孕產(chǎn)婦及所生兒童艾滋病檢測

孕產(chǎn)婦及所生兒童艾滋病檢測第一頁，共五十八頁，2022年，8月28日全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范National

Guideline

forDetectionof

HIV/AIDS（2009年版）檢測依據(jù)

：2014年修訂版還沒正式推出第二頁，共五十八頁，2022年，8月28日樣本的采集和處理1.對從其他實(shí)驗(yàn)室送的樣品，注意檢查并注明其送檢單與標(biāo)本記錄的符號.樣品管遺漏.破損情況。如有遺漏要把殘留的樣品移出，并對管壁和盛器消毒。要檢查并記錄樣品的質(zhì)量有無溶血，脂血，細(xì)菌感染等情況。2.對實(shí)驗(yàn)室自己采集的標(biāo)本，注意是血液先自然存放1-2小時候，再用3000rpm離心15分鐘，吸出上清液備用，如要幾天內(nèi)檢查可放入2-8℃冰箱，要儲存則置于-20℃低冰箱內(nèi)。3.濾紙片的采集.用移液管從樣品管中吸取100uL抗凝全血或血漿，對準(zhǔn)濾紙片印圈中心處蔣樣品滴在濾紙上，或者穿刺后自皮膚傷口流出的末梢血直接滴加在濾紙印圈的中心處。在室溫下自然干燥至少4小時，不要加熱或堆疊，自然干燥后放入密封袋中。第三頁，共五十八頁，2022年，8月28日

報告“HIV抗體

陽

性”

報告“HIV抗體

陰性”無反應(yīng)提供疑似陽性咨詢進(jìn)一步做補(bǔ)充試驗(yàn)

不確定無反應(yīng)兩種均無反應(yīng)或原有試劑雙份進(jìn)行復(fù)檢兩種均有反應(yīng)

或一有反應(yīng)一無反應(yīng)

有反應(yīng)原有試劑+另

一種篩

查

試

劑

進(jìn)行復(fù)

檢

提供咨詢進(jìn)行核酸檢測等

其他補(bǔ)充試驗(yàn)孕期艾滋病檢測及服務(wù)流程

孕期初次接受產(chǎn)前保健的孕婦

主動提供有關(guān)的檢測信息

采

集

血

樣

本

，

進(jìn)行HIV抗

體篩查試

驗(yàn)檢測后咨詢、指導(dǎo)

常規(guī)孕產(chǎn)期保健

檢測后咨詢、指導(dǎo)進(jìn)行傳染病信息報告

提供后續(xù)干預(yù)服務(wù)流行病學(xué)史無

有進(jìn)行核酸檢測或

2-4周后隨訪

補(bǔ)充試驗(yàn)（首選抗體補(bǔ)充試驗(yàn)）

有反應(yīng)第四頁，共五十八頁，2022年，8月28日《嬰兒艾滋病感染早期診斷工作方案》

對HIV陽性產(chǎn)婦所生兒童于出生后6周和3個月時，分別采集血標(biāo)本，進(jìn)行嬰兒感染早期診斷。詳見圖3嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測及服務(wù)流程。

未進(jìn)行嬰兒早期診斷檢測或嬰兒早期診斷檢測結(jié)果為陰性的兒童，應(yīng)于12、18月齡進(jìn)行艾滋病抗體篩查及必要的補(bǔ)充試驗(yàn)，以明確艾滋病感染狀態(tài)。兒童抗體檢測及服務(wù)流程見圖7。第五頁，共五十八頁，2022年，8月28日

提供咨詢繼續(xù)提供干預(yù)服務(wù)盡早獲得檢測結(jié)果產(chǎn)后暫時未得到補(bǔ)充試驗(yàn)結(jié)果或

補(bǔ)充試驗(yàn)

結(jié)果為

“不

確定

”分娩前快速檢測結(jié)果兩種均陽性者“HIV抗體

陰

性”

提供咨詢

終止干預(yù)提供咨詢終止干預(yù)提供咨詢，

進(jìn)行核酸檢測等其他

補(bǔ)充試驗(yàn)

有反應(yīng)報告不確定

一有反應(yīng)一無反應(yīng)

檢測后咨詢，知情選擇干預(yù)措施

及時應(yīng)用抗艾滋病病毒藥物；

適宜、安全的助產(chǎn)服務(wù)盡早進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)，及時獲得檢測結(jié)果

（首選抗體補(bǔ)充試驗(yàn)）

產(chǎn)時艾滋病檢測及服務(wù)流程（適用于孕期未接受艾滋病檢測的產(chǎn)婦）

孕

期

未

接受

HIV抗

體檢

測的

臨產(chǎn)產(chǎn)

