理論-2013獸醫(yī)微生物講義

第8章腸桿菌科

腸桿菌科細(xì)菌是一大群生物學(xué)性狀近似的革蘭氏陰性桿菌。多數(shù)是腸道的正常菌群，少數(shù)為病原菌，具有重要致病意義。腸桿菌科細(xì)菌種類(lèi)繁多，如埃希菌屬、沙門(mén)菌屬、耶爾森菌屬、克雷伯菌屬、變形桿菌屬等。埃希菌屬的血清型、腸毒素、志賀毒素和菌毛粘附素等毒力因子及致病機(jī)理極具代表性。（Enterobacteriaceae)第一節(jié)埃希菌屬（Escherichia)

埃希菌屬有5個(gè)種，其中最重要的是大腸埃希菌俗稱(chēng)大腸桿菌（E.coli)，是最常見(jiàn)的臨床分離菌。一、形態(tài)及染色特性

革蘭氏陰性小桿菌，無(wú)芽孢、兼性厭氧，散在或成對(duì)，周鞭毛，有菌毛。二、培養(yǎng)特性1.普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色菌落；2.麥康凱瓊脂上形成紅色菌落，伊紅美藍(lán)瓊脂上產(chǎn)生黑色帶金屬光澤菌落；3.致病菌株在綿羊血平板上呈β型溶血；4.生化特性：糖發(fā)酵試驗(yàn)（發(fā)酵乳糖）和IMViC（++--）試驗(yàn)。H2S陰性。麥康凱培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)瓊脂（EMB）三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn)三糖鐵瓊脂(TSI)成分：

蛋白胨20.0g

牛肉膏3.0g

乳糖10.0g

蔗糖10.0g

葡萄糖1.0g

硫酸亞鐵銨(含6個(gè)結(jié)晶水)0.5g

酚紅0.025g或5g/L溶液5mL

氯化鈉5.0g

硫代硫酸鈉0.5g

瓊脂12.0g

蒸餾水1000.0mL

試驗(yàn)方法：以接種針挑取待試菌可疑菌落或純培養(yǎng)物，穿刺接種并涂布于斜面，置36±1℃培養(yǎng)18~24h，觀察結(jié)果。TSI結(jié)果表示：斜面/底層產(chǎn)氣；H2SA=產(chǎn)酸（黃色），K=產(chǎn)堿（紅色），+為陽(yáng)性，-為陰性，（）表示偶爾可見(jiàn)反應(yīng)三、抗原及血清型（一）抗原菌體抗原（O抗原）：其成分為L(zhǎng)PS的多糖側(cè)鏈。173種，耐熱，1個(gè)菌株僅含1種。莢膜抗原（K抗原）：其成分多數(shù)為多糖（K88、K99為蛋白質(zhì)），80種，1個(gè)菌株可含1-2種甚至無(wú)。根據(jù)對(duì)熱的耐受程度不同分L、A和B型。3.鞭毛抗原（H抗原）：其成分為蛋白質(zhì)，不耐熱，55種，1個(gè)菌株僅含1種。（二）血清型（抗原式）

表示方法：O：K：H，如：O8：K23(L)：H19

抗原構(gòu)造復(fù)雜

鞭毛抗原（H）菌體抗原（O）K或Vi抗原四、致病性根據(jù)毒力因子與發(fā)病機(jī)制不同，將病原性大腸桿菌分為5類(lèi)：（1）產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ETEC）（2）腸致病性大腸桿菌（EPEC）（3）腸出血型大腸桿菌（EHEC）O157:H7（4）腸侵襲型大腸桿菌（EIEC）：導(dǎo)致炎癥性腹瀉（5）腸聚集型大腸桿菌（EAEC）兩類(lèi)：細(xì)菌寄生部位改變；病原性大腸桿菌。

（一）產(chǎn)腸毒素大腸桿菌（ETEC）

引起人和動(dòng)物腹瀉，主要毒力因子有兩類(lèi)：1.黏附素（定居因子）：菌毛及非菌毛類(lèi)蛋白，能黏附宿主的小腸上皮細(xì)胞，雖不是直接的致病因子，卻是首要的毒力因子。腸毒素：分泌到胞外的一種蛋白質(zhì)性毒素。

（1）不耐熱腸毒素（heat-labileenterotoxin,LT)

對(duì)熱敏感，可轉(zhuǎn)變成類(lèi)毒素，具有A（1個(gè)）和B亞單位（5個(gè)）。

A1：毒性部位，導(dǎo)致腸上皮細(xì)胞液體分泌亢進(jìn)；

B：無(wú)毒，有免疫原性，與上皮細(xì)胞GM1神經(jīng)節(jié)苷酯受體結(jié)合。

（2）耐熱腸毒素（heat-stableenterotoxin,ST)

耐熱，分子量小，無(wú)免疫原性。致病機(jī)理：細(xì)菌經(jīng)口腔進(jìn)入易感宿主小腸，菌毛黏附素與小腸上皮細(xì)胞微絨毛和表面受體結(jié)合，從而定居腸內(nèi)大量繁殖，產(chǎn)生并釋放腸毒素，對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用。B亞單位與受體結(jié)合，A亞單位進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，活化腺苷酸環(huán)化酶，導(dǎo)致cAMP濃度升高，腸細(xì)胞分泌機(jī)能亢進(jìn)，腸絨毛細(xì)胞吸收功能降低，造成腸管內(nèi)水和電解質(zhì)大量蓄積，引起水樣腹瀉和脫水。（二）產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌（STEC）引起豬水腫病，有兩類(lèi)毒力因子：黏附素菌毛、外膜蛋白（OMP）、緊密素（intimin）等F18：有助于細(xì)菌在腸黏膜上皮細(xì)胞定居和繁殖。志賀毒素（Stx1,Stx2）有溶原性噬菌體編碼，直接導(dǎo)致該病發(fā)生的主要毒力因子。AB模式蛋白毒素，靶細(xì)胞：腸黏膜細(xì)胞、血管上皮細(xì)胞、腎和神經(jīng)組織細(xì)胞等。造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，改變血管通透性。引起出血性結(jié)腸炎、溶血性尿毒綜合征等。

五、診斷標(biāo)本采集：根據(jù)臨床疾病類(lèi)型的不同，采集適當(dāng)?shù)臉?biāo)本。如敗血癥病例采集病變的內(nèi)臟組織，腹瀉病例采集小腸內(nèi)容物。檢查方法：

（一）分離培養(yǎng)：選擇培養(yǎng)基（麥康凱），β溶血（二）生化試驗(yàn)：糖發(fā)酵、IMViC試驗(yàn)、H2S陰性（三糖鐵培養(yǎng)基）。（三）血清學(xué)試驗(yàn)：玻片凝集試驗(yàn)鑒定血清型畜禽致病性大腸桿菌的分離與鑒定程序六、防治目前國(guó)內(nèi)外已有多種疫苗預(yù)防大腸桿菌病，如全菌滅活苗、亞單位疫苗、類(lèi)毒素苗、基因工程疫苗等，Stx2抗毒素被動(dòng)免疫或類(lèi)毒素作主動(dòng)免疫。第二節(jié)沙門(mén)菌屬（Salmonella)絕大多數(shù)沙門(mén)菌對(duì)人和動(dòng)物有致病性，人類(lèi)食物中毒的主要病原之一，在公共衛(wèi)生上占有重要地位。分為兩個(gè)種：腸道沙門(mén)菌和邦戈?duì)柹抽T(mén)菌種類(lèi)繁多，迄今已發(fā)現(xiàn)2500個(gè)以上血清型一、形態(tài)及染色與大腸桿菌相似，除雞白痢和雞傷寒沙門(mén)菌無(wú)鞭毛不運(yùn)動(dòng)外，其余均以周鞭毛運(yùn)動(dòng)。二、培養(yǎng)及生化特性麥康凱培養(yǎng)基：發(fā)酵乳糖（大腸桿菌）；不發(fā)酵乳糖（沙門(mén)氏菌）在選擇培養(yǎng)基上因不發(fā)酵乳糖而呈無(wú)色菌落。IMViC試驗(yàn)：-+-+；多數(shù)菌株H2S陽(yáng)性。三糖鐵培養(yǎng)基

志賀氏菌都能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，大多不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)生H2S。應(yīng)該產(chǎn)生什么現(xiàn)象？大腸桿菌，能分解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S。應(yīng)該是什么現(xiàn)象？沙門(mén)氏菌，能分解葡萄糖，不發(fā)酵乳糖，大多數(shù)產(chǎn)生H2S，多數(shù)產(chǎn)氣。右圖所示1、2、3、4，可能是大腸桿菌、沙門(mén)氏菌還是志賀氏菌？IMViC試驗(yàn)鑒別大腸桿菌與產(chǎn)氣桿菌（水的細(xì)菌學(xué)檢查

