腺病毒載體工藝平臺(tái)

源興基因藥物研發(fā)中心腺病毒載體工藝平臺(tái)介紹2023/1/131基因藥物研發(fā)中心

研發(fā)中心廠房及設(shè)備源興基因藥物研發(fā)中心建筑面積1900多平方米，其中符合國(guó)家GMP要求的潔凈廠房面積1600多平方米，包括原液生產(chǎn)車間、制劑生產(chǎn)車間、質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室以及研發(fā)實(shí)驗(yàn)室。研發(fā)中心配置了NBS細(xì)胞罐、AKTA純化系統(tǒng)、高速冷凍離心機(jī)、切向流超濾系統(tǒng)、二氧化碳培養(yǎng)箱、生物安全柜、分析型HPLC系統(tǒng)、PCR儀、電泳儀、酶標(biāo)儀、超聲波破碎儀、超聲波西林瓶清洗機(jī)、隧道式滅菌烘箱、液體灌裝加塞機(jī)、軋蓋機(jī)、凝膠掃描成像系統(tǒng)、超純水儀、多效蒸餾水機(jī)等儀器設(shè)備。

能夠滿足腺病毒載體藥物研發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制的要求。

2023/1/132基因藥物研發(fā)中心

2023/1/133基因藥物研發(fā)中心

2023/1/134基因藥物研發(fā)中心

2023/1/135基因藥物研發(fā)中心

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研發(fā)中心生產(chǎn)系統(tǒng)組織圖總經(jīng)理生產(chǎn)總監(jiān)工藝開(kāi)發(fā)部（10人）質(zhì)控部（5人）設(shè)備工程部（4人）物控部（3人）細(xì)胞病毒培養(yǎng)純化制劑分裝清潔輔助2023/1/1310基因藥物研發(fā)中心

研發(fā)隊(duì)伍打造了一支技術(shù)過(guò)硬的研發(fā)隊(duì)伍，能夠保證工藝水平及產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定。歷經(jīng)多次新藥申報(bào)，比較熟悉新藥審評(píng)程序和規(guī)定，積累了較豐富的申報(bào)經(jīng)驗(yàn)，能夠比較順利的解決有關(guān)問(wèn)題。2023/1/1311基因藥物研發(fā)中心

管理制度建立了300多個(gè)SOP、SMP等標(biāo)準(zhǔn)程序和規(guī)章管理制度，按照GMP要求嚴(yán)格規(guī)范管理。2023/1/1312基因藥物研發(fā)中心

研發(fā)中心工藝平臺(tái)研發(fā)中心工藝產(chǎn)業(yè)化平臺(tái)是通用型腺病毒載體藥物生產(chǎn)工藝和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究的藥學(xué)技術(shù)平臺(tái)，中試生產(chǎn)工藝水平達(dá)到了國(guó)內(nèi)同行業(yè)先進(jìn)水平，可以在產(chǎn)量及質(zhì)量上滿足腺病毒載體藥物臨床前和臨床用樣品制備的要求。本工藝擁有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，可作為腺病毒載體新藥研發(fā)及生產(chǎn)的技術(shù)基礎(chǔ)。5L細(xì)胞罐收獲物經(jīng)純化后產(chǎn)量能達(dá)到E15VP/批，注射液制劑工藝達(dá)到了小容量水針1萬(wàn)支/批的生產(chǎn)能力。產(chǎn)品純度大于98%，比滴度大于3.3%，各項(xiàng)質(zhì)檢結(jié)果都能達(dá)到FDA對(duì)腺病毒類生物制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。2023/1/1313基因藥物研發(fā)中心

研發(fā)中心已完成申報(bào)臨床所需藥學(xué)研究的品種品種代號(hào)研究單位研究時(shí)間治療性重組HBV腺病毒疫苗CHB3源興2004年3月至2005年11月治療性HIV腺病毒載體疫苗H30源興2005年12月至2007年8月治療性重組腺病毒EB病毒潛伏膜抗原疫苗LMP2CDC病毒病所委托源興承擔(dān)藥學(xué)研究2007年9月至2008年10月2023/1/1314基因藥物研發(fā)中心