婦

主動提供相關(guān)檢測信息，采集血樣本

同時用兩種不同的快速檢測試劑

進(jìn)行HIV抗體

篩查

試

驗(yàn)

兩種均有反應(yīng)或

兩種均無反應(yīng)報

告“HIV抗

體

陰性

”

檢測后咨詢、指導(dǎo)

常規(guī)助產(chǎn)及服務(wù)

“HIV抗

體陽性

”

提供咨詢，進(jìn)行

傳染病信息報告繼續(xù)提供干預(yù)服務(wù)

所生新生兒特別護(hù)理、應(yīng)用抗病毒藥物；喂養(yǎng)指導(dǎo)、

營養(yǎng)咨詢等感染婦女納入當(dāng)?shù)匕滩?/p>

防治系統(tǒng)所生兒童繼續(xù)隨訪、進(jìn)行

艾滋病相關(guān)檢測無反應(yīng)

報告分娩前快速檢測結(jié)果為一

有反應(yīng)一無反應(yīng)者，

用另一種篩查試劑

再次檢測

無反應(yīng)有反應(yīng)第六頁，共五十八頁，2022年，8月28日艾滋病感染孕產(chǎn)婦所生兒童艾滋病抗體檢測及服務(wù)流程（圖3）

艾滋病感染產(chǎn)婦所生兒童

早期診斷檢測結(jié)果陰性；或未接受早期診斷檢測、

感染狀態(tài)不明確者

12個月

進(jìn)

行HIV抗

體

篩

查

試

驗(yàn)

無反應(yīng)用另一種篩查試劑再次檢測有反應(yīng)無反應(yīng)

有反應(yīng)18個月

時

再

進(jìn)

行

HIV抗體

篩

查

試驗(yàn)無反應(yīng)有反應(yīng)不確定

提供咨詢，

進(jìn)行核酸

檢測等其他

補(bǔ)充試驗(yàn)

無反應(yīng)用另一種篩查試劑有反應(yīng)

再次檢測報告

“HIV抗體

陰性

”

排除

兒

童HIV感

染

常規(guī)兒童保健隨訪兩

種均

無反應(yīng)

原

有試劑+另

一

種

篩查

試劑

進(jìn)行

復(fù)檢或原有試劑雙份進(jìn)行復(fù)檢

兩種均有反應(yīng)或

一有反應(yīng)一無反應(yīng)

補(bǔ)充試驗(yàn)

（首選抗體補(bǔ)充試驗(yàn)）

有反應(yīng)無反應(yīng)

報

告“HIV抗體

陽

性

”

診斷

兒

童

HIV感

染

進(jìn)行傳染病信息報告

提供轉(zhuǎn)介服務(wù)

隨訪并監(jiān)測病情第七頁，共五十八頁，2022年，8月28日18個月以下嬰幼兒的HIV檢測診斷

母親

HIV

抗體經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒，出生時新生兒和嬰兒早期抗體有反應(yīng)，不一定是感染

出生時母親的抗體，80~90%

在生后9~12

個月消失，出生后

18個月基本上全部消失

18

個月后兒童

HIV

仍然有反應(yīng)，視為自身感染產(chǎn)生的抗體第八頁，共五十八頁，2022年，8月28日18個月以下嬰幼兒的HIV檢測診斷

檢測HIVDNA或RNA

推薦檢測HIVDNA,

因?yàn)镠IV前病毒DNA以細(xì)胞內(nèi)前病毒感染狀態(tài)存在，所以它不受母親圍產(chǎn)期抗病毒治療的影響和嬰幼兒預(yù)防性抗病毒治療的影響HIVDNA

的適宜月齡為3-6個月不得使用臍帶血.第九頁，共五十八頁，2022年，8月28日HIV/AIDS實(shí)驗(yàn)室檢測

診斷性檢測初篩實(shí)驗(yàn)：ELISA、化學(xué)發(fā)光（CLIA)、快速檢測（RT）

、PA等確認(rèn)實(shí)驗(yàn)（補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)）：蛋白免疫印跡試驗(yàn)(WB)條帶/線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA）嬰兒診斷：HIV

DNA病情判定檢測T細(xì)胞亞群檢測：流式細(xì)胞儀技術(shù)HIV

RNA檢測：病毒載量

HIV耐藥檢測表型耐藥：細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)基因型耐藥：序列測定，雜交技術(shù)第十頁，共五十八頁，2022年，8月28日疫膠體