）I（吲哚試驗(yàn)）：有些細(xì)菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，就會(huì)形成紅色的玫瑰吲哚。M（甲基紅試驗(yàn)）：某些細(xì)菌在糖代謝過(guò)程中，將培養(yǎng)基中糖先分解成丙酮酸，丙酮酸再分解成甲基、乙酸、乳酸等，因而使培養(yǎng)基變酸，用甲基紅指示劑[pH4.2（紅色）—6.3（黃色）]，可使培養(yǎng)基由原來(lái)的桔黃色變?yōu)榧t色。V.P.(伏—普試驗(yàn))：某些細(xì)菌可利用葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進(jìn)行縮合，脫羧變成乙酰甲基甲醇，此物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白胨中的精氨酸作用，生成紅色化合物。C（檸檬酸鹽試驗(yàn)）：有些細(xì)菌能利用檸檬酸鈉作為碳源，細(xì)菌在分解檸檬酸鹽及培養(yǎng)基中的磷酸銨后，產(chǎn)堿性化合物，使培養(yǎng)基pH升高，在有１％溴麝香草酚藍(lán)指示劑的情況下，培養(yǎng)基由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。三、抗原及血清型（一）抗原

1.菌體抗原（O抗原）：其成分為L(zhǎng)PS的多糖側(cè)鏈。58種，耐

熱，1個(gè)菌株可含多種，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示。

2.莢膜抗原（K抗原）：與毒力有關(guān)，又稱(chēng)Vi抗原。有的菌株有，

有的菌株無(wú)。

3.鞭毛抗原（H抗原）：其成分為蛋白質(zhì)，不耐熱，63種,

分為兩相：

（1）第1相（特異相）：小寫(xiě)英文字母表示

（2）第2相（非特異相）：阿拉伯?dāng)?shù)字表示

表示方法：

O抗原:第1相H抗原:第2相H抗原

如：1，4，[5]，12:i:1,2有Vi抗原的，則表示為：（二）血清型（抗原式）

O抗原:Vi抗原:第1相H抗原:第2相H抗原四、致病性多數(shù)具有致病性，是一種重要的人畜共患病原菌，很容易在動(dòng)物與動(dòng)物、動(dòng)物與人、人與人之間間接或直接傳播。根據(jù)對(duì)宿主適應(yīng)性不同，可分為：專(zhuān)嗜性：如雞白痢、雞傷寒沙門(mén)菌2.偏嗜性：如豬霍亂沙門(mén)氏菌3.泛嗜性：如鼠傷寒、腸炎沙門(mén)菌五、致病機(jī)理：沙門(mén)菌的致病性與侵襲有關(guān)兩種途徑:一種侵襲動(dòng)物腸系膜淋巴結(jié)集結(jié)的淋巴上皮的特殊抗原捕獲細(xì)胞（M細(xì)胞）進(jìn)入上皮下層組織；另一種是直接侵襲M細(xì)胞周?chē)哂形漳芰Φ纳掀ぜ?xì)胞進(jìn)入上皮下層組織。侵襲細(xì)胞后，通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)改變細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)使微絨毛崩解，細(xì)菌在膜小泡中存活、繁殖并釋放，被巨噬細(xì)胞吞噬，由于細(xì)菌多毒力因子的作用得以在巨噬細(xì)胞中生存，隨巨噬細(xì)胞侵入肝、脾、骨髓等不同器官或組織，進(jìn)一步產(chǎn)生毒素，引起各種臨床癥狀。毒力因子：黏附素：菌毛；脂多糖（LPS）：防止吞噬細(xì)胞吞噬和殺傷作用，引起宿主發(fā)熱、黏膜出血、以及休克死亡等。Vi抗原：莢膜多糖異構(gòu)體，可抗補(bǔ)體系統(tǒng)的溶解作用及吞噬細(xì)胞的吞噬作用。腸毒素：AB型，引起腹瀉。細(xì)胞毒素：造成腸上皮細(xì)胞的損傷。毒力質(zhì)粒、毒力島、III型分泌系統(tǒng)…

（一）分離培養(yǎng)：鑒別培養(yǎng)基

（二）生化試驗(yàn)：糖發(fā)酵、IMViC試驗(yàn)、

H2S陽(yáng)性（三糖鐵培養(yǎng)基）

（三）血清學(xué)試驗(yàn)：玻片凝集試驗(yàn)鑒定血清型

六、診斷與大腸桿菌的鑒別診斷：被檢材料分離培養(yǎng)三糖鐵瓊脂斜面麥康凱平板涂片鏡檢生化反應(yīng)血清型鑒定預(yù)增菌免疫性體液免疫與細(xì)胞免疫在抗沙門(mén)菌感染中都很重要體液免疫應(yīng)答主要為IgM抗體沙門(mén)菌免疫母牛的初乳和奶中含有特異性抗體防控目前疫苗多限于預(yù)防各種家畜特有的沙門(mén)菌病，如豬副傷寒、馬流產(chǎn)等由于其血清型多樣，還未研制出多種動(dòng)物通用的疫苗主要采取從農(nóng)場(chǎng)到餐桌一系列規(guī)范性綜合預(yù)防措施。第3節(jié)耶爾森菌屬由革蘭陰性、多形性短小桿菌組成。有11個(gè)菌種，對(duì)人致病主要有鼠疫耶爾森菌-------鼠疫（plague

）

小腸結(jié)腸炎耶爾森菌--小腸炎、結(jié)腸炎、敗血癥等假結(jié)核耶爾森菌--------胃腸炎、腸系膜淋巴肉芽腫生物學(xué)特性形態(tài)與染色G-短桿菌、兩端濃染、有莢膜。固體：卵圓形或短桿狀，液體:短鏈或絲狀可呈多形性培養(yǎng)特性兼性厭氧，28-30℃鼠疫耶爾森：液體清亮，液面有菌膜（靜置4-5d呈“鐘乳石”狀下沉）。其余呈均勻渾濁鼠疫烈性傳染病，歷史上曾發(fā)生過(guò)三次世界性大流行。1989-1998年世界各地報(bào)告鼠疫病例共5440余例，死亡681人2009年7月30日，青海出現(xiàn)鼠疫疫情，12人確診，2人死亡。致病機(jī)理

耶爾森菌最顯著特征：抵抗巨噬細(xì)胞殺傷作用，可在巨噬細(xì)胞內(nèi)存活和繁殖。

病原體可在宿主體外較低溫度下生長(zhǎng)，并大量表達(dá)侵襲素。侵入哺乳動(dòng)物宿主體內(nèi)后，黏附和侵襲功能使得細(xì)菌進(jìn)入回腸和大腸的非吞噬性上皮細(xì)胞內(nèi)。被吞噬后，可誘導(dǎo)表達(dá)表面蛋白質(zhì)使其不被吞噬細(xì)胞殺傷而得以存活。在小腸組織和淋巴結(jié)中，細(xì)菌和死亡的吞噬細(xì)胞引起膿腫，出現(xiàn)點(diǎn)狀壞死。嚴(yán)重可發(fā)展成敗血癥，并在肝脾等器官誘發(fā)膿腫。鼠疫耶爾森菌往往進(jìn)入血流。所致疾病病

在人群發(fā)病前，先有鼠類(lèi)的發(fā)病和流行肺鼠疫敗血癥型鼠疫腺鼠疫引起物質(zhì)莢膜、鼠毒素、內(nèi)毒素等鼠疫，自然疫源性傳染病傳染源：鼠、病人途

徑：鼠蚤、人蚤、呼吸道

鼠-蚤-人人-人伍連德1922年?yáng)|北鼠疫流行中的疑似病院防控：重點(diǎn)在于切斷該病的流行環(huán)節(jié)

滅鼠滅蚤，消滅疫源使用疫苗，鼠疫耶爾森菌的減毒或福爾馬林滅活菌苗抗生素（鏈霉素等）及磺胺類(lèi)藥物

弧菌屬（Vibrio）霍亂弧菌（V.cholerae）副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)

鰻弧菌（V.anguillarum）

氣單胞菌屬（Aeromonas）代表種：嗜水氣單胞菌（A.hydrophila）

第9章弧菌科（Vibrionaceae）（一）霍亂弧菌（V.cholerae）形態(tài)與染色：液體中：運(yùn)動(dòng)非?；顫姵蚀┧髽油科校号帕姓R呈魚(yú)群狀革蘭染色陰性弧型或逗點(diǎn)狀，單鞭毛培養(yǎng)特性：

