病毒感染實驗室診斷與防治原則

第18章病毒感染實驗室診斷與防治原則

醫(yī)學(xué)病毒學(xué)MedicalVirology1整理ppt目錄12病毒感染實驗室診斷病毒感染防治原則2整理ppt1.病毒感染實驗室診斷

病毒感染標(biāo)本采集與送檢

▲盡早采集標(biāo)本：發(fā)病初期（急性期）易檢出病毒。

▲注意無菌操作：雜菌污染可影響檢測效果。

▲采集合適部位標(biāo)本：不同疾病及病程采集不同標(biāo)本。

▲標(biāo)本盡快送檢：病毒離開活體后室溫下易死亡，標(biāo)本低溫暫存(-70℃)，病變組織保存于50%甘油緩沖鹽水，可抑制雜菌生長，鼻咽分泌液、糞便等標(biāo)本加抗生素。

▲血清標(biāo)本采集：盡量采取急性期與恢復(fù)期雙份血清，4℃暫存或-20℃保存，血清學(xué)試驗前需滅活補體。3整理ppt1.病毒感染實驗室診斷病毒標(biāo)本直接鏡檢▲光學(xué)顯微鏡檢查：病理標(biāo)本或含有脫落細胞及針吸細胞的標(biāo)本可檢查病毒包涵體，少用。▲熒光顯微鏡檢查：熒光標(biāo)記抗體染色鏡檢，常用?！干潆婄R檢查：很少用。

A：正常細胞；B：病毒感染細胞狂犬病毒內(nèi)基小體A

B

4整理ppt1.病毒感染實驗室診斷病毒分離培養(yǎng)：細胞培養(yǎng)、雞胚接種、動物接種法。

▲細胞培養(yǎng)法：原代、二倍體、傳代細胞培養(yǎng)，不同病毒選擇不同細胞進行分離培養(yǎng)。

5整理ppt1.病毒感染實驗室診斷病毒在培養(yǎng)細胞內(nèi)增殖的檢查與鑒定

①細胞病變效應(yīng)(CPE)：一些病毒增殖后引起細胞折光性下降、圓縮或腫脹、聚集或融合、脫落和死亡。6整理ppt1.病毒感染實驗室診斷

②紅細胞吸附：流感病毒和某些副粘病毒感染細胞膜上可出現(xiàn)病毒的血凝素，能吸附豚鼠、雞及人紅細胞。抗血清或抗體可抑制紅細胞吸附現(xiàn)象發(fā)生，稱為紅細胞吸附抑制試驗，可作為此類病毒增殖及初步鑒定指標(biāo)。腮腺炎病毒感染細胞吸附紅細胞71.病毒感染實驗室診斷

③干擾現(xiàn)象：一種病毒感染細胞后可以干擾另一種病毒在該細胞中的增殖。風(fēng)疹病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE(－)?？刹《荆伺吣I細胞

病毒增殖，CPE(＋)埃可病毒＋風(fēng)疹病毒感染細胞風(fēng)疹病毒不增殖，CPE(－)

④細胞代謝改變：如病毒感染細胞后可使培養(yǎng)液pH發(fā)生改變，可作為初步判斷病毒增殖的指標(biāo)。8整理ppt1.病毒感染實驗室診斷

▲雞胚接種法：不同病毒分別接種雞胚絨毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔或卵黃囊等部位，常用于流感和腮腺炎病毒等分離培養(yǎng)，但很多病毒雞胚中不能增殖。91.病毒感染實驗室診斷▲動物接種法：常用小鼠或大鼠，根據(jù)不同病毒組織親嗜性差異，分別鼻內(nèi)、腦內(nèi)、腹腔或靜脈等途徑接種，如流感病毒通常鼻內(nèi)接種、嗜神經(jīng)病毒常用腦內(nèi)接種，接種后觀察動物發(fā)病和死亡情況。10整理ppt1.病毒感染實驗室診斷病毒數(shù)量與感染性測定▲空斑形成單位(PFU)：單個病毒顆粒增殖后所形成的局限性細胞感染病灶，中性紅染色后出現(xiàn)因感染細胞死亡裂解而未著色的空斑?！?0%致死量(LD50)、50%組織細胞感染量(TCID50)：使50%雞胚或動物死亡、50%細胞發(fā)生病變最小病毒量。