金（或膠體硒）快速試驗(yàn)

初篩實(shí)驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）化學(xué)發(fā)光快速檢測（RT）及其它檢測

(1)明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)

(2)免疫滲濾試驗(yàn)：斑點(diǎn)ELISA和斑點(diǎn)免第十一頁，共五十八頁，2022年，8月28日1.將抗原包被在固相載體上。2.如樣品中含有抗體，則結(jié)合為抗原抗體復(fù)合物。3.再加入酶標(biāo)記抗原，則結(jié)合為抗原-抗體-酶標(biāo)記抗原復(fù)合物。4.酶催化底物并顯色。

酶抗原酶標(biāo)記

抗原抗體

抗原固相載體

雙抗原夾心法示意圖第十二頁，共五十八頁，2022年，8月28日16結(jié)果判定：以梅里埃第三代ELISA（雙抗原夾心法）為例①陰性對照（NC），HIV-1陽性對照（PC1），HIV-2陽性對照（PC2）?

NC

必須＜0.25方可用，排除NC≥0.25的值，計(jì)算NC平均值。?

NC界限范圍：0.6倍NC均值＜NC＜1.4倍NC均值。②符合以下條件的實(shí)驗(yàn)成立：?

兩個以上的NC可用。PC1-NC均值

≥

0.4，PC2-NC均值

≥

0.4③Cut

off值

=

陰性對照均值

+

0.100?

小于Cut

off為陰性，大于或等于Cut

off為陽性第十三頁，共五十八頁，2022年，8月28日化學(xué)發(fā)光法結(jié)果判斷??S/CO

<

1.00的樣本被認(rèn)定為非反應(yīng)性(NR)。S/CO

≥

1.00的樣本被認(rèn)定為反應(yīng)性(R)。初始結(jié)果為有反應(yīng)性的樣本必須經(jīng)離心后以復(fù)檢。

18第十四頁，共五十八頁，2022年，8月28日19篩查實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)ELISA法1.實(shí)驗(yàn)前

試劑室溫下平衡2.樣品

血清、血漿分離好3.加樣避免濺出或產(chǎn)生氣泡、及時放入孵箱4.孵育

溫度、濕度及時間5.洗板

保證洗液注滿各孔，洗板針暢通6.顯色臨用前配制、避免接觸金屬器械7.加液

避免產(chǎn)生氣泡8.讀板

保證酶標(biāo)板底部清潔第十五頁，共五十八頁，2022年，8月28日20化學(xué)發(fā)光法血清、血漿分離好注意觀察是否有沒加上標(biāo)本的（機(jī)器會有報警）第十六頁，共五十八頁，2022年，8月28日21ELISA檢測的干擾因素一、內(nèi)源性物質(zhì)（1）類風(fēng)濕因子（2）補(bǔ)體（3）嗜異性抗體（4）標(biāo)本中其它成分的影響血清脂質(zhì)過高、膽紅素、血紅蛋白及血液粘度過大等，均對ELISA測定結(jié)果有干擾作用二、外源性物質(zhì)（1）標(biāo)本溶血（2）標(biāo)本受細(xì)菌污染（3）標(biāo)本凝集不全（4）標(biāo)本管中添加物質(zhì)的影響第十七頁，共五十八頁，2022年，8月28日24化學(xué)發(fā)光法檢測的干擾因素異嗜性抗體經(jīng)常接觸動物或動物血清產(chǎn)品的患者接受過小鼠單克隆抗體制劑診斷或治療的患者第十八頁，共五十八頁，2022年，8月28日免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)

與斑點(diǎn)EIA相似，也是以硝酸纖維膜為載體。

區(qū)別在于不用酶標(biāo)記抗體，而代之以紅色的膠體

金（或膠體硒）A蛋白，用滲濾法作為洗滌方法。第十九頁，共五十八頁，2022年，8月28日

免疫層析法樣品墊:

加入血漿,血清或全血樣品.紅細(xì)胞在此遷移過程中被去除連接物墊:含分析特異性試劑結(jié)合的硒

標(biāo),為一種肉眼可見的紅色信號,被分析

物和硒標(biāo)特異性試劑在此反應(yīng)結(jié)合病人條:固定的含特異性分析試劑,任何

與硒標(biāo)特異性試劑結(jié)合的分析復(fù)合物在

此被結(jié)合固定,形成三文治結(jié)合物,肉眼

可見的紅色線條說明有有反應(yīng)性質(zhì)控條:固定的含捕捉硒標(biāo)物的特異性

試劑,不管樣品中有無被檢測物都應(yīng)出

現(xiàn)紅色線條.控制測試結(jié)果的有效性第二十頁，共五十八頁，2022年，8月28日

撕下所需的測試紙條數(shù),撕下表面保護(hù)膜第二十一頁，共五十八頁，2022年，8月28日血清/血漿樣品加50ul樣品于樣品墊中15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果第二十二頁，共五十八頁，2022年，8月28日全血樣品加50ul樣品于樣品墊中手指血方法