耐堿不耐酸堿性瓊脂平板上生長(zhǎng)良好在pH8.8~9.0的堿性蛋白胨水、在pH8.5-9.5的堿性蛋白胨水中生長(zhǎng)良好：堿性蛋白胨水是用于可疑霍亂病例的糞便或直腸拭子的專(zhuān)用培養(yǎng)基。

室溫6h后，在氣液交界面可見(jiàn)生長(zhǎng)。G-、逗號(hào)狀的特征性外形有助于霍亂的初步診斷。根據(jù)O抗原不同抗原構(gòu)造與分型：現(xiàn)已有155個(gè)血清群其中O1群、O139群引起霍亂

根據(jù)表型差異O1群霍亂弧菌的每一個(gè)血清型還可分為2生物型古典生物型ELTor生物型可通過(guò)羊血細(xì)胞溶血試驗(yàn)鑒別

抵抗力不耐酸，在正常胃酸中僅能存活4分鐘水中存活長(zhǎng)，河水、井水、海水中1-3周怕熱，100℃1-2分鐘死亡霍亂弧菌對(duì)氯敏感，用漂白粉處理排泄物可達(dá)達(dá)消毒目的。致病性人類(lèi)在自然情況下是霍亂弧菌的唯一易感者，主要通過(guò)污染的水源或飲食物經(jīng)口傳染。在一定條件下，霍亂弧菌進(jìn)入小腸后，依靠鞭毛的運(yùn)動(dòng)，穿過(guò)粘膜表面的粘液層，可能藉菌毛作用粘附于腸壁上皮細(xì)胞上，在腸粘膜表面迅速繁殖，經(jīng)過(guò)短暫的潛伏期后便急驟發(fā)病。該菌不侵入腸上皮細(xì)胞和腸腺，也不侵入血流，僅在局部繁殖和產(chǎn)生霍亂腸毒素1．霍亂腸毒素:

致病因素激活GS，使細(xì)胞內(nèi)cAMP水平升高，主動(dòng)分泌Na+、K+、HCO3—和水，導(dǎo)致嚴(yán)重的腹瀉與嘔吐B亞單位A亞單位與小腸粘膜上皮細(xì)胞GM1神經(jīng)節(jié)苷脂受體結(jié)合，介導(dǎo)A亞單位進(jìn)入細(xì)胞（結(jié)合亞單位）（毒性亞單位）鞭毛運(yùn)動(dòng)2.鞭毛、菌毛普通菌毛有助于細(xì)菌穿過(guò)腸粘膜表面粘液層而接近腸壁上皮細(xì)胞是細(xì)菌定居于小腸所必須的因子傳染方式糞-口途徑

107-109弧菌/ml糞便主要的動(dòng)物傳染源：海產(chǎn)品（貝殼類(lèi)）我國(guó)生食、半生食所致霍亂占飲食感染的80%泥鰍、鱔魚(yú)是保存宿主水樣腹瀉

嘔吐排泄“米泔水”樣便體液平衡失調(diào)（大量水分和電解質(zhì)喪失

）休克霍亂癥狀心力不齊和腎衰竭（死亡率高達(dá)60%）霍亂的潛伏期為1d左右，但可短短至數(shù)小時(shí)或長(zhǎng)至幾天?；魜y的發(fā)病多較突然，一般以劇烈的腹瀉開(kāi)始，繼之為嘔吐，個(gè)別病人可伴隨腹絞痛。每日大便次數(shù)可達(dá)數(shù)次至數(shù)十次。腹瀉物多為水樣為米泔水樣。臨床可見(jiàn)嚴(yán)重脫水、電解質(zhì)紊亂和代謝性酸中毒。病人可死于腎功能衰竭和休克，但大多數(shù)病人如脫水能得到及時(shí)糾正，可在3～7d內(nèi)恢復(fù)。發(fā)病過(guò)程：霍亂病人霍亂患者“米泔水”樣便“Rice-water”stool

免疫性感染霍亂弧菌后，機(jī)體可獲得牢固免疫力SIgA起主要作用O1群的免疫對(duì)O139無(wú)保護(hù)作用（流行病學(xué)調(diào)查）微生物學(xué)檢查法標(biāo)本直接鏡檢分離培養(yǎng)懸滴法觀察細(xì)菌呈穿梭樣運(yùn)動(dòng)涂片見(jiàn)G-性弧菌，魚(yú)群狀排列堿性蛋白胨水增菌選擇培養(yǎng)基為T(mén)CBS玻片凝集反應(yīng)病人糞便，肛拭水樣便防治原則改善社區(qū)環(huán)境，加強(qiáng)水源管理，疫苗預(yù)防接種及時(shí)補(bǔ)充液體和電解質(zhì)預(yù)防大量失水導(dǎo)致的低血容量性休克和酸中毒治療霍亂的關(guān)鍵:控制傳染源：切斷傳播途徑：提高易感者免疫力:隔離病人，治療無(wú)癥狀攜帶者人群的菌苗預(yù)防接種，可獲良好效果，現(xiàn)用加熱或化學(xué)藥品殺死的古典型霍亂菌苗皮下接種，能降低發(fā)病率生物學(xué)特性嗜鹽（halophilic）

在培養(yǎng)基中以含3.5%NaCl生長(zhǎng)最為適宜

鑒別致病株與非致病株神奈川現(xiàn)象（Kanagawaphenomenon，KP）（二）副溶血弧菌（V.cholerae）基因組為兩個(gè)環(huán)狀染色體：3.3Mb,1.9Mb防治致病性直接分離培養(yǎng)于SS瓊脂平板或嗜鹽菌選擇平板食物中毒，該菌經(jīng)烹飪不當(dāng)?shù)暮．a(chǎn)品或鹽腌制品所傳，播潛伏期5~72小時(shí)，可產(chǎn)生自限性腹瀉至中度霍亂樣病癥。標(biāo)本采取患者糞便、肛拭或剩余食物治療可用抗菌藥物血清學(xué)鑒定微生物檢查食品衛(wèi)生管理，副溶血性弧菌檢驗(yàn)程序:嗜水氣單胞菌

（A.hydrophila）

形態(tài)革蘭氏陰性，短桿狀，有鞭毛和菌毛。培養(yǎng)特性普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂上即可生長(zhǎng)血平板上可產(chǎn)生β溶血圈麥康凱培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好在弧菌選擇培養(yǎng)基TCBS或在6%NaCl中不生長(zhǎng)多數(shù)不發(fā)酵乳糖致病性引致敗血癥或皮膚潰瘍等局部感染，是水生動(dòng)物尤其是魚(yú)類(lèi)最常見(jiàn)的致病菌。人類(lèi)感染引致急性胃腸炎等，是食品衛(wèi)生檢驗(yàn)的對(duì)象。毒力因子：

胞外產(chǎn)物，如毒素、蛋白酶等黏附素，如S蛋白、4型菌毛、外膜蛋白鐵載體等免疫：選擇具有代表性的免疫原性好的嗜水氣單胞菌菌株，制備滅活疫苗，由于魚(yú)類(lèi)浸泡或注射免疫。已有獲新獸藥證書(shū)疫苗（嗜水氣單胞菌滅活疫苗）。微生物學(xué)診斷：從患敗血癥動(dòng)物的臟器分離病菌，可用血平板、麥康凱平板或胰蛋白胨大豆瓊脂平板等直接分離培養(yǎng)。第10章巴氏桿菌科及相關(guān)屬巴氏桿菌屬里氏桿菌屬嗜血桿菌屬

巴氏桿菌科是一群個(gè)體微小、粗短、卵圓形的G-桿菌

巴氏桿菌屬（Pasteurella)

本屬細(xì)菌已報(bào)道有20多種，多殺性巴氏桿菌(P.multocida)是本屬中最重要的畜禽致病菌，可引起多種動(dòng)物發(fā)生出血性敗血癥或傳染性肺炎。一、形態(tài)及染色兩端鈍圓，中央微凸的短桿菌G-菌，單個(gè)存在，有時(shí)成雙排列,病料涂片用瑞氏染色或美藍(lán)染色時(shí)，可見(jiàn)典型的兩極著色，培養(yǎng)物所作的涂片，兩極著色不明顯。巴氏桿菌多殺性巴氏桿菌二、培養(yǎng)特性

對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較嚴(yán)格。在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)貧瘠，血液或血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，長(zhǎng)成灰白色露珠狀菌落，不溶血，麥康凱培養(yǎng)上不生長(zhǎng)。1.菌體抗原

