藻藍(lán)蛋白MicrosoftPowerPoint幻燈片

內(nèi)蒙古科技大學(xué)InnerMongoliaUniversityOfScience&Technology內(nèi)蒙古自治區(qū)生物質(zhì)能源化利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)蒙古科技大學(xué)生物工程與技術(shù)研究所InnerMongoliaKeyLaboratoryofBiomass-EnergyConversionInstituteofBioengineeringandTechnology,IMUST螺旋藻藻藍(lán)蛋白李紅霞導(dǎo)師：蔡祿季祥螺旋藻藻粉藻藍(lán)蛋白螺旋藻:藍(lán)藻門、藍(lán)藻綱、段殖藻屬、顫藻科、螺旋藻屬螺旋藻7個(gè)最螺旋藻在提高免疫、抗輻射、修復(fù)細(xì)胞、抑制腫瘤等方面有著卓越的功效1優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)約含60%-70%，大豆40%，奶粉13%-22%，瘦肉為16%-22%。2藻多糖（抗輻射的有效物質(zhì)）2%-6%，為螺旋藻特有物質(zhì)。3β-胡蘿卜素（可轉(zhuǎn)化為維生素A）含量是胡蘿卜的15倍，在至今發(fā)現(xiàn)的天然食物中含量最高4育粉（維生素E）含量在植物里最高5維生素B12含量在植物中最高6藻藍(lán)蛋白（防止癌癥）含量高達(dá)17%，是植物中之最SOD（超氧化物歧化酶）含量達(dá)2萬-6萬單位研究價(jià)值探索光合作用的原初反應(yīng)作為熒光分子探針應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究作為無毒副作用的天然色素蛋白，取代合成染料應(yīng)用于食品、化妝品以及醫(yī)藥中抗腫瘤活性，可提高免疫機(jī)能，并已應(yīng)用于老年癡呆癥和帕金森癥的治療提取工藝復(fù)雜工業(yè)生產(chǎn)成本高化學(xué)結(jié)構(gòu)需完善光合機(jī)制不明確期待解決的問題藻藍(lán)蛋白提取研究進(jìn)展

鈍頂螺旋藻中藻藍(lán)蛋白的分離純化及特性研究殷鋼劉錚劉飛李琛采用凝膠層析和羥基磷灰石柱層析對人工養(yǎng)殖鈍頂螺旋藻中的藻藍(lán)蛋白進(jìn)行了分離和純化，藻藍(lán)蛋白的紫外、可見吸收光譜表明其最大特征吸收波長為278,360,620nm,得到的藻藍(lán)蛋白經(jīng)等電聚焦顯示為一條帶，其等電點(diǎn)為PH=4.3.

鈍頂螺旋藻藻藍(lán)蛋白提取純化新工藝

李冰張學(xué)成高美華褚現(xiàn)明對鈍頂螺旋藻中藻藍(lán)蛋白的提取和純化方法進(jìn)行了改進(jìn)。用磷酸鹽緩沖液循環(huán)凍融聯(lián)合超聲波破碎法,50%硫酸銨沉淀獲得藻藍(lán)蛋白,提取率達(dá)到13.1%。粗蛋白提取液再經(jīng)過兩次羥基磷灰石柱(HA)層析和sephacrylHR-200凝膠層析對其進(jìn)行純化,純度達(dá)到4.71%。純化后的PC在12%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)中得到兩條帶,分別是α和β兩個(gè)亞基,分子質(zhì)量分別為21.4ku和17.0ku。

高效分離純化藻藍(lán)蛋白新法

廖曉霞，張學(xué)武采用殼聚糖親和沉淀－活性炭吸附－DEAESephadexA－25柱層析三步法分離純化藻藍(lán)蛋白，與傳統(tǒng)方法相比具有成本低、耗時(shí)短、操作便捷等優(yōu)點(diǎn)。殼聚糖和活性炭結(jié)合使用，可使藻藍(lán)蛋白純度(A620/A280)由0.93提高至2.78。通過DEAESephadexA－25葡聚糖凝膠柱層析后，可得到高純度藻藍(lán)蛋白，純度達(dá)4.3。純化后的藻藍(lán)蛋白經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS－PAGE)鑒定，產(chǎn)生分子量分別為165ku和176ku的α,β亞基條帶。吸收光譜和熒光發(fā)射光譜掃描表明所得蛋白在620、643nm分別具有藻藍(lán)蛋白特征吸收峰和熒光發(fā)射峰。