病毒感染細胞后形成的孔斑111.病毒感染實驗室診斷病毒抗原檢測▲免疫熒光法(IFA)：使用熒光素標(biāo)記抗體檢測病毒抗原，具有快速、特異的優(yōu)點，使用較廣?！该庖呒夹g(shù)(EIA)：多用ELISA?！z體金免疫層析法(GICA)：快速、簡便，但靈敏度和特異性不是很高，僅用于初篩或初步鑒定。▲化學(xué)發(fā)光免疫法(CLIA)：具有簡便、快速、敏感、特異、廉價、穩(wěn)定等優(yōu)點，是近年發(fā)展起來的新技術(shù)，目前臨床上用于檢測甲型和乙型肝炎病毒。

12整理ppt1.病毒感染實驗室診斷病毒核酸檢測▲PCR：檢測DNA病毒，如常規(guī)PCR、套式PCR和實時熒光定量PCR?！鳵T-PCR：檢測RNA病毒，如常規(guī)RT-PCR、套式RT-PCR和實時熒光定量RT-PCR?！怂犭s交：特異性標(biāo)記探針檢測病毒核酸。▲基因芯片：可同時檢測多種DNA或RNA病毒不同片段，具有高通量、高敏感性和特異性等優(yōu)點。13整理ppt1.病毒感染實驗室診斷病毒感染血清學(xué)診斷

▲IgM出現(xiàn)早、消失快，故可用于病毒現(xiàn)行感染的血清學(xué)診斷；IgG出現(xiàn)晚、維持時間長，一般僅用于調(diào)查人群對某些病毒的免疫水平以及檢測預(yù)防接種效果?！Ｓ梅椒ǎ貉a體結(jié)合試驗、血凝抑制試驗、使用雙份血清標(biāo)本的ELISA(第二份血清效價較第一份血清升高4倍及以上)，其中l(wèi)gM捕捉ELISA（廣泛用于各種病毒感染性疾病的早期診斷。14整理ppt2.病毒感染防治原則病毒感染的預(yù)防

▲人工主動免疫：接種疫苗，目前使用的疫苗有全病毒滅活疫苗(如乙型腦炎和狂犬病疫苗)

、減毒活疫苗(如脊髓灰質(zhì)炎疫苗)

、基因工程疫苗(乙肝rHBsAg疫苗)?！斯け粍用庖撸鹤⑸浜禺愋钥贵w的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體、細胞因子(干擾素、胸腺肽、轉(zhuǎn)移因子)等細胞免疫制劑。15整理ppt2.病毒感染防治原則病毒感染的藥物治療▲抗病毒化學(xué)制劑：①核苷類藥物：被細胞磷酸激酶作用后摻入子代病毒DNA中使病毒不能復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，如治療病毒性皰疹的阿昔洛韋、治療乙肝的拉米呋啶、治療愛滋病的司他夫定；②非核苷類似物：抑制病毒DNA或RNA逆轉(zhuǎn)錄酶活性，如治療病毒性皰疹和乙肝的膦甲酸鈉、治療愛滋病的奈韋拉平；③蛋白酶抑制劑：能與病毒蛋白酶結(jié)合而抑制其活性，如治療愛滋病的沙喹那韋；④其它抗病毒藥物：阻斷甲型流感病毒吸附或脫殼的金剛烷胺、抑制流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性的扎那米韋。16整理ppt2.病毒感染防治原則

▲干擾素和干擾素誘生劑：①干擾素：主要用于乙型和丙型肝炎病毒、人呼吸道合胞病毒等感染的治療；②干擾素誘生劑：如PolyI:C