:16個(gè)型，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示

2.莢膜抗原

:多糖成分，有6個(gè)型，大寫(xiě)英文字母表示

我國(guó)分離的禽多殺性巴氏桿菌以5∶A為多，其次為8：A。三、血清型

本菌抵抗力不強(qiáng)，易被普通的消毒藥、陽(yáng)光或熱殺死。如：

3%石炭酸、3%福爾馬林、10%石灰乳、0.5~l%氫氧化鈉、0.1%升汞及2%來(lái)蘇兒經(jīng)1~2min可被殺死。水浴56℃15min、60℃10min內(nèi)被殺死。陽(yáng)光曝曬10min可失活。四、抵抗力

一般認(rèn)為動(dòng)物在發(fā)病前已經(jīng)帶菌，多殺性巴氏桿菌可大量寄生在動(dòng)物的上呼吸道和消化道黏膜上，各種誘因使畜禽機(jī)體抵抗力降低時(shí)，病原菌即可乘虛侵入體內(nèi)，經(jīng)淋巴液而入血流，發(fā)生內(nèi)源性感染。此外也可經(jīng)呼吸道、消化道以及損傷的皮膚和黏膜感染。病原侵入機(jī)體并繁殖的能力同菌體的莢膜有很大關(guān)系，高毒力菌株能夠在體內(nèi)存活和繁殖到產(chǎn)生大量?jī)?nèi)毒素的程度，引起一系列的病理學(xué)過(guò)程。五、發(fā)病機(jī)理本菌是多種動(dòng)物的重要病原菌，急性型呈出血性敗血癥、肺炎，如豬肺疫、禽霍亂等，慢性型呈萎縮性鼻炎，關(guān)節(jié)炎及局部化膿性炎癥等。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中小鼠非常易感。動(dòng)物患病痊愈后，可獲得較強(qiáng)的免疫力，且對(duì)其他血清型具有交叉保護(hù)力。高免多價(jià)血清具有良好的緊急預(yù)防和治療作用。六、致病性與免疫性七、微生物學(xué)診斷

1.涂片或觸片鏡檢

染色（美藍(lán)或瑞氏），兩極著色

2.分離培養(yǎng)

血平板不溶血，麥康凱瓊脂不生長(zhǎng)

3.動(dòng)物試驗(yàn)

病料懸液或培養(yǎng)物接種小白鼠,引起小白鼠迅速死亡

八、流行病學(xué)易感動(dòng)物：多種動(dòng)物(家畜、野獸、禽類(lèi))和人均易感，其中豬、家禽和兔最常見(jiàn)；其次是黃牛、牦牛和水牛。各種年齡的動(dòng)物都可感染，以幼齡動(dòng)物較為多見(jiàn)。傳染源及傳播途徑：患病動(dòng)物和帶菌動(dòng)物由其排泄物、分泌物不斷排出有毒力的病菌，污染飼料、飲水、用具和外界環(huán)境，經(jīng)消化道、呼吸道、皮膚損傷、吸血昆蟲(chóng)叮咬傳染。在飼養(yǎng)管理不良、使役過(guò)度、長(zhǎng)途運(yùn)輸、氣候多變等外因誘導(dǎo)，而使機(jī)體抵抗力降低時(shí)，病菌即可乘機(jī)侵入體內(nèi)，大量繁殖，誘發(fā)疾病。流行特點(diǎn)：發(fā)病無(wú)明顯的季節(jié)性，尤以冷熱交替、氣候劇變、悶熱、潮濕、多雨的時(shí)期發(fā)生較多。本病一般為散發(fā)性，但水牛、牦牛、豬有時(shí)呈地方流行性，綿羊有時(shí)也可能大量發(fā)病。家禽，雞多為散發(fā)，鴨多為爆發(fā)。

豬巴氏桿菌

（豬肺疫或豬出血性敗血癥或鎖喉風(fēng)）

臨診特征為最急性型呈咽喉部急性腫脹，高度呼吸困難；急性型呈呼吸困難，胸腔有絮狀纖維素沉積；慢性型表現(xiàn)慢性肺炎或慢性胃腸炎。死亡率很高，有時(shí)可達(dá)95％以上。豬肺疫病豬呼吸困難，呈犬坐式張口呼吸

診斷根據(jù)癥狀、病變可作出初診。確診可采取病變部組織涂片，經(jīng)美蘭染色后鏡檢，如見(jiàn)到兩極濃染的球桿菌，結(jié)合臨診病狀可以確診。也可進(jìn)一步做細(xì)菌學(xué)鑒定。牛巴氏桿菌?。ㄅ３鰯。┡R診以敗血型呈出血性下??；浮腫型呈頸部、咽喉部及胸部水腫，呼吸高度困難；肺炎型呈呼吸困難，胸腔有絮狀纖維素沉積為特征。

禽巴氏桿菌?。ㄇ莼魜y或禽出?。┦怯啥鄽⑿园褪蠗U菌引起的雞、鴨、和火雞的一種急性敗血性傳染病。臨診特征為急性病例表現(xiàn)為突然發(fā)病、下痢，肝表面有大小不等的灰白色壞死灶；慢性病例發(fā)生肉髯水腫及關(guān)節(jié)炎。雞為多為散發(fā)，鴨多為爆發(fā)。本病對(duì)農(nóng)村養(yǎng)禽業(yè)威脅較大。診斷據(jù)流行病學(xué)、癥狀、病變可做出初步診斷，確診可采取心血、肝臟等涂片，經(jīng)美蘭染色后，鏡檢可見(jiàn)兩極著色的球桿菌。禽出敗肝表面有針尖大小灰白色壞死灶

里氏桿菌屬（Riemerella)

鴨疫里氏桿菌（R.anatipestifer）是本屬的代表種，原名鴨疫巴氏桿菌，是雛鴨傳染性漿膜炎的病原菌，是對(duì)養(yǎng)鴨業(yè)危害最為嚴(yán)重的病原之一。菌體呈桿狀或橢圓形，多為單個(gè)，少數(shù)成雙或短鏈排列、無(wú)芽胞、無(wú)鞭毛、有莢膜,端氏染色兩極濃染。最易分離器官：大腦(分離率80%)、心血(60%)。一.形態(tài)及染色

營(yíng)養(yǎng)要求較高，普通培養(yǎng)基和麥康凱培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，最適培養(yǎng)基是巧克力平板，在含5-10%二氧化碳環(huán)境中生長(zhǎng)良好。在巧克力或胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）平板上，呈圓形、微突起、表面光滑、奶油狀小菌落。生化試驗(yàn)大多陰性，不發(fā)酵葡萄糖和蔗糖，與多殺性巴氏桿菌相區(qū)別。

二.培養(yǎng)及生化特性三.血清型

21個(gè)型，以阿拉伯?dāng)?shù)字表示，我國(guó)多數(shù)屬1型。四.致病性

1.鴨疫里氏桿菌主要感染2─8周齡小鴨，其中2~4周齡雛鴨最易感，成年鴨和1周齡以?xún)?nèi)的鴨不發(fā)病。

2.主要經(jīng)消化道、呼吸道和破損的皮膚、黏膜感染

3.發(fā)病死亡率與年齡、毒株、飼養(yǎng)管理水平和應(yīng)激因素有密切聯(lián)系，一般為5%~75%。

4.本病四季均可發(fā)生，秋冬季節(jié)尤甚。

病初患鴨精神沉郁，縮頸，腿發(fā)軟，不愿意走動(dòng)

精神萎頓、流眼淚、流鼻

病程稍長(zhǎng)可見(jiàn)神經(jīng)癥狀，頭頸扭曲或仰臥，雙腿劃動(dòng)呈游泳狀

急性死亡病例主要病變是心臟包膜增厚渾濁、有纖維素性滲出物

鴨疫里默氏菌感染鴨剖檢病變，脾臟腫大，外觀呈斑駁樣。鴨疫里默氏菌感染鴨剖檢病變，腦膜充血。五.診斷癥狀、病理變化可作出初步診斷細(xì)菌的分離培養(yǎng)：取心血、腦、肝接種巧克力平板涂片鏡檢:兩極著色生化試驗(yàn):不發(fā)酵葡萄糖和蔗糖