鹽析結(jié)合雙水相萃取法提取純化藻藍(lán)蛋白

劉清新郭衛(wèi)芹王巍杰鹽析法:飽和度35％～75％的硫酸銨沉淀藻藍(lán)蛋白,飽和度10％～30％的硫酸銨去除螺旋藻雜蛋白;雙水相萃取法：由8％PEG4000、16％檸檬酸鈉和4％氯化鉀組成的雙水相系統(tǒng)分離純化鹽析后的藻藍(lán)蛋白。結(jié)果表明:經(jīng)6步不同飽和度硫酸銨鹽析后的藻藍(lán)蛋白純度（A620／A280）為3.1,再經(jīng)雙水相系統(tǒng)分離純化可使藻藍(lán)蛋白純度達(dá)到4.0.采用鹽析結(jié)合雙水相萃取法提取純化螺旋藻中的藻藍(lán)蛋白,可大幅提高藻藍(lán)蛋白的純度,為大規(guī)模生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

鈍頂螺旋藻藻藍(lán)蛋白的穩(wěn)定性試驗(yàn)研究

張厚森馬海樂用凍融的方法制備鈍頂螺旋藻藻藍(lán)蛋白并對純化后的藻藍(lán)蛋白穩(wěn)定性進(jìn)行了初步研究。提取后的粗提液經(jīng)羥基磷灰石柱層析純化后其純度（A261/A280)3:1溫度、酸堿度、乙醇對藻藍(lán)蛋白穩(wěn)定性有較大影響;Nacl、苯甲酸鈉、檸檬酸等食品添加劑對其穩(wěn)定性影響較小。

螺旋藻藻藍(lán)蛋白提取及穩(wěn)定性試驗(yàn)張以芳劉旭川李琦華本研究用氯化鉀溶菌酶法或凍融法破碎螺旋藻細(xì)胞壁,鹽析,提取藻藍(lán)蛋白,并對其理化特性進(jìn)行了測定.表明酶法破壁適應(yīng)于大量藻藍(lán)蛋白制備,凍融法只適應(yīng)于小量制備.提取率為13%左右,提取藻藍(lán)蛋白在40℃以下及pH4.0～8.5之間表現(xiàn)穩(wěn)定,45℃以上有變色現(xiàn)象,熒光性減弱,糖溶液可提高藻藍(lán)蛋白對熱的穩(wěn)定性,光照對藻藍(lán)蛋白影響較小.藻藍(lán)蛋白穩(wěn)定性研究進(jìn)展

鈍頂螺旋藻藻藍(lán)蛋白穩(wěn)定性研究

歐瑜葉瑞玲從鈍頂螺旋藻藻粉中分離純化藻藍(lán)蛋白，對其穩(wěn)定性進(jìn)行全面考察。鈍頂螺旋藻藻藍(lán)蛋白溶液在低于40℃，pH4~8范圍內(nèi)能保持較高的活性，光照、反復(fù)凍融使藻藍(lán)蛋白溶液的穩(wěn)定性明顯下降，0.5mol/L~2mol/L的NaCl起到穩(wěn)定藻藍(lán)蛋白的作用。藻藍(lán)蛋白干粉在60℃、濕度為（75±5）%的條件下，活性不變，且10d后增重不超過5%；4500lx光強(qiáng)使藻藍(lán)蛋白干粉活性顯著降低。因此，長期保存藻藍(lán)蛋白以干粉為宜，在低于60℃的弱光低濕環(huán)境中保存。

