分解纖維素的微生物的分離-(上課用)

知識(shí)回顧：培養(yǎng)基按照功能可以分為幾類；說出下列培養(yǎng)基可以選擇哪一類微生物；說出理由；15.0g瓊脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNaH2PO41.4gKH2PO4

在土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)中，具體的操作流程：課題3分解纖維素的微生物的分離

閱讀課本27頁(yè)基礎(chǔ)知識(shí)部分第一、二段，回答下列問題：1.纖維素在生物圈的分布狀況？

纖維素是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。植物的根、莖、葉等器官都含有大量的纖維素。其中棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物。一、纖維素和纖維素酶

纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素纖維二糖葡萄糖C1酶Cx酶葡萄糖苷酶2.纖維素酶的組成及作用？在一支試管中添加纖維素酶，另一支試管不添加纖維素酶；實(shí)驗(yàn)分析：P27-28的小實(shí)驗(yàn)是如何構(gòu)成對(duì)照的？濾紙崩潰法（2）纖維素分解菌的篩選(學(xué)生閱讀P28回答如下問題:1、篩選纖維素分解菌的方法______________。該方法可以通過________反應(yīng)直接篩選。剛果紅染色法顏色2、其原理是：剛果紅可以與纖維素形成____________，當(dāng)纖維素被_________分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以_____________為中心的________，可以通過___________________________來篩選纖維素分解菌。紅色復(fù)合物纖維素酶纖維素分解菌

透明圈是否產(chǎn)生透明圈可根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌(二)、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)(根據(jù)P28-29思考并回答:)土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別培養(yǎng)基挑選菌落什么樣的環(huán)境取樣?①培養(yǎng)的目的?②選擇培養(yǎng)基的特點(diǎn)?挑選什么樣的菌落?①鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)?②如何鑒別?根據(jù)：微生物對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去找；目的：增加纖維素分解菌的濃度，以確保能夠從樣品中分離到所需要的微生物；剛果紅染色法1、纖維素分解菌選擇培養(yǎng)基屬于______（固體、液體）培養(yǎng)基，原因__________【資料二】選擇培養(yǎng)閱讀資料二“選擇培養(yǎng)基”，回答以下幾問題：液體沒有添加瓊脂2、該培養(yǎng)基對(duì)微生物_____（具有，不具有）選擇作用。如果具有，其選擇機(jī)制是:

具有以纖維素粉為唯一碳源，能分解纖維素的微生物可以大量繁殖；若設(shè)置一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)說明選擇培養(yǎng)的作用，應(yīng)控制的變量是將__________改為_________。3、你能否設(shè)計(jì)一個(gè)對(duì)照實(shí)驗(yàn)，說明選擇培養(yǎng)基的作用？葡萄糖纖維素粉培養(yǎng)基組成提供的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)CMC-Na5-10g碳源酵母膏1g碳源、氮源、生長(zhǎng)因子KH2PO40.25g無機(jī)鹽土豆汁100mL碳源、生長(zhǎng)因子瓊脂15g凝固劑上述物質(zhì)溶解后，加蒸餾水定容至1000mL氫元素、氧元素鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基(水溶性羧甲基纖維素鈉)【資料三】剛果紅染色法方法一：先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng).方法二：在倒平板時(shí)就加入剛果紅.染色法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)方法一

方法二

顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用操作繁瑣，剛果紅會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問題產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。思考：這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足挑選產(chǎn)生透明圈的菌落

挑取產(chǎn)生明顯的透明圈的菌落，一般即為分解纖維素的菌落。接種到纖維素分解菌的選擇培養(yǎng)基上，在300C－370C培養(yǎng)，可獲得純培養(yǎng)。三、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

1.培養(yǎng)基的制作是否合格以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落

對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長(zhǎng)則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落，則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。

為了確定分離得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行_____________實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有______發(fā)酵和______發(fā)酵。纖維素酶測(cè)定方法是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素所產(chǎn)生的________含量進(jìn)行定量測(cè)定。發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶

液體

固體

葡萄糖

四、課題延伸實(shí)驗(yàn)視頻分解纖維素的微生物的分離纖維素酶種類、作用、催化剛果紅染色篩選原理實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)土壤取樣選擇培養(yǎng)涂布培養(yǎng)純化培養(yǎng)前置染色法后置染色法富含纖維素土壤增大分解菌含量染色鑒別分離出分解菌課堂總結(jié)課堂練習(xí)：1.下列關(guān)于纖維素酶的說法，錯(cuò)誤的是A.纖維素酶是一種復(fù)合酶，至少包括三種B.纖維素酶可把纖維素分解成葡萄糖C.纖維素酶可用于去掉植物的細(xì)胞壁D.葡萄糖苷酶可把纖維素分解成葡萄糖2.利用剛果紅法可以篩選出纖維素分解菌，下列說法錯(cuò)誤的是A.剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物B.剛果紅能與纖維二糖形成紅色復(fù)合物C.剛果紅不能與葡萄糖形成紅色復(fù)合物D.若培養(yǎng)基上產(chǎn)生了透明圈，則說明已篩

選出了纖維素分解菌3、剛果紅染色時(shí)，加入剛果紅可在①制備培養(yǎng)基時(shí)②梯度稀釋時(shí)③倒平板時(shí)④涂布時(shí)⑤培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落時(shí)

A．①③B．②⑤

C．③⑤D．④⑤4、請(qǐng)回答下列與檢驗(yàn)飲用水有關(guān)的問題：（1）檢驗(yàn)大腸桿菌的含量時(shí)，通常將水樣進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng)，記錄菌落數(shù)量