GB 15193.12-2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)體外哺乳類細(xì)胞HGPRT基因突變?cè)囼?yàn)

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB1519312—2014

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食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

體外哺乳類細(xì)胞HGPRT基因突變?cè)囼?yàn)

2014-12-24發(fā)布2015-05-01實(shí)施

中華人民共和國(guó)發(fā)布

國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)

GB1519312—2014

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前言

本標(biāo)準(zhǔn)代替體外哺乳類細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)

GB15193.12—2003《(V79/HGPRT)》。

本標(biāo)準(zhǔn)與相比主要變化如下

GB15193.12—2003,:

標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)體外哺乳類細(xì)胞基因突變?cè)囼?yàn)

———“HGPRT”;

增加了術(shù)語(yǔ)和定義

———;

修改了試驗(yàn)?zāi)康暮驮?/p>

———;

增加了不同種類受試物的配制方法

———;

增加了參考陽(yáng)性對(duì)照物

———;

增加了試驗(yàn)用細(xì)胞株

———。

Ⅰ

GB1519312—2014

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食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

體外哺乳類細(xì)胞HGPRT基因突變?cè)囼?yàn)

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了體外哺乳類細(xì)胞次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因突變?cè)囼?yàn)的基本試

(HGPRT)

驗(yàn)方法和技術(shù)要求

。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)受試物的致突變作用

。

2術(shù)語(yǔ)和定義

21HGPRT基因

.

哺乳類動(dòng)物的次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因在人類基因定位于染色體的長(zhǎng)

。,HGPRTX

臂坐標(biāo)為在小鼠也定位于染色體

,Xq26.1;X。

22突變頻率

.

在某種細(xì)胞系中某一特定基因突變型的細(xì)胞集落占細(xì)胞集落總數(shù)的百分率

,()()。

3試驗(yàn)?zāi)康暮驮?/p>

細(xì)胞在正常培養(yǎng)條件下能夠產(chǎn)生在含有硫代鳥嘌呤的選擇性

,HGPRT,6-(6-thioguanine,6-TG)

培養(yǎng)液中催化產(chǎn)生核苷單磷酸摻入中致細(xì)胞死亡在致癌和或

,HGPRT-5'-(NMP),NMPDNA。()

致突變物作用下某些細(xì)胞染色體上控制的結(jié)構(gòu)基因發(fā)生突變不能再產(chǎn)生從而

,XHGPRT,HGPRT,

使突變細(xì)胞對(duì)具有抗性作用能夠在含有的選擇性培養(yǎng)液中存活生長(zhǎng)

6-TG,6-TG。

在加入和不加入代謝活化系統(tǒng)的條件下使細(xì)胞暴露于受試物一定時(shí)間然后將細(xì)胞再傳代培養(yǎng)

,,,

在含有的選擇性培養(yǎng)液中突變細(xì)胞可以繼續(xù)分裂并形成集落基于突變集落數(shù)計(jì)算突變頻率

6-TG,。,

以評(píng)價(jià)受試物的致突變性

。

4材料和試劑

41細(xì)胞

.

常用中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞株和中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞株其他如小鼠淋巴瘤細(xì)胞株

(V79)(CHO),(L5178Y)

和人類淋巴母細(xì)胞株亦可細(xì)胞在使用前應(yīng)進(jìn)行有無(wú)支原體污染的檢查

(TK6)。。

42培養(yǎng)液

.

應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)所用系統(tǒng)和細(xì)胞類型來(lái)選擇適宜的培養(yǎng)基對(duì)于和細(xì)胞常用最低必需培

。V79CHO,

養(yǎng)基改良培養(yǎng)基加入胎牛血清和適量抗菌素對(duì)于和

(MEM,Eagle)、Eagle(DMEM)10%。TK6

細(xì)胞常用培養(yǎng)液加入馬血清培養(yǎng)瓶培養(yǎng)或馬血清孔板培養(yǎng)和

L5178Y,