嗜血桿菌屬（Haemophilus）

嗜血桿菌是一群酶系統(tǒng)不完全的革蘭氏陰性桿菌，生長(zhǎng)需要血液中的生長(zhǎng)因子，尤其是X因子和V因子。

一、形態(tài)及染色

多為短桿狀，有時(shí)呈多形性，無(wú)鞭毛，無(wú)芽胞，新分離的致病菌株有莢膜。G-菌，兩極著色。

二、培養(yǎng)特性

初次分離培養(yǎng)時(shí)供給5%~10%CO2可促進(jìn)生長(zhǎng),本屬菌生長(zhǎng)需供給X因子（細(xì)菌合成色素、觸酶等的輔基）和V因子（細(xì)菌呼吸過(guò)程中起遞氫作用的脫氫輔酶），在巧克力平板上生長(zhǎng)較佳。

本屬菌對(duì)外界的抵抗力不強(qiáng),分離到的嗜血桿菌要及時(shí)移植或凍干保存。三、抵抗力四、致病性

可引起人和多種動(dòng)物發(fā)病，其毒力因子包括莢膜、菌毛和內(nèi)毒素等。與獸醫(yī)有關(guān)的嗜血桿菌有：副豬嗜血桿菌：可引起豬的心肌炎、腹膜炎、胸膜炎及關(guān)節(jié)炎等，常與豬流感病毒聯(lián)合引起豬流感。

豬的格氏?。℅laesser’sdisease）：高熱、關(guān)節(jié)腫脹、呼吸道紊亂及中樞神經(jīng)癥狀等。副禽嗜血桿菌：可引起雞傳染性鼻炎，導(dǎo)致產(chǎn)蛋量迅速下降。

五、微生物學(xué)診斷

1.顯微鏡檢查：兩極著色

2.分離培養(yǎng)：血平板（生長(zhǎng)不好或不長(zhǎng)）巧克力平板（生長(zhǎng)良好）

3.衛(wèi)星現(xiàn)象：可疑菌落鮮血平板再接金葡菌培養(yǎng)衛(wèi)星現(xiàn)象

4.生化試驗(yàn)

5.血清學(xué)試驗(yàn)

衛(wèi)星現(xiàn)象第11章革蘭氏陰性需氧桿菌

第一節(jié)布魯氏菌屬（Brucella）布氏桿菌又名布魯氏菌,1887年Bruce從死亡士兵脾臟中分到第一株布魯菌，可引起多種動(dòng)物發(fā)病。主要寄居于肝、脾和淋巴組織內(nèi)的單核細(xì)胞中，是胞內(nèi)寄生菌。布氏桿菌是人畜共患傳染病布氏桿菌病的病原體，危害很大一、形態(tài)及染色特性

球形、球桿形或短桿形，新分離者趨向球形。多單在，不形成芽胞和莢膜

，無(wú)鞭毛不運(yùn)動(dòng)。革蘭氏染色陰性，但著色不佳?？缕澚_夫(柯氏)染色法染成紅色，其他菌呈綠色。

二、培養(yǎng)特性本菌專(zhuān)性需氧，在初代分離培養(yǎng)時(shí)尚需5%-10%CO2

，泛酸鈣和內(nèi)消旋赤蘚糖醇可刺激某些菌株生長(zhǎng)。在培養(yǎng)基中加入少量血液、血清或肝浸液可促進(jìn)生長(zhǎng)，不溶血。生長(zhǎng)緩慢，常需5-10d甚至20-30d。液體培養(yǎng)基上呈輕微渾濁生長(zhǎng)，時(shí)間長(zhǎng)可形成很厚的菌膜；在固體培養(yǎng)基上有光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型（M）菌落，大小不一。

三、抗原性及變異性（一）屬內(nèi)抗原：A、M、R抗原光滑型布氏桿菌細(xì)胞壁表面有A和M二種菌體抗原成分(外露的脂多糖側(cè)鏈）

A（牛布氏桿菌主要抗原成份）、M（羊布氏桿菌主要抗原成份）二種抗原在各種菌中含量不同，牛布氏桿菌含A抗原多，含M抗原少。羊布氏桿菌含M抗原多，而含A抗原少?？衫媚赵囼?yàn)制備出單因子血清～單價(jià)A或M血清，供菌種鑒定之用。

R抗原：細(xì)胞壁內(nèi)部的脂多糖復(fù)合物

，其抗血清不與S型菌發(fā)生凝集。變異：S→R喪失A、M抗原，暴露R抗原。菌株毒力減弱，對(duì)吞噬細(xì)胞缺乏抵抗力。（二）屬外抗原

可與巴氏桿菌、變形桿菌、大腸桿菌等屬細(xì)菌發(fā)生交叉凝集反應(yīng)。

四、種及致病性（一）分類(lèi)6個(gè)種

馬耳他布氏桿菌Br.melitensis（羊型）1-3

流產(chǎn)布氏桿菌Br.abortus

（牛型）1-9

豬布氏桿菌Br.suis1-5

綿羊布氏桿菌Br.ovis

沙林鼠布氏桿菌

Br.neotomae

犬布氏桿菌

Br.canis

布氏桿菌可通過(guò)氣溶膠傳播。本菌侵入人體后，被吞噬細(xì)胞吞噬，由于它能夠抵抗吞噬細(xì)胞的殺傷作用，能在該細(xì)胞內(nèi)增殖，成為細(xì)胞內(nèi)寄生菌。經(jīng)淋巴管至局部淋巴結(jié)，待繁殖到一定數(shù)量后，突破淋巴結(jié)屏障而進(jìn)入血流，反復(fù)出現(xiàn)菌血癥。由于內(nèi)毒素的作用，病人出現(xiàn)發(fā)熱、無(wú)力等中毒癥狀，以后本菌隨血液侵入脾、肝、骨髓等細(xì)胞內(nèi)寄生，血流中細(xì)菌逐步消失，體溫也逐漸消退。細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)繁殖至一定程度時(shí)，再次進(jìn)入血流又出現(xiàn)菌血癥，體溫再次上升，反復(fù)呈波浪熱型。本菌多為細(xì)胞內(nèi)寄生，治療難于徹底，易轉(zhuǎn)為慢性及反復(fù)發(fā)作，在全身各處引起遷徒性病變。

（二）致病性動(dòng)物體內(nèi)常局限于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)、乳腺及生殖器官（與赤蘚醇含量較高有關(guān)）、關(guān)節(jié)，故病畜主要表現(xiàn)為睪丸炎、附睪炎、乳腺炎、子宮炎、關(guān)節(jié)炎等。孕期動(dòng)物對(duì)布氏桿菌最敏感，感染后常引起流產(chǎn)。人類(lèi)接觸帶菌動(dòng)物或食用病畜及其乳制品，均可被感染。布氏桿菌病最危險(xiǎn)之點(diǎn)是患畜幾乎不表現(xiàn)癥狀，但能通過(guò)分泌物和排泄物(乳、精子、陰道分泌物、糞、尿)不斷向外排菌，特別是隨流產(chǎn)胎兒、胎衣和羊水排出大量病原菌，成為最危害的傳染源。排出的病原菌對(duì)外界環(huán)境有相當(dāng)強(qiáng)的抵抗力：在胎衣中能存活4個(gè)月，在水、土、糞、尿中存活3個(gè)月，在皮毛上存活1-4個(gè)月，在凍肉中存活2-7周，在乳中存活10天至1年。因此生活和生產(chǎn)環(huán)境一旦遭病原污染。不論人或畜，在幾個(gè)月內(nèi)部有被感染的可能。

布病-公豬睪丸腫大木乃伊胎布病-死胎布病-豬關(guān)節(jié)腫脹布病-母豬子宮內(nèi)死胎布病-子宮充血布病-化膿性子宮內(nèi)膜炎五、微生物學(xué)診斷（一）細(xì)菌學(xué)檢查

病料：整個(gè)流產(chǎn)胎兒或其胃內(nèi)容物，羊水，胎盤(pán)的壞死部分，乳汁或尿等。1．涂片染色鏡檢用鑒別染色法，但檢出率低2．分離培養(yǎng)3．動(dòng)物試驗(yàn)

營(yíng)養(yǎng)要求高，生長(zhǎng)慢，危險(xiǎn)

用鑒別染色法，但檢出率低

血清學(xué)檢查：

布氏桿菌病表現(xiàn)為慢性或隱性感染，其診斷和檢疫主要依靠血清學(xué)檢查及變態(tài)反應(yīng)檢查用已知的布氏桿菌檢查動(dòng)物的血清抗體（診斷和檢疫的主要手段）

凝集試驗(yàn)（虎紅平板、試管凝集試驗(yàn)）

感染初期檢測(cè)。大動(dòng)物血清凝集價(jià)達(dá)1：100時(shí)陽(yáng)性，

1：25可疑；小動(dòng)物1：50為陽(yáng)性，1：25為可疑。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