新藥申報(bào)三方面研究?jī)?nèi)容

藥學(xué)研究藥效研究安全評(píng)價(jià)2023/1/1315基因藥物研發(fā)中心

藥學(xué)研究主要內(nèi)容上游構(gòu)建及鑒定細(xì)胞/毒種研究及三級(jí)庫(kù)建立原液工藝研究制劑工藝研究檢測(cè)方法及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究穩(wěn)定性研究試制三批樣品2023/1/1316基因藥物研發(fā)中心

細(xì)胞及毒種研究細(xì)胞檢定、傳代穩(wěn)定性研究毒種檢定、代次及遺傳穩(wěn)定性研究2023/1/1317基因藥物研發(fā)中心

建細(xì)胞庫(kù)原始細(xì)胞細(xì)胞來(lái)源于ATCC主細(xì)胞庫(kù)質(zhì)量控制工作細(xì)胞庫(kù)質(zhì)量控制細(xì)胞擴(kuò)增細(xì)胞擴(kuò)增

2023/1/1318基因藥物研發(fā)中心

建毒種庫(kù)工作種子批病毒擴(kuò)增原始種子批主種子批鑒定檢測(cè)質(zhì)量控制質(zhì)量控制病毒擴(kuò)增2023/1/1319基因藥物研發(fā)中心

原液工藝流程、參數(shù)及技術(shù)指標(biāo)Sepharose6FastFlow分子篩層析回收率（3批平均）

重組腺病毒種子罐收獲物超濾濃縮液SOURCE30Q陰離子交換柱層析層析收集液原液6000RPM離心20min500K膜超濾濃縮10倍細(xì)胞種子細(xì)胞罐擴(kuò)增5L罐細(xì)胞培養(yǎng)，病毒擴(kuò)增：DO60%,37℃,pH7.2,耗糖40g/d接種病毒，MOI為20

H30產(chǎn)量（3批平均）

53%460ml1.1×1015VP2023/1/1320基因藥物研發(fā)中心

細(xì)胞罐工藝細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)毒種制備罐細(xì)胞培養(yǎng)罐細(xì)胞染毒罐病毒培養(yǎng)純化2023/1/1321基因藥物研發(fā)中心

細(xì)胞罐葡萄糖消耗監(jiān)控曲線圖2023/1/1322基因藥物研發(fā)中心

細(xì)胞罐產(chǎn)毒濃度曲線2023/1/1323基因藥物研發(fā)中心

細(xì)胞罐病毒收獲曲線2023/1/1324基因藥物研發(fā)中心

純化工藝罐病毒收獲液離心超濾濃縮離子交換層析酶切分子篩層析原液2023/1/1325基因藥物研發(fā)中心

純化圖譜2023/1/1326基因藥物研發(fā)中心

制劑工藝流程圖病毒保存液原液半成品配制除菌分裝軋蓋燈檢貼簽包裝、貯存鋁蓋清洗、烘干膠塞滅菌西林瓶清洗、干烤檢測(cè)檢測(cè)

2023/1/1327基因藥物研發(fā)中心

制劑處方篩選結(jié)果從以上結(jié)果可以看出，處方Ⅰ為最優(yōu)，處方Ⅱ次之，處方Ⅲ最差，處方Ⅳ較差。于是將處方確定為處方Ⅰ。

不同處方貯存情況比較圖0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+09012345678貯存時(shí)間（周）滴度（IU/ml）處方1處方2處方3處方42023/1/1328基因藥物研發(fā)中心

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及檢測(cè)方法檢測(cè)項(xiàng)目注射液方法外觀（含可見(jiàn)異物）符合藥典相應(yīng)規(guī)定中國(guó)藥典三部附錄ⅤBpH值7.0－8.0中國(guó)藥典三部附錄ⅤA裝量≥1.0ml中國(guó)藥典三部附錄ⅠA鑒別試驗(yàn)符合相應(yīng)的規(guī)定PCR法病毒顆粒數(shù)1.0×1011VP/ml(80-150%)UV法比滴度（IU/Vp）≥3.3%TCID50法HPLC純度≥95%HPLC法小鼠效力試驗(yàn)陽(yáng)性率≥60%ELISPOT法293細(xì)胞DNA殘留量≤10ng/劑量用地高辛試劑盒方法（固相斑點(diǎn)雜交法）牛血清白蛋白殘留量≤100ng/劑量ELISA法RCA＜1RCA/3×1010VPA549細(xì)胞檢測(cè)法（空斑法）AAV檢測(cè)不得檢出PCR法293細(xì)胞蛋白殘留量≤100ng/劑量ELISA法無(wú)菌試驗(yàn)（含支原體）陰性中國(guó)藥典三部附錄ⅫA和ⅫB細(xì)菌內(nèi)毒素＜10EU/劑量中國(guó)藥典三部附錄ⅫE小鼠異常毒性試驗(yàn)符合規(guī)定中國(guó)藥典三部附錄ⅫF2023/1/1329基因藥物研發(fā)中心

