模塊二 菌落總數(shù)的測定

微生物細(xì)胞數(shù)目測定技術(shù)模塊二平板菌落計數(shù)方法平板菌落計數(shù)方法——菌落總數(shù)的測定GB4789.2-2010菌落總數(shù)測定測定意義

通過平板計數(shù)的方法，對被檢樣品在普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上形成的菌落進(jìn)行計數(shù)，所得到的所有嗜中溫的、需氧和兼性厭氧的細(xì)菌菌落總數(shù)，用以判斷食品被細(xì)菌污染的程度。設(shè)備與器材：1、恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃2、恒溫水浴箱：46℃±1℃3、天平4、振蕩器、均質(zhì)器5、滅菌的試管、槍頭、平皿、6、剪子、鑷子、酒精燈、試管架7、菌落計數(shù)器試劑和培養(yǎng)基1、培養(yǎng)基：平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基2、無菌生理鹽水：濃度8.5‰3、酒精：體積分?jǐn)?shù)75%

檢樣做成幾個適當(dāng)倍數(shù)的稀釋液（10倍系列稀釋）選擇2個～3個適宜稀釋度，各以1mL分別加入滅菌平皿每皿內(nèi)加入適量平板計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基菌落計數(shù)報告36℃±1℃

48h±2h稀釋度的制作菌落計數(shù)培養(yǎng)后，取出；肉眼觀察，并記錄下各平板上的菌落數(shù)；計算菌落總數(shù)菌落計數(shù)的記錄1、應(yīng)選取菌落數(shù)在30cfu~300cfu之間、無蔓延菌落生長的平板計數(shù)菌落總數(shù)，每個稀釋度的菌落應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。2、若<30的平板，記錄具體菌落數(shù)；3、若>300的平板，記錄為多不可計；4、若其中一個平板有較大片狀菌落生長時，則不宜采用，而以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數(shù)；5、若片狀菌落不到平板的一半，而其余一半中的菌落分布又很均勻，即可計算半個平板后再乘以2，來代表一個平板菌落數(shù)；6、若平板上出現(xiàn)菌落間無明顯界線的鏈狀生長時，則將每條單鏈作為一個菌落計數(shù)。菌落計數(shù)的報告1、菌落總數(shù)的計算若只有一個稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每g（每mL）的菌落總數(shù)。若有兩個連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，則按下式計算：N：樣品中菌落數(shù)；C：平板（含適宜范圍菌落數(shù)的平板）菌落數(shù)之和；n1：含適宜范圍菌落數(shù)的第一稀釋度（低）平板數(shù)；n2：含適宜范圍菌落數(shù)的第二稀釋度（高）平板數(shù)；d：稀釋因子（第一稀釋度）N=∑C/（n1+0.1n2）d菌落計數(shù)的報告2、若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)都>300，則按稀釋度最高的平板進(jìn)行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以稀釋最高稀釋倍數(shù)計算。3、若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)都<30，則按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。4、若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落數(shù)生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。5、若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)都不在30~300之間，其中一部分<30或>300，則以最接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。菌落計數(shù)的報告（30~300）例次稀釋液及菌落數(shù)菌落總數(shù)（cfu/g或cfu/mL）報告方式（cfu/g或cfu/mL）10-110-210-31000<1×10<102271152702.7×1023多不可計30512305003.1×1044多不可計16420164001.6×1045多不可計29546155001.6×1046多不可計27160150451.5×1047多不可計多不可計3133130003.1×105注意：1、如果高倍稀釋度的平板菌落數(shù)>比低倍稀釋度的平板菌落數(shù)，分析原因：①操作誤差；②樣品中含有防腐劑，稀釋度大的防腐劑濃度低，則細(xì)菌長的多；稀釋度小的防腐劑濃度高，細(xì)菌就長的少。注意：2、如果所有平板上都菌落密布，不要用多不可計報告，而應(yīng)在稀釋度最大的平板上任意數(shù)出其中2個平方厘米中的菌落數(shù)再除2，以求出每平方厘米的平均菌落數(shù)，乘以平皿底面積（63.6cm2），再乘以稀釋度為最終菌落數(shù)作報告。