不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理_第1頁(yè)
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種子生產(chǎn)與經(jīng)營(yíng)專業(yè)教學(xué)資源庫(kù)不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理一、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的特點(diǎn)不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的凝膠不同。在不連續(xù)緩沖系統(tǒng)中，樣品加在孔徑大的濃縮膠上，而濃縮膠則聚合在小孔徑的分離膠之上。一、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的特點(diǎn)樣品直接加在濃縮膠形成的小槽中一、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的特點(diǎn)不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的主要優(yōu)點(diǎn)是凝膠上可加體積相當(dāng)大的蛋白質(zhì)稀溶液，仍然可以使樣品的各組分得到良好的分離。

蛋白質(zhì)樣品在小孔徑的分離膠中分離之前，先經(jīng)過(guò)大孔徑濃縮膠的遷移作用而被濃縮至一極狹窄的區(qū)帶。我國(guó)當(dāng)前應(yīng)用的玉米種子鹽溶蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定，就是利用4.65%濃縮膠，PH3.2；9.3%分離膠，PH5.6的不連續(xù)緩沖系統(tǒng)。二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理電泳分離樣品濃縮效應(yīng)樣品分子篩效應(yīng)電荷效應(yīng)二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理——樣品的濃縮效應(yīng)濃縮膠為大孔徑膠，樣品在其中濃縮，并按其遷移率遞減的順序逐漸在其與分離膠的界面上積聚成薄層。分離膠為小孔徑膠，樣品在其中進(jìn)行電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)分離。

蛋白質(zhì)分子在大孔徑膠中受到的阻力小，移動(dòng)速度快。進(jìn)入小孔徑凝膠時(shí)的阻力大，速度就減慢了。

由于凝膠層的不連續(xù)性，因此在大孔徑與小孔徑凝膠的界面處就使蛋白質(zhì)樣品高度濃縮，堆積成層，形成一狹小的高濃度的蛋白質(zhì)區(qū)帶。二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理——樣品的濃縮效應(yīng)不連續(xù)系統(tǒng)濃縮效應(yīng)示意圖二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理——分子篩效應(yīng)

樣品通過(guò)一定孔徑的凝膠時(shí)，小分子走在前面，大分子走在后面。二、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)的電泳分離原理——電荷效應(yīng)

由于每種蛋白質(zhì)分子所載有效電荷不同，因而遷移率不同。

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