慢性布氏桿菌病診斷。規(guī)定1：10被檢血清阻止溶血在50%以上即陽(yáng)性。動(dòng)物患病后，首先出現(xiàn)凝集反應(yīng)，其消失亦早；其次出現(xiàn)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)，其消失較晚；最后出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)，保持時(shí)間較長(zhǎng)。

凝集反應(yīng)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)變態(tài)反應(yīng)結(jié)果

++或--布病初期階段

--+布病停止或康復(fù)階段

變態(tài)反應(yīng)檢測(cè)：

不宜作早期診斷。布氏桿菌水解素注射，觀察紅腫反應(yīng)。1-2cm為弱+；2-3cm為+；4-6cm為強(qiáng)+。六、防控

感染動(dòng)物不提倡抗生素治療，接種疫苗有顯著效果嚴(yán)格采取畜群全面檢疫及淘汰病畜措施對(duì)經(jīng)常接觸牲畜或有關(guān)人群用凍干減毒活苗作皮上劃痕接種。急性病人治療以抗生素為主，一般認(rèn)為四環(huán)素與鏈霉素或磺胺聯(lián)合治療效果較好，需徹底治療，防止轉(zhuǎn)為慢性。

弱毒疫苗：M90株弱毒活疫苗：馬爾他布氏桿菌I型強(qiáng)毒株通過(guò)雞體傳代減毒育成，皮下注射或氣霧的方式運(yùn)用。S2株弱毒活疫苗：由豬源菌株經(jīng)培養(yǎng)基連續(xù)傳代致弱而成。經(jīng)飲水、氣霧或皮下注射免疫。第12章革蘭氏陰性微需氧菌和厭氧菌彎曲桿菌屬螺桿菌屬第1節(jié)彎曲菌屬是一類(lèi)呈弧狀或s形的G-菌，廣泛分布于動(dòng)物界，其中有些可引起動(dòng)物與人類(lèi)的腹瀉、胃腸炎和腸道外感染等疾病。對(duì)人致病有空腸彎曲菌、大腸彎曲菌、胎兒彎曲菌等，其中空腸彎曲菌是腹瀉的常見(jiàn)病原菌。一、空腸彎曲菌G-桿菌，形態(tài)細(xì)長(zhǎng)，呈弧形、S形及海鷗展翅狀。單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，無(wú)莢膜，無(wú)芽胞?？漳c彎曲菌純培養(yǎng)物革蘭染色空腸彎曲菌電鏡圖該菌借助于鞭毛和外膜蛋白與空腸上皮細(xì)胞結(jié)合，侵入生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生腸毒素、細(xì)胞毒素和內(nèi)毒素等物質(zhì)，引起腸炎和腸道外感染。腹瀉是空腸彎曲菌感染最常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)，轉(zhuǎn)為粘液膿血樣便，甚至血便。有發(fā)熱腹痛、惡心不適等癥狀?？稍?周內(nèi)消退，20％患者癥狀可持續(xù)1-3周。人畜共患病病原菌，消化道傳播，主要引起嬰幼兒急性腸炎。表現(xiàn)為暴發(fā)性流行或集體食物中毒。被認(rèn)為是引起全世界人類(lèi)細(xì)菌性腹瀉的主要原因之一。細(xì)菌有時(shí)可通過(guò)腸粘膜入血流引起敗血癥和其他臟器感染，如腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、腎盂腎炎等。孕婦感染本菌可導(dǎo)致流產(chǎn)，早產(chǎn)，而且可使新生兒受染。致病性第2節(jié)螺桿菌屬

幽門(mén)螺桿菌與萎縮性胃炎、胃、十二指腸潰瘍和胃癌等疾病相關(guān)。感染非常普遍，平均世界人口的50％被感染。1.生物特性革蘭陰性螺旋狀彎曲，在胃粘膜環(huán)境中，具有典型的形態(tài)，在陳舊培養(yǎng)物中，可呈圓球狀單端或雙端有多根帶鞘鞭毛無(wú)芽孢第2節(jié)幽門(mén)螺桿菌幽門(mén)螺桿菌革蘭染色幽門(mén)螺桿菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期形態(tài)（掃描電鏡）2.培養(yǎng)特性和生化反應(yīng)微需氧，對(duì)濕度(85%以上)和營(yíng)養(yǎng)要求較高，需含血液才能生長(zhǎng)，常用血瓊脂培養(yǎng)基,需經(jīng)72h才長(zhǎng)出菌落。37℃能生長(zhǎng)，在25℃和42℃生長(zhǎng)不良過(guò)氧化氫酶和氧化酶陽(yáng)性。尿素酶豐富，是鑒定的主要依據(jù)之一。生化反應(yīng)不活躍，不能利用糖類(lèi)。所致疾病功能性消化不良慢性胃炎

消化性潰瘍

胃癌胃淋巴瘤

胃腸道外疾病

1994年世界衛(wèi)生組織/國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(WHO/IARC)將幽門(mén)螺桿菌定為Ⅰ類(lèi)致癌原。

致病物質(zhì)：鞭毛、尿素酶、粘附素、脂多糖和毒素。

3.微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本采集：胃、十二指腸粘膜標(biāo)本顯微鏡檢查：直接鏡檢活檢標(biāo)本革蘭染色組織學(xué)切片染色檢查分離培養(yǎng)快速脲酶試驗(yàn):5~30鐘內(nèi)觀察結(jié)果PCR法未作胃鏡檢查者，可通過(guò)尿素[14/13C]呼氣試驗(yàn)4.快速脲酶試驗(yàn)是—種簡(jiǎn)便實(shí)用、快速敏感、較為準(zhǔn)確可靠的診斷方法。脲酶試劑由尿素、基質(zhì)、酚紅指示劑等組成,將小塊的活組織塊放人裝有尿素培養(yǎng)基瓶?jī)?nèi)，如培養(yǎng)基由黃變?yōu)榧t色為陽(yáng)性，提示該菌脲酶已將尿素分解。第13章革蘭氏陽(yáng)性無(wú)芽孢桿菌李氏桿菌屬丹毒絲菌屬

李氏桿菌屬（Listeria）有7個(gè)種，代表種是產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌（L.monocytogenes)，引致人和動(dòng)物的李氏桿菌病。在絕大多數(shù)食品中都能找到李斯特菌。肉類(lèi)、蛋類(lèi)、禽類(lèi)、海產(chǎn)品、乳制品、蔬菜等都已被證實(shí)是李斯特菌的感染源。李斯特菌中毒嚴(yán)重的可引起血液和腦組織感染。一、形態(tài)與染色

兩端鈍圓的短小桿菌，革蘭氏染色陽(yáng)性。單在、呈Ｖ字排列、或成從排列。不形成莢膜、無(wú)芽胞，有鞭毛，在20℃-25℃培養(yǎng)可產(chǎn)生4根周鞭毛，在37℃至少可產(chǎn)生1根鞭毛。

需氧或兼性厭氧菌，1℃-45℃均可生長(zhǎng)，30℃-37℃最適，4℃需7天。普通瓊脂平板上可生長(zhǎng)，光滑型、藍(lán)綠色光澤菌落；血液瓊脂培養(yǎng)基上可見(jiàn)其周?chē)M窄的β溶血環(huán)；半固體培養(yǎng)基上穿刺培養(yǎng)，沿穿刺線呈云霧狀生長(zhǎng)。二、培養(yǎng)特性

耐堿不耐酸，耐鹽，對(duì)熱的耐受性較多數(shù)無(wú)芽孢桿菌強(qiáng)，常規(guī)巴氏消毒法不能殺死，常用消毒藥5～10min能殺死本菌。

三、抵抗力

具有O抗原（阿拉伯?dāng)?shù)字表示）及H抗原（小寫(xiě)英文字母表示）,16個(gè)血清型，常見(jiàn)1/2a、4b型。與多種細(xì)菌存在共同抗原，故血清學(xué)診斷意義不大。

四、血清型五、致病性

兼性胞內(nèi)寄生菌，被宿主細(xì)胞吞噬而不被破壞。一般經(jīng)口感染，輕則引起腸炎；若細(xì)菌侵入腸黏膜上皮細(xì)胞及肝、脾巨噬細(xì)胞并定殖則可引起菌血癥并引發(fā)全身感染如敗血癥等。另一途徑通過(guò)鼻黏膜和眼結(jié)膜，在損傷的黏膜經(jīng)神經(jīng)末梢侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)。