鈍頂螺旋藻藻藍(lán)蛋白的富集分離及其穩(wěn)定性研究

劉楊王雪青龐廣昌曹海龍鹽析沉淀法和等電點(diǎn)沉淀法富集分離鈍頂螺旋藻藻藍(lán)蛋白行了分離和純化，藻液比為0.5g/100ml，50%(W/V)(NH4)2SO4進(jìn)行鹽析沉淀，藻藍(lán)蛋白收率可達(dá)60.0mg/g藻粉，分離因數(shù)為1.38。螺旋藻藻藍(lán)蛋白在20℃和30℃時(shí)保持穩(wěn)定，在40℃以上穩(wěn)定性下降。在pH為中性時(shí)，藻藍(lán)蛋白穩(wěn)定性良好，超出此范圍螺旋藻藻藍(lán)蛋白穩(wěn)定性下降。藻藍(lán)蛋白結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展

藻膽蛋白的研究概況(Ⅰ)——藻膽蛋白的種類與組成

王廣策鄧田曾呈奎

一般來說,藻膽蛋白的α亞基與β亞基形成穩(wěn)定的單體(αβ),再由單體聚合為多聚體(αβ)n。從藍(lán)藻和紅藻中分離的藻膽蛋白是三聚體(αβ)3或六聚體(αβ)6。藻膽蛋白在溶液中的狀態(tài)往往與藻膽蛋白的種類、濃度、溶液的pH和離子強(qiáng)度等因素有關(guān)。例如C-藻藍(lán)蛋白在接近其等電點(diǎn)(PI=5-5.5)時(shí),以六聚體(αβ)6為主要的存在形式,而在pH6.8時(shí),則以三聚體為主;在pH為5.4,離子強(qiáng)度為0.2,蛋白質(zhì)濃度為0.6mg/ml時(shí),存在有六聚體與單體間的平衡(αβ)6→6(αβ);在pH為6.8,蛋白濃度較低時(shí),則存在著三聚體與單白質(zhì)濃度很高時(shí),即使是pH,單體間平衡(αβ)33(αβ);而當(dāng)?shù)叭砸粤垠w與單體間的平衡占優(yōu)勢。

藻膽蛋白的研究概況(Ⅰ)——藻膽蛋白的種類與組成

王廣策鄧田曾呈奎

已知的藻膽蛋白主要可以分為4大類,即藻紅蛋白(Phycoerythrin)、藻藍(lán)蛋白(Phycocyanin)、藻紅藍(lán)蛋白(Phcoerycyanin)和異藻藍(lán)蛋白(Allophycocyanin)。根據(jù)來源的不同,每大類又可以分為若干個(gè)小類,每一小類前面分別冠以B、C和R,這些字母是用來表示藻膽蛋白的來源。如果完全按照光譜類型來分類,藻膽蛋白則可以分為6大類,分別是:異藻藍(lán)蛋白B(APB)、異藻藍(lán)蛋白(AP)、藻藍(lán)蛋白(PC)、藻紅藍(lán)蛋白(PEC)、藻紅蛋白Ⅰ(PEⅠ)和藍(lán)藻中含藻尿膽素的藻紅蛋白Ⅱ(PEⅡ)。

螺旋藻藻藍(lán)蛋白的研究進(jìn)展

陳志桃,王立興,林維欽,盧端萍目前的研究認(rèn)為,藻藍(lán)蛋白是由兩個(gè)分子量大小不同的α和β亞基組成,通常為兩個(gè)亞基的六聚體(αβ)6,但目前對于亞基的分子量大小說法不一。張成武等將純化后的藻藍(lán)蛋白通過12%十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS)可見鈍頂螺旋藻的藻藍(lán)蛋白由α和β兩個(gè)亞單位組成并測得它們分子量分別為14500μ和15000μ。張爾賢測得藻藍(lán)蛋白兩個(gè)亞基分子量為14900μ和17200μ。彭衛(wèi)民以標(biāo)準(zhǔn)蛋白的相對遷移率(X)及其對應(yīng)的分子量的對數(shù)(Y)為參數(shù)進(jìn)行回歸分析,所得回歸方程為:Y=1.0228X+5.1255(R2=0.9889),經(jīng)計(jì)算得鈍頂螺旋藻中藻藍(lán)蛋白的α亞基分子量約為16.3KD、β亞基分了量約為18.9KD。