HPLC純度2023/1/1330基因藥物研發(fā)中心

免疫熒光檢測(cè)2023/1/1331基因藥物研發(fā)中心

穩(wěn)定性研究試驗(yàn)結(jié)果

穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明，在-80℃、-20℃和2-8℃存放9個(gè)月，本品質(zhì)量都保持穩(wěn)定，而在37℃其質(zhì)量有顯著下降。

不同溫度貯存情況圖0.00E+005.00E+081.00E+091.50E+092.00E+092.50E+093.00E+093.50E+094.00E+094.50E+090周1周2周3周4周5周6周2月3月6月9月貯存時(shí)間滴度（IU/ml）-80℃-20℃2－8℃37℃2023/1/1332基因藥物研發(fā)中心

生物制品藥學(xué)研究申報(bào)資料《藥品注冊(cè)管理辦法》藥學(xué)研究資料

7.藥學(xué)研究資料綜述。

8.生產(chǎn)用原材料研究資料：（1）生產(chǎn)用動(dòng)物、生物組織或細(xì)胞、原料血漿的來(lái)源、收集及質(zhì)量控制等研究資料；（2）生產(chǎn)用細(xì)胞的來(lái)源、構(gòu)建（或篩選）過(guò)程及鑒定等研究資料；（3）種子庫(kù)的建立、檢定、保存及傳代穩(wěn)定性資料；（4）生產(chǎn)用其它原材料的來(lái)源及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

9.原液或原料生產(chǎn)工藝的研究資料，確定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)及驗(yàn)證資料。

10.制劑處方及工藝的研究資料，輔料的來(lái)源和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，及有關(guān)文獻(xiàn)資料。

11.質(zhì)量研究資料及有關(guān)文獻(xiàn)，包括參考品或者對(duì)照品的制備及標(biāo)定,以及與國(guó)內(nèi)外已上市銷售的同類產(chǎn)品比較的資料。

12.臨床試驗(yàn)申請(qǐng)用樣品的制造和檢定記錄（連續(xù)3批）。

13.制造和檢定規(guī)程草案，附起草說(shuō)明及檢定方法驗(yàn)證資料。

14.初步穩(wěn)定性研究資料。

15.直接接觸制品的包裝材料和容器的選擇依據(jù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。2023/1/1333基因藥物研發(fā)中心

樣品試制條件要求《藥品注冊(cè)現(xiàn)場(chǎng)核查管理規(guī)定》☆臨床試驗(yàn)用藥物應(yīng)當(dāng)在符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的車間制備。制備過(guò)程應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格執(zhí)行《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求?！顦悠返脑寂a(chǎn)記錄與申報(bào)資料工藝一致?！畋仨毻ㄟ^(guò)藥監(jiān)局現(xiàn)場(chǎng)核查。2023/1/1334基因藥物研發(fā)中心

腺病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究的核心生產(chǎn)工藝的可放大性及穩(wěn)定性樣品必須用具有規(guī)模放大性、可穩(wěn)定批量生產(chǎn)的工藝制備檢驗(yàn)方法經(jīng)過(guò)驗(yàn)證產(chǎn)品質(zhì)量必須通過(guò)中檢所復(fù)核2023/1/1335基因藥物研發(fā)中心

腺病毒產(chǎn)品藥學(xué)研究的關(guān)鍵點(diǎn)★建立毒種產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)估方法比滴度

SFDA要求腺病毒制品比滴度≥3.3%。