毒力因子：內(nèi)化素（internalin）菌體蛋白（ActA）李氏桿菌溶血素O（LLO）等；

可使豬、馬、牛、綿羊、山羊、禽等動(dòng)物散發(fā)性發(fā)病。嚙齒動(dòng)物為自然宿主。成人、新生兒腦膜炎。發(fā)達(dá)國(guó)家感染者死亡率達(dá)20-30%。

家畜以腦膜腦炎、敗血癥和流產(chǎn)為特征，家禽和嚙齒動(dòng)物表現(xiàn)壞死性肝炎和心肌炎病畜表現(xiàn)神經(jīng)癥狀““轉(zhuǎn)圈病””、妊畜流產(chǎn)、血液中單核細(xì)胞增多。六、微生物學(xué)診斷采肝、脾、腦組織、血液等鏡檢：G+小桿菌，呈V字排列分離培養(yǎng)：藍(lán)綠光澤的菌落，β溶血純培養(yǎng)：溶血檢查、運(yùn)動(dòng)性檢查、生化特性鑒定動(dòng)物試驗(yàn)：細(xì)菌懸液滴入家兔或小鼠結(jié)膜囊內(nèi)可發(fā)生明顯的膿性結(jié)膜炎；小鼠腹腔注射，剖檢肝臟壞死，分離細(xì)菌。丹毒絲菌屬（Erysipelothrix）

本屬只有1種，即豬丹毒絲菌（E.rhuriopathiae）是豬丹毒病的病原體，通稱(chēng)豬丹毒桿菌。

革蘭氏陽(yáng)性的細(xì)桿菌，組織涂片或血液涂片中，呈單在、成對(duì)或小絲狀，無(wú)鞭毛、無(wú)莢膜、不產(chǎn)生芽胞

。一、形態(tài)與染色

急性病例慢性病例

二、培養(yǎng)與生化特性

微需氧菌，普通瓊脂上生長(zhǎng)不良，血平板上生長(zhǎng)茂盛，灰白色露滴狀小菌落，并形成α溶血環(huán)，生長(zhǎng)溫度為5℃～42℃，最適溫度為30℃～37℃。

生化特性：糖發(fā)酵能力極弱，明膠穿刺培養(yǎng)呈試管刷狀生長(zhǎng)，但不液化明膠。

三、抵抗力

本菌對(duì)腐敗和干燥環(huán)境有較強(qiáng)的抵抗力，對(duì)常用消毒劑抵抗力不強(qiáng)，0.5％甲醛數(shù)十分鐘可殺死。最初被分為A、B、N型。A型：強(qiáng)毒型，多分離自急性病例B型：弱毒型，多分離自慢性病例，免疫原性較好

N型：無(wú)毒型目前以阿拉伯?dāng)?shù)字為型號(hào)，共有25個(gè)血清型。四、血清型

五、致病性通過(guò)消化道感染，進(jìn)入血流引起動(dòng)物高熱，可產(chǎn)生透明質(zhì)酸酶和神經(jīng)氨酸酶，加強(qiáng)了血管通透性和降解宿主組織粘蛋白本菌在自然界分布十分廣泛，可寄生于哺乳動(dòng)物、禽和魚(yú)類(lèi)。其中豬分離率最高，人可經(jīng)外傷感染，發(fā)生皮膚病變，稱(chēng)“類(lèi)丹毒”。豬丹毒病豬涂片鏡檢：G+纖細(xì)的小桿菌分離培養(yǎng)：血平板細(xì)菌鑒定：培養(yǎng)特性和生化特性血清學(xué)診斷：凝集試驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：肌肉注射鴿子

六、微生物學(xué)診斷

主要考慮與李氏桿菌鑒別。

產(chǎn)單核細(xì)胞李氏桿菌豬丹毒桿菌1、溶血性βα2、4℃生長(zhǎng)＋－3、運(yùn)動(dòng)性(25℃)＋－4、接觸酶＋－5、H2S－＋6、七葉苷水解＋－7、馬尿酸鈉＋－8、M.R&V-P＋－9、明膠穿刺沿穿刺線生長(zhǎng)試管刷狀10、動(dòng)物試驗(yàn)鴿子－＋豚鼠

＋

－豬丹毒GC42弱毒菌株制成的凍干苗，抗豬丹毒血清可用于緊急預(yù)防和治療，也可用青霉素治療病豬。

七、防治第14章革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽孢桿菌第一節(jié)芽孢桿菌屬（Bacillus）

第二節(jié)梭菌屬（Clostridium）

第一節(jié)芽胞桿菌屬（Bacillus）

芽胞桿菌屬是一群能形成芽孢的革蘭氏陽(yáng)性大桿菌。本屬絕大多數(shù)為自然界非病原菌，主要的致病菌為炭疽芽胞桿菌，是引起動(dòng)物和人炭疽的病原菌；蠟狀芽胞桿菌的某些菌株可產(chǎn)生腸毒素，引致食物中毒；其他大多為腐生菌，主要存在于土壤、水和灰塵中，如枯草芽孢桿菌。炭疽芽胞桿菌（B.anthracis）

炭疽芽胞桿菌俗稱(chēng)炭疽桿菌，是引起人類(lèi)、各種家畜和野生動(dòng)物炭疽（Anthrax）的病原。

一、形態(tài)及染色特性

革蘭氏陽(yáng)性大桿菌，菌體平直，兩端平截。在組織和血液中，單在或短鏈，相連的菌端平截呈竹節(jié)狀。在組織中或含血液的培養(yǎng)基中可形成莢膜。芽孢在有氧條件下形成，位于菌體中央，不膨出菌體。無(wú)鞭毛。

二、培養(yǎng)特性

1.需氧菌或兼性厭氧，最適生長(zhǎng)溫度30℃-37℃，營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基中即能生長(zhǎng)良好。

強(qiáng)毒菌株在普通培養(yǎng)基中形成灰白色不透明、扁平、表面干燥,邊緣卷發(fā)狀粗糙型菌落當(dāng)孵育于CO2環(huán)境時(shí)，有毒株會(huì)產(chǎn)生莢膜。

強(qiáng)毒株菌落2.在血瓊脂上一般不溶血，但個(gè)別菌株也可輕微溶血。3.液體培養(yǎng)基中呈絮狀沉淀生長(zhǎng)4.明膠穿刺培養(yǎng)，呈倒松樹(shù)狀，表面液化呈漏斗狀5.在含青霉素的培養(yǎng)基中，可形成串珠反應(yīng)，與其它需氧芽孢桿菌區(qū)別。

串珠反應(yīng)：在含青霉素0.5U/ml的培養(yǎng)基中，幼齡炭疽桿菌因細(xì)胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生質(zhì)體相互連接成串。三、抵抗力

本菌繁殖體的抵抗力不強(qiáng)，同一般無(wú)芽孢桿菌，60℃30-60min或75℃5-15min即可被殺死。常用消毒劑均能于短時(shí)間內(nèi)將其殺死。芽孢抵抗力較強(qiáng)，在干燥背光處可存活40年以上。煮沸25min、121℃滅菌5-10min或干熱160℃1h可殺滅芽孢，對(duì)碘敏感。

五、抗原結(jié)構(gòu)

（一）結(jié)構(gòu)抗原

1.莢膜抗原：多肽，僅見(jiàn)于有毒菌株，與毒力和抗吞噬有關(guān)

2.菌體抗原：多糖，與細(xì)菌毒力無(wú)關(guān)。性質(zhì)穩(wěn)定，經(jīng)加熱煮沸甚至高壓蒸汽處理，抗原性不被破壞。

在病畜皮毛或腐敗臟器中經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間煮沸仍能與特異性抗體發(fā)生反應(yīng)形成環(huán)狀沉淀，稱(chēng)為Ascoli反應(yīng)。

