微生物的實驗室培養(yǎng)-上課用

到目前為止，

幾十項Nobel生理學(xué)和醫(yī)學(xué)獎，化學(xué)獎

都與微生物學(xué)有關(guān)微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細胞的動植物如草履蟲、單細胞藻類等微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物無細胞結(jié)構(gòu)真核細胞細菌、藍藻原核細胞微生物的分類課題1微生物的實驗室培養(yǎng)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.提供營養(yǎng)和條件2.防止污染一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：思考：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無機鹽⑴碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無機氮源：有機氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源一.培養(yǎng)基：微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無機鹽2.特殊營養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無

凝固劑瓊脂分離

鑒定工業(yè)

生產(chǎn)化學(xué)成分：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基

合成培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g分析營養(yǎng)構(gòu)成？5.配制原則⑴目的明確：⑵營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)⑶適宜的pH值：有機碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細菌偏堿，真菌偏酸（CO2作為碳源）生產(chǎn)科研生產(chǎn)科研

有些細菌在一定的條件下，細胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細菌.芽孢（胞）耐高溫需保持干燥的

物品，160～170℃1～2小時接種環(huán)、接種針等

金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121℃、15～30min二.無菌技術(shù)：獲得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵是防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）

培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）

玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）

實驗操作者的雙手思考2.無菌范圍：實驗操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實驗用具和培養(yǎng)基等滅菌實驗操作過程二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺單個或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。3.功能：1.定義：三.菌落鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細胞群體1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNaCl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g四.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙

、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿分散成單個細胞,形成單個菌落倒平板約50℃防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基二.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：⑴平板劃線法：菌種劃3個平板1個不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實驗）（空白對照）6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量

移液器⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍⑴平板劃線法：二.大腸桿菌的純化培養(yǎng)：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑵稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h后，觀察并記錄三.菌種的保藏：1.臨時保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上4℃2.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃問題討論為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