螺旋藻藻膽蛋白研究進(jìn)展(綜述)

彭衛(wèi)民商樹田劉國琴傅友蘭一般認(rèn)為螺旋藻藻膽體內(nèi)只含有兩種藻膽蛋白:藻藍(lán)蛋白和別藻藍(lán)蛋白。螺旋藻藻膽蛋白是由脫輔基蛋白(Apoprotein)通過一個(gè)或兩個(gè)硫醚鍵共價(jià)連接藻藍(lán)素(PCB)一種開鏈四吡咯發(fā)色團(tuán)組成的,連接位點(diǎn)通常在α84和β84等保守位點(diǎn)上。這種連接狀態(tài)對紫外線很敏感。每種藻膽蛋白由等摩爾量的α和β亞基構(gòu)成。在離體條件下,藻膽蛋白有(αβ)、(αβ)2

、(αβ)3

和(αβ)6

等多種聚集態(tài)。一般認(rèn)為,在藻膽體內(nèi),PC以(αβ)3和(αβ)6

存在,APC以(αβ)3存在。聚集態(tài)越高,其捕獲和傳遞光能的能力越強(qiáng)。藻膽蛋白的α和β亞基通過分子間的各種相互作用力(疏水鍵、氫鍵、和離子鍵等)先形成單體(αβ),單體之間再聚合成三聚體(αβ)3PC的六聚體(αβ)6

由兩個(gè)(αβ)3

組成。藻膽蛋白呈圓盤狀迭垛在一起,由PC構(gòu)成藻膽體的“棒”(Rod)亞結(jié)構(gòu),APC構(gòu)成藻膽體的“核”(Core)亞結(jié)構(gòu)?！鞍簟背瘦椛錉钆帕性凇昂恕钡耐庵?圖2)。PC的α亞基含1個(gè)PCB,β亞基含2個(gè)PCB,而APC的每個(gè)亞基中皆只含有1個(gè)PCB。在藻膽蛋白內(nèi),PCB可能呈半環(huán)狀和伸展?fàn)顑煞N構(gòu)象。藻藍(lán)蛋白生理機(jī)制研究進(jìn)展

螺旋藻藻膽蛋白研究進(jìn)展(綜述)

彭衛(wèi)民商樹田劉國琴傅友蘭螺旋藻藻膽蛋白的合成既受基因組的精細(xì)控制,也受環(huán)境因子(包括光、溫、營養(yǎng)等)的宏觀調(diào)節(jié)。普遍認(rèn)為,在螺旋藻中不存在互補(bǔ)光色適應(yīng)現(xiàn)象。如某些藻類在綠光下有利于藻紅蛋白的合成,而在紅光下則有利于PC的合成。一般認(rèn)為只有當(dāng)藍(lán)藻含有PE時(shí)才可能有此現(xiàn)象。但在不同光質(zhì)下,螺旋藻藻膽蛋白的產(chǎn)量是有差異的。除光照外,適宜的溫度、高濃度的CO2、豐富的營養(yǎng)條件等都有利于藻膽蛋白的合成。反之,就有可能不利于藻膽蛋白的合成。藻膽體被認(rèn)為是藍(lán)藻細(xì)胞中主要的N貯藏庫,豐富的N源有利于藻膽蛋白的合成,相反,在N饑餓狀態(tài)下,藻膽蛋白的合成明顯降低甚至停止,嚴(yán)重時(shí)引起藻膽體的瓦解。Mar-quez等(1995)發(fā)現(xiàn),在高溶解氧(1.25mmol/L)濃度時(shí),光合色素(PC、Chla等)的含量都明顯減少。Marquez等(1995)和Chen等(1996)均認(rèn)為兼養(yǎng)培養(yǎng)有利于鈍頂螺旋藻中色素含量的增加。他們用的有機(jī)物是葡萄糖和乙酸鹽,使用的最佳濃度與光強(qiáng)之間有一定的相關(guān)性。藍(lán)藻藻膽體中色彩適配器(《藻類學(xué)》段德麟等譯）在氮源缺乏條件下藻膽體的分解（改編自Grossmanetal.1993)蛋白質(zhì)