3.芽胞抗原：是芽胞的外膜和皮質(zhì)組成，具有免疫原性。（二）保護(hù)性抗原（PA）

炭疽毒素（PA、LF、EF）的組成成分之一，具有免疫原性。

六、致病性

此菌毒力主要與莢膜和毒素有關(guān)，莢膜可增強(qiáng)細(xì)菌抗吞噬能力，使之易于擴(kuò)散；炭疽毒素是造成感染、動(dòng)物致病和死亡的主要原因。炭疽毒素包括了水腫毒素及致死毒素，其毒性作用主要是直接損傷微血管內(nèi)皮細(xì)胞，增強(qiáng)微血管通透性，改變血液循環(huán)動(dòng)力學(xué)，損害腎臟功能，干擾糖代謝，血液呈高凝狀態(tài)，形成感染性休克和彌漫性血管內(nèi)凝血，最后導(dǎo)致動(dòng)物死亡。毒素由水腫因子（EF）、致死因子（LF）及保護(hù)性抗原（PA）三種亞單位構(gòu)成，三種成分單獨(dú)無(wú)毒性，只有EF或LF與PA結(jié)合時(shí)，才有致死或水腫效應(yīng)。本菌可引致各種家畜、野獸和人類(lèi)的炭疽，草食動(dòng)物易感性最強(qiáng)，此菌主要通過(guò)消化道傳染，也可經(jīng)呼吸道及皮膚創(chuàng)傷或通過(guò)吸血昆蟲(chóng)傳播。食草動(dòng)物炭疽常表現(xiàn)為急性敗血癥。豬炭疽多表現(xiàn)為慢性的咽部局限感染，犬、貓和食肉獸則多表現(xiàn)為腸炭疽。1.直接或間接接觸病畜或其排泄物，以及感染的動(dòng)物皮毛、肉、骨粉等可引起皮膚炭疽；2.吸入帶芽孢的塵?？梢鸱翁烤遥?.進(jìn)食被污染的肉類(lèi)和乳制品可引起腸炭疽。

不同類(lèi)型的炭疽其癥狀也有相應(yīng)表現(xiàn)。按感染途徑不同，炭疽可分為皮膚炭疽、肺炭疽、腸炭疽和炭疽敗血癥等臨床類(lèi)型，其中皮膚炭疽最見(jiàn)，占90%以上。炭疽芽孢桿菌主要通過(guò)三種途徑感染人：皮膚炭疽：在面、頸、手臂等暴露部位的皮膚，出現(xiàn)紅斑、丘疹、水皰，周?chē)M織腫脹及浸潤(rùn)，繼而中央壞死形成潰瘍性黑色焦痂，焦痂周?chē)つw發(fā)紅腫脹，疼痛不顯著，局部淋巴結(jié)腫，伴有發(fā)熱、頭痛、關(guān)節(jié)痛。腸炭疽：表現(xiàn)為發(fā)熱、腹脹、劇烈疼痛、腹瀉和血便，可累及消化道以外系統(tǒng)。

肺炭疽：高熱，呼吸困難，胸痛及咳嗽，咯黏液血痰。

腦膜炎型炭疽：劇烈頭痛，嘔吐，繼而出現(xiàn)昏迷、呼吸衰竭。

炭疽敗血癥：病人出現(xiàn)嚴(yán)重的全身癥狀，高熱，寒戰(zhàn)，感染性休克，皮膚出現(xiàn)出血點(diǎn)或大片瘀斑，腔道中出現(xiàn)活動(dòng)性出血，迅速出現(xiàn)呼吸與循環(huán)衰竭。

七、微生物學(xué)診斷

疑似炭疽的病畜尸體嚴(yán)禁剖檢，只能自耳根部采取血液，必要時(shí)可切開(kāi)肋間采取脾臟。皮膚炭疽可采取病灶水腫液或滲出物，腸炭疽可采取糞便。1.細(xì)菌學(xué)檢查

（１）鏡檢：大桿菌，兩端平截，竹節(jié)狀

（２）分離培養(yǎng)：用普通瓊脂或血瓊脂

（３）純培養(yǎng):串珠試驗(yàn)、生化試驗(yàn)

（４）動(dòng)物試驗(yàn)：將檢驗(yàn)材料制成懸液或純培養(yǎng)物給小鼠注射，24-36h,小鼠死于敗血癥。

2.血清學(xué)檢查

（１）Ascoli沉淀反應(yīng)

用加熱抽提待檢炭疽菌體多糖抗原與已知抗體進(jìn)行的沉淀試驗(yàn)。

（2）協(xié)同凝集試驗(yàn)（3）串珠熒光抗體檢查（4）瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

炭疽痊愈動(dòng)物可獲得堅(jiān)強(qiáng)的免疫，再次感染者很少第Ⅱ號(hào)炭疽芽胞苗、無(wú)毒炭疽芽胞苗預(yù)防接種高免血清進(jìn)行緊急預(yù)防接種青霉素作為首選藥物進(jìn)行治療八、免疫防治第二節(jié)梭菌屬（Clostridium）

該屬細(xì)菌多數(shù)專(zhuān)性厭氧，革蘭氏染色陽(yáng)性，能形成芽孢，芽孢直徑往往比菌體粗，使菌體膨脹成梭狀，但并非梭菌屬的細(xì)菌均為梭狀，如破傷風(fēng)梭菌，芽孢位于菌體頂端，菌體呈鼓槌狀。該屬細(xì)菌能產(chǎn)生多種外毒素和侵襲性酶，致病性強(qiáng)。產(chǎn)氣莢膜梭菌、腐敗梭菌、諾維梭菌、肉毒梭菌和破傷風(fēng)梭菌等。產(chǎn)氣莢膜梭菌（Cl.perfringens）舊名魏氏梭菌，在自然界分布很廣。一定條件下，可引起多種嚴(yán)重疾患，局部組織出現(xiàn)壞死、水腫、產(chǎn)氣。一、形態(tài)及染色特征

菌體直桿狀，革蘭氏染色陽(yáng)性。一般條件下不形成芽胞，在無(wú)糖培養(yǎng)基上可形成。芽胞大而卵圓，位于菌體中央或近端，使菌體膨脹。多數(shù)菌株可形成莢膜，無(wú)鞭毛。

無(wú)芽孢有芽孢有莢膜

本菌對(duì)厭氧程度的要求并不嚴(yán)，在普通培養(yǎng)基上可生長(zhǎng)，若加葡萄糖、血液，則生長(zhǎng)更好。菌落多為圓形、光滑、隆起、灰白色的圓屋頂樣，也可形成圓盤(pán)形、邊緣成鋸齒狀、表面有輻射狀條紋的大菌落。

生長(zhǎng)非常迅速，快速移植法可幫助此菌的分離。厭氧肉肝湯中培養(yǎng)，呈均勻渾濁，并產(chǎn)生大量氣體。

二、培養(yǎng)特性血平板上，多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)完全溶血（毒素），外環(huán)不完全溶血（毒素）。在乳糖牛奶卵黃瓊脂平板上，菌落周?chē)霈F(xiàn)乳白色渾濁圈。

三、生化特性

肉渣湯培養(yǎng)基牛乳培養(yǎng)基高糖瓊脂培養(yǎng)基接種產(chǎn)氣莢膜桿菌本菌最突出的生化特性是對(duì)牛乳培養(yǎng)基的“暴烈發(fā)酵”。A型：人氣性壞疽和食物中毒B型：羔羊痢疾

C型：綿羊猝狙

D型：牛腸毒血癥

E型：犢牛、羔羊腸毒血癥

四、致病性

毒素及其分型：1.直接涂片鏡檢：G+大桿菌，并有莢膜

2.分離培養(yǎng)：接種血平板，有雙層溶血環(huán)

3.純培養(yǎng)：引起牛乳暴烈發(fā)酵

4.動(dòng)物試驗(yàn)：小鼠、家兔或鴿

5.腸毒素檢查：

取回腸內(nèi)容物加適量滅菌生理鹽水稀釋?zhuān)?jīng)離心沉淀后取上清液分成兩份，一份不加熱，一份加熱，分別靜脈注射家兔或小鼠。如有毒素存在，不加熱組動(dòng)物常于數(shù)分鐘至數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡，而加熱組動(dòng)物不死亡。五、微生物學(xué)診斷本菌廣泛分布于土壤，動(dòng)物腸道，飼料以及食品中。不能在活的機(jī)體內(nèi)生長(zhǎng)繁殖。當(dāng)有適宜營(yíng)養(yǎng)和厭氧環(huán)境時(shí)，即可生長(zhǎng)繁殖并產(chǎn)生肉毒毒素。人畜食人含此毒素的食品、飼料或其他物品，即可中毒而發(fā)生肉毒中毒癥。

肉毒梭菌形態(tài)及染色特性

本菌多呈直桿狀，單在或成雙，革蘭氏陽(yáng)性。著生周鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。芽孢卵圓，位于菌體近端，大于菌體直徑，使細(xì)胞膨大，易于在液體和固體培養(yǎng)基上形成芽孢。2.培養(yǎng)特性

本菌專(zhuān)性厭氧。最適溫度30-37℃。產(chǎn)毒素的最適溫度為25-30℃。營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基中均能生長(zhǎng)，β溶血。3.抵抗力

本菌繁殖體抵抗力中等，加熱80℃30min或100℃10min能將其殺死，但芽孢抵抗力極