加一滴緩沖液靜脈血方法15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果第二十三頁，共五十八頁，2022年，8月28日病人條質(zhì)控條第二十四頁，共五十八頁，2022年，8月28日結(jié)果報告：對呈無反應(yīng)的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報告；對呈有反應(yīng)的樣品，需要進(jìn)一步做復(fù)檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。對初篩試驗(yàn)呈有反應(yīng)者不能出陽性報告，可出具“HIV抗體待復(fù)檢”報告?！度珖滩z測技術(shù)規(guī)范（2009版）》第二十五頁，共五十八頁，2022年，8月28日HIV抗體檢測復(fù)檢試驗(yàn)復(fù)檢試劑：

應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）

的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試

劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。

。

如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復(fù)檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑?！度珖滩z測技術(shù)規(guī)范（2009版）》第二十六頁，共五十八頁，2022年，8月28日

HIV抗體檢測復(fù)檢試驗(yàn)復(fù)檢結(jié)果處理：

如果兩種試劑復(fù)測均呈無反應(yīng)，則報告HIV抗體陰性；。

如均呈有反應(yīng)，或一無反應(yīng)一有反應(yīng)，需送艾滋病確認(rèn)實(shí)驗(yàn)

室進(jìn)行確認(rèn)。報告為“HIV抗體待復(fù)檢”。

HIV抗體復(fù)檢報告有固定的表格，需由1名檢驗(yàn)人員和1名審核

人員簽字。

對初篩試驗(yàn)呈有反應(yīng)者不能出陽性報告，可

出具“HIV抗體待復(fù)檢”報告

《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）》第二十七頁，共五十八頁，2022年，8月28日樣本均有反應(yīng)

一無反應(yīng)一有反應(yīng)送確認(rèn)均無反應(yīng)性

陰性報告

有反應(yīng)復(fù)檢試驗(yàn)

原有試劑和另外一種不同

原理（或廠家）的試劑

另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。

篩查試劑初篩檢測

無反應(yīng)陰性報告HIV抗體初篩檢測流程圖第二十八頁，共五十八頁，2022年，8月28日初篩試驗(yàn)呈有反應(yīng)性樣品的轉(zhuǎn)送：

需要核對身份，補(bǔ)充個人信息（如姓名和身份證號碼），必要時采集第二份血樣，持HIV抗體篩查報告，送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實(shí)驗(yàn)室，或直接送確證實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢。

無論篩查無反應(yīng)和有反應(yīng)者，均需做好檢測后咨詢。第二十九頁，共五十八頁，2022年，8月28日HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)的試劑：必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。確認(rèn)試驗(yàn)方法：

包括免疫印跡試驗(yàn)（WB）、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）等?！度珖滩z測技術(shù)規(guī)范（2009版）》第三十頁，共五十八頁，2022年，8月28日蛋白印跡實(shí)驗(yàn)（WB）

——廣泛使用的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)基本原理HIV全病毒抗原經(jīng)過聚丙烯酰胺凝膠電泳,將分子量大小不等的HIV抗原蛋白帶分離開來,然后再把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV病毒抗原。第三十一頁，共五十八頁，2022年，8月28日第三十二頁，共五十八頁，2022年，8月28日試劑盒包括1.硝酸纖維膜（試劑膜條）2.陰性對照3.強(qiáng)陽性對照4.弱陽性對照5.濃縮樣品稀釋緩沖液(10×)6.濃縮洗膜緩沖液(

20×)7.酶結(jié)合物8.底物液9.封閉粉10.孵育板，11.使用手冊12.鑷子

18或36條

1管

1管

1管

1瓶

1瓶

1管

1瓶10袋

2或4塊板

1本1支第三十三頁，共五十八頁，2022年，8月28日原理加樣洗加酶結(jié)合物(Ab-HRP)洗加底物第三十四頁，共五十八頁，2022年，8月28日

HIV-1

病毒裂解蛋白

HIV-2

多肽條帶

內(nèi)對照

可選快速或過夜檢測方法第三十五頁，共五十八頁，2022年，8月28日其可檢測標(biāo)本中針對HIV不同抗原的抗體，故被用做確認(rèn)試劑。不同的研究機(jī)構(gòu)有不同的判定標(biāo)準(zhǔn)第三十六頁，共五十八頁，2022年，8月28日

gp140/gp105、gp36，也可為gp125/gp80、gp36

p56、p26、p16

p68、p53、p34

gp160/gp120

gp41

p55、p24、p17

（或p18）p66（或p65）、p51、

p31envgagpolHIV-2抗體特異帶HIV-1抗體特異帶第三十七頁，共五十八頁，2022年，8月28日WB結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)無條帶或只有P17