作用生物體組成成分、酶、運(yùn)輸、運(yùn)動、抗體、干擾素、遺傳信息的控制等。

結(jié)構(gòu)①氨基酸殘基排列順序②α-螺旋、β-折疊、β-轉(zhuǎn)角、自由回旋、超二級結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域③三級結(jié)構(gòu)④四級結(jié)構(gòu)

性質(zhì)①兩性電離和等電點(diǎn)②膠體性質(zhì)③沉淀反應(yīng)（高濃度鹽類、有機(jī)溶劑、重金屬鹽、酸類）④顏色反應(yīng)（雙縮脲、米倫氏、乙醛酸、坂口、福林試劑）蛋白質(zhì)研究的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)藻液細(xì)胞破碎蛋白質(zhì)抽提蛋白質(zhì)粗分離蛋白質(zhì)純化目的蛋白質(zhì)鑒定蛋白質(zhì)純品結(jié)構(gòu)研究純品鑒定功能研究性質(zhì)研究相對分子質(zhì)量等電點(diǎn)測定特殊氨基酸測定一級結(jié)構(gòu)高級結(jié)構(gòu)純化性質(zhì)結(jié)構(gòu)功能研究與應(yīng)用提取分離蛋白質(zhì)的分離（雙向電泳）蛋白質(zhì)的鑒定（質(zhì)譜法）蛋白質(zhì)表達(dá)模式功能模式研究蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫（生物信息學(xué)分析）理論意義和研究價(jià)值結(jié)構(gòu)和功能關(guān)系蛋白質(zhì)組學(xué)研究蛋白質(zhì)含量細(xì)胞破碎機(jī)械法研磨、勻漿物理法溫度、壓力、滲透法、超聲波（壓榨法、超聲波法、凍融法、低滲裂解法）化學(xué)法有機(jī)溶劑法、表面活性劑法酶解法蛋白質(zhì)的抽提抽提液大部分蛋白質(zhì)都溶于水、稀鹽、稀酸或堿溶液，少數(shù)與脂質(zhì)結(jié)合的蛋白質(zhì)溶于乙醇、丙酮、丁酮等有機(jī)溶劑注意事項(xiàng)1溫度低2等電點(diǎn)兩側(cè)3加入離子強(qiáng)度低的中性溶液4還原劑5原材料的1-5倍蛋白質(zhì)含量的測定物理性質(zhì)1紫外線吸收2折射率3比重

化學(xué)性質(zhì)1測定含氮量(凱氏定氮法）2呈色比色法（雙縮脲反應(yīng)、Folin-酚試劑）蛋白質(zhì)分離純化分子大小透析超濾凝膠過濾層析溶解度鹽析有機(jī)溶劑沉淀等電點(diǎn)沉淀選擇性沉淀帶電荷不同PAGE毛細(xì)管電泳等點(diǎn)聚焦離子交換層析層析聚焦吸附力強(qiáng)弱羥基磷灰石柱層析疏水作用層析其它方法親和層析高效液相色譜法微量結(jié)晶法蛋白質(zhì)純度鑒定等電聚焦毛細(xì)管電泳等電聚焦離子交換層析層析聚焦蛋白質(zhì)化學(xué)性質(zhì)研究1相對分子質(zhì)量測定：SDS-PAEG超速離心法凝膠過濾法滲透壓法化學(xué)組成測定毛細(xì)管電泳法質(zhì)譜法2蛋白質(zhì)等電點(diǎn)測定：PAEG等電