達(dá)安-HBV-DNA定量試劑說(shuō)明書(shū)

HBV-DNAPCR檢測(cè)規(guī)程文件編號(hào):SZGL-C005-00版本：00 修訂次數(shù)：00 末次修（制）訂日期：200308221目的規(guī)范LightCycler熒光PCR檢測(cè)儀檢測(cè)乙型肝炎病毒（HBV-DNA）的檢驗(yàn)工作，指導(dǎo)檢驗(yàn)人員正確進(jìn)行乙肝病毒核酸定量的檢測(cè)，保證檢驗(yàn)結(jié)果的質(zhì)量。2范圍本規(guī)程適用于LightCycler熒光PCR檢測(cè)儀檢測(cè)乙型肝炎病毒（HBV-DNA）3試劑中山大學(xué)達(dá)安基因公司乙肝病毒（HBV）核酸擴(kuò)增熒光檢測(cè)試劑盒4儀器RocheLightCycler熒光PCR檢測(cè)儀高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)微量加樣器（覆蓋1-1000R1）5樣品處理樣品處理按《PCR實(shí)驗(yàn)室標(biāo)本處理規(guī)程》進(jìn)行收集和處理，具體操作見(jiàn)本規(guī)程附錄1和附錄2。6測(cè)定PCR擴(kuò)增打開(kāi)穩(wěn)壓器電源，再打開(kāi)計(jì)算機(jī)電源。打開(kāi)擴(kuò)增儀電源，按儀器操作規(guī)程進(jìn)入擴(kuò)增循環(huán)條件設(shè)定。將循環(huán)條件設(shè)定為：程序循環(huán)溫度保持時(shí)間11次93℃2分鐘240次93℃5秒57℃45秒31次40℃0秒檢查反應(yīng)管是否蓋緊，以免熒光物質(zhì)泄漏污染儀器。將待反應(yīng)的PCR反應(yīng)管放入擴(kuò)增儀中，并根據(jù)實(shí)際情況和儀器操作規(guī)程在程序中定好反應(yīng)孔位置。第1頁(yè)共4頁(yè)HBV-DNAPCR檢測(cè)規(guī)程文件編號(hào):SZGL-C005-00 版本：00 修訂次數(shù)：00 末次修（制）訂日期：20030822關(guān)閉擴(kuò)增儀蓋，按儀器操作規(guī)程開(kāi)始循環(huán)。擴(kuò)增結(jié)束后關(guān)閉擴(kuò)增儀電源，取出PCR反應(yīng)管，密封放入垃圾桶。產(chǎn)物分析條件設(shè)置：反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存檢測(cè)數(shù)據(jù)文件，調(diào)整熒光數(shù)值為 F/F2。點(diǎn)擊Quantification讀取結(jié)果。基線的確定：取3?8個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)。噪聲容限（閾值）：調(diào)節(jié)在陰性質(zhì)控品以上，要求在Step3：Analysis下相關(guān)性r值＜-0.97,接近-1.0。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)：保證陰性質(zhì)控品的Ct值不出現(xiàn)任何數(shù)值（默認(rèn)為40）。最后記錄儀器自動(dòng)分析計(jì)算出的未知標(biāo)本數(shù)值（M）,關(guān)閉計(jì)算機(jī)。7結(jié)果判斷如果Ct值=40,則實(shí)驗(yàn)樣品的UUDNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）＜1X103。如果Ct值＜40,則實(shí)驗(yàn)樣品的UUDNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）=M檢測(cè)樣本中核酸陽(yáng)性時(shí)，按實(shí)際結(jié)果報(bào)告；對(duì)可疑結(jié)果應(yīng)復(fù)查，需要時(shí)與臨床聯(lián)系。8注意事項(xiàng)各標(biāo)本沸水浴時(shí)間誤差不超過(guò)1分鐘。加樣時(shí)每加完一個(gè)要立即蓋上封閉好離心管。9支持性文件9.1《乙型肝炎病毒核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)試劑盒操作說(shuō)明書(shū)》8.2《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》10質(zhì)量記錄第2頁(yè)共4頁(yè)

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