無條帶2

ENV+GAG+POL

1

ENV

+

p24/p31

WHOFDA（USA）陰性陽性組織第三十八頁，共五十八頁，2022年，8月28日我國的判斷標(biāo)準(zhǔn)

HIV-1抗體陽性同時符合以下2條標(biāo)準(zhǔn)可判為HIV-1抗體陽性：①至少有2條env帶（gp41和gp160/gp120）出現(xiàn)，或至少1條env帶和p24帶同時出現(xiàn)；②符合試劑盒提供的陽性判定標(biāo)準(zhǔn)

HIV抗體不確定出現(xiàn)HIV抗體特異帶，但不足以判定陽性

HIV抗體陰性無HIV抗體特異帶出現(xiàn)《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）》第三十九頁，共五十八頁，2022年，8月28日HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果a

強(qiáng)陽性對照（HIV-1和HIV-2）b弱陽性對照（HIV-1）c陰性對照d典型的HIV-2血清陽性反應(yīng)abcd

gp160

gp120

p66p55p51

gp41

p39

p31

P24

p17

血清對照HIV-2特異帶第四十頁，共五十八頁，2022年，8月28日試驗(yàn)中應(yīng)注意的問題

1.充分浸泡

2.充分洗滌

3.顯色時間

等等第四十一頁，共五十八頁，2022年，8月28日HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)流程圖第四十二頁，共五十八頁，2022年，8月28日結(jié)果匯報

符合HIV-1抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV-1抗體陽性（＋）”；

符合HIV-2抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV-2抗體陽性（＋）”，

并按規(guī)定做好檢測后咨詢、保密和疫情報告工作。

符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV抗體陰性（－）”。如疑

似“窗口期”感染，建議進(jìn)一步做HIV-1P24抗原檢測和HIV核酸檢

測，盡早明確診斷。

符合HIV抗體不確定判斷標(biāo)準(zhǔn)，報告“HIV抗體不確定（±）”，在備注中應(yīng)注明“4周后復(fù)檢”。《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009版）》第四十三頁，共五十八頁，2022年，8月28日晚期病例在我院一中年男性患者，高燒1月余，肺部感染，有鵝口瘡，CD4絕對計(jì)數(shù)是6個/ul，3代試劑篩查呈陽性，快速陽性，WB帶型為gp160，gp120，gp41?？箼C(jī)會性感染一個月后，抗體篩查陽性，快速陽性、P24抗原陽性，WB帶型gp160，gp120，gp41，p24。第四十四頁，共五十八頁，2022年，8月28日55嬰幼兒HIV感染核酸檢測第四十五頁，共五十八頁，2022年，8月28日中國嬰兒早期診斷依據(jù)

5.4

嬰兒早期診斷

適用范圍未滿18個月的HIV感染產(chǎn)婦所生嬰幼兒；母親HIV感染狀態(tài)不詳

，出現(xiàn)HIV相關(guān)臨床表

現(xiàn)，臨床懷疑HIV感染者。第四十六頁，共五十八頁，2022年，8月28日58HIV-1

濾紙片干血斑樣品檢測技術(shù)（Dried

Blood

Spot，

DBS）第四十七頁，共五十八頁，2022年，8月28日60第四十八頁，共五十八頁，2022年，8月28日臨床應(yīng)用67

嬰兒，<18個月兒童

缺點(diǎn)：污染第四十九頁，共五十八頁，2022年，8月28日87影響病毒載量測定結(jié)果的因素第五十頁，共五十八頁，2022年，8月28日88血漿和血清標(biāo)本測定病毒載量應(yīng)該首選血漿標(biāo)本血清的檢測結(jié)果大約是血漿的50%（

30-80%

）第五十一頁，共五十八頁，2022年，8月28日89用EDTA

抗凝劑的采血管采集全血后分離血漿樣

本,其HIV－1RNA

含量比ACD和肝素抗凝管中相

應(yīng)含量多10

%～15

%及20

%～25

%。第五十二頁，共五十八頁，2022年，8月28日90如果必須用RT-