xì)胞化學(xué)染色-課件2012細(xì)胞化學(xué)染色-課件2022細(xì)胞化學(xué)染色-課件2032細(xì)胞化學(xué)染色-課件2042細(xì)胞化學(xué)染色-課件2052細(xì)胞化學(xué)染色-課件206⒉可用于惡性腫瘤的鑒別診斷：⑴.癌細(xì)胞多為強(qiáng)陽性，肉瘤細(xì)胞多為陰性或弱陽性。特別是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌為陽性，而淋巴瘤細(xì)胞為陰性。⑵.單核-巨噬細(xì)胞源性的真性組織細(xì)胞型淋巴瘤(組織細(xì)胞肉瘤)細(xì)胞為陽性。⒉可用于惡性腫瘤的鑒別診斷：207ANAE－CE酯酶雙染色原理、試劑：見ANAE及CE。染色步驟1.

干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定1秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2.

滴加ANAE染色工作液布滿血膜室溫下（或37oC）30分鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3.

滴加CE染色工作液室溫下染色15～20分鐘，流水沖洗，待干。結(jié)果判斷

ANAE陽性反應(yīng)呈棕色或棕紅色，定位于細(xì)胞漿中。CE陽性反應(yīng)呈藍(lán)黑色顆粒狀，定位于細(xì)胞漿中。酯酶雙染陽性為同一細(xì)胞的胞漿中見上述兩種陽性反應(yīng)。ANAE－CE酯酶雙染色原理、試劑：見ANAE及CE。208臨床意義1.

急性單核細(xì)胞白血病的白血病細(xì)胞ANAE呈陽性反應(yīng)；CE呈陰性反應(yīng)。2.

急性粒細(xì)胞白血病的白血病細(xì)胞ANAE呈陰性反應(yīng)（M3除外）；CE可呈不同程度的陽性反應(yīng)。3.

急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3）的白血病細(xì)胞可為ANAE－CE酯酶雙染陽性反應(yīng)。4.

急性粒-單核細(xì)胞白血病，單核細(xì)胞成分ANAE為陽性反應(yīng)；粒細(xì)胞成分CE為陽性反應(yīng)；其中M4C的白血病細(xì)胞ANAE－CE酯酶雙染陽性反應(yīng)。臨床意義209α－丁酸萘酯酶染色（NBE）原理在堿性條件下，a-丁酸萘酚被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解，產(chǎn)生a-萘酚，與重氮鹽偶聯(lián)生成不溶性有色沉淀，定位于胞漿中。α－丁酸萘酯酶染色（NBE）210試劑1.

固定劑：緩沖甲醛丙酮溶液2.a-丁酸萘酚溶液：a-丁酸萘酚500mg溶于25ml乙二醇－甲醚中。3.

磷酸鹽緩沖液：0.1mol/L,pH8.0。4.

工作液配制：4%副品紅（2N鹽酸）溶液0.25ml、4%亞硝酸鈉溶液0.25ml，混勻，靜置1分鐘，磷酸鹽緩沖溶液95ml,α－丁酸萘酯（乙二醇－甲醚）溶液5ml，混勻，過濾后均分于兩個染色缸中，其中一缸加氟化鈉75mg。試劑211染色步驟：1.

干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定30s，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2.

滴加工作液布滿血膜室溫下（或37oC孵育）45min，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3.

10g/L甲基綠溶液復(fù)染5min或0.1%孔雀綠溶液復(fù)染5s，流水沖洗，待干后鏡檢。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈紅色或棕紅色，定位于細(xì)胞漿中。染色步驟：212注意事項1.標(biāo)本要新鮮。2.工作液配制后應(yīng)及時應(yīng)用，以免影響染色效果。3.重氮鹽也可用堅固籃BB鹽或固醬紫GBC鹽，以代替六偶氮副品紅。注意事項213正常分布：1.

單核細(xì)胞系統(tǒng)：呈陽性反應(yīng)，其反應(yīng)可被氟化鈉抑制。2.

粒細(xì)胞系統(tǒng)：各階段粒細(xì)胞均呈陰性反應(yīng)。3.

成熟T淋巴細(xì)胞呈點狀陽性，B淋巴細(xì)胞及漿細(xì)胞為陰性反應(yīng)。4.

巨核細(xì)胞及血小板為陰性。5.單核細(xì)胞源性的組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，高雪氏細(xì)胞、海藍(lán)組織細(xì)胞為陽性。正常分布：214臨床意義主要用于急性白血病的鑒別診斷：1.

急性單核細(xì)胞白血病的原始單核細(xì)胞至成熟單核細(xì)胞呈陽性反應(yīng)，其反應(yīng)能被氟化鈉抑制。2.

急性粒細(xì)胞白血病（M1、M2）時，其白血病細(xì)胞為陰性。3.

急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3）的白血病細(xì)胞為陰性。4.

急性粒-單核細(xì)胞白血病的部分白血病細(xì)胞（單核細(xì)胞成分）為陽性反應(yīng)。5.

急性巨核細(xì)胞白血病，為陰性。臨床意義215糖原染色（PAS）

原理：高碘酸能使細(xì)胞內(nèi)多糖的乙二醇基（-CHOH-CHOH）氧化，形成二醛基（-CHO-CHO）。醛基與雪夫氏（schiff）試劑中的無色品紅結(jié)合生成紫紅色化合物，定位于細(xì)胞漿中。反應(yīng)的強(qiáng)弱程度與細(xì)胞內(nèi)參與反應(yīng)的乙二醇基的量成正比。糖原染色（PAS）原理：高碘酸能使細(xì)胞內(nèi)多糖的乙二醇基（-216試劑1.

固定劑：1∶9福爾馬林乙醇液，即40％甲醛溶液（福爾馬林）10ml加無水乙醇90ml混合即得。2.

schiff試劑：堿性品紅（中國品紅）1g溶于200ml沸水中；當(dāng)冷卻至55℃～50℃時，加20ml1N鹽酸；冷卻至30℃～25℃時，加入亞硫酸鈉2g，塞緊瓶口過夜；次日，溶液應(yīng)為無色透明，否則，應(yīng)加入300mg活性炭振搖均勻，過慮后，塞緊瓶口，保存于冰箱中。溶液變紅則失效。試劑2171.

染色步驟：1、干燥涂片，滴加固定劑布滿血膜固定15秒鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。2、滴加高碘酸溶液1.0ml作用10－15分鐘，流水沖洗，待干或濾紙吸干。3、滴加Schiff溶液1.0ml作用30分鐘，流水沖洗5分鐘。4、20g/L甲基綠溶液復(fù)染15分鐘或0.1%孔雀綠溶液復(fù)染2秒鐘，流水沖洗，干后鏡檢。1.

染色步驟：218結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈紅色至紫紅色顆粒狀或塊狀，定位于細(xì)胞漿中。有核紅細(xì)胞陽性程度可分為5級：0：胞漿中無彌漫型紅色物質(zhì)或紅色顆粒；+：胞漿呈淺紅色或有少量細(xì)小紅色顆粒；++：胞漿內(nèi)見1～10粒中等大小的紅色顆粒；+++：胞漿內(nèi)見11～20粒較粗大的紅色顆粒；++++：胞漿內(nèi)見20粒以上紅色顆粒，粗大而致密，著色較深，可溶合成塊狀。結(jié)果判斷：陽性反應(yīng)呈紅色至紫紅色顆粒狀或塊狀，定位于細(xì)胞漿中2192細(xì)胞化學(xué)染色-課件220注意事項：1.

固定劑以95%乙醇為首選，用10%甲醛甲醇溶液或10%甲醛乙醇溶液，效果也很好。2.

保存良好的（已固定或未固定的）陳舊涂片、已做過瑞氏染色的涂片，均可進(jìn)行PAS染色。但做過瑞氏染色的涂片做PAS前，最好先用乙醇脫色。3.

過碘酸粉末易受潮，保存時應(yīng)注意防潮或保存于干燥器中。4.

Schiff溶液應(yīng)密封（塞緊瓶口）、避光保存，或小瓶分裝存放。使用時不要暴露于空氣中過久，否則溶液中的SO2外逸，導(dǎo)致溶液變紅而失效。注意事項：2215.

變紅了的Schiff溶液可通入SO2氣體，至紅色消失后再用。但應(yīng)注意，溶液中過量的S