實驗一 磺胺嘧啶在體小腸吸收實驗

實驗一磺胺嘧啶在體小腸吸收實驗藥學系藥劑教研室一、實驗要求1.掌握大鼠在體腸管循環(huán)灌流法研究藥物吸收的實驗方法。2.掌握藥物腸管吸收的機理和計算吸收速度常數(shù)(ka)、吸收半衰期(t1/2（a）)的方法。二、儀器、試劑和動物（一）儀器恒流泵、紫外分光光度計、石英比色皿、萬分之一分析天平、電子秤（稱大鼠）、恒溫水浴、溫度計、紅外線燈、玻璃插管、2mL和10mL移液管、錐形瓶、燒杯、注射器、眼科剪刀、眼科鑷子、普通中號鑷子、小剪刀、動物實驗操作臺、手術(shù)線、手術(shù)紗布、10mL容量瓶、1000mL容量瓶、10mL帶塞試管、量筒、手術(shù)止血鉗二、儀器、試劑和動物（二）試劑磺胺嘧啶原料藥、酚紅、1%NaNO2溶液、0.5%氨基磺酸銨溶液、0.1%二鹽酸萘基乙二胺溶液、1mol/L鹽酸、0.2mol/L氫氧化鈉、生理鹽水、Krebs-Ringer試劑（pH7.4）、25%烏拉坦等。（三）動物大鼠，約200g，實驗前禁食一夜（自由飲水）消化道藥物吸收的主要方式為被動擴散。其透過速度與膜兩側(cè)的濃度差成正比，可用下式表示：

Cp相對于CGI可忽略不計，若設DkS/h=k’上式可簡化為上式說明藥物膜透過速度屬于表觀一級速度過程。三、實驗原理D為藥物在膜內(nèi)的擴散系數(shù)；k為藥物在膜／水溶液中的分配系數(shù)；S為藥物擴散的表面積；CGI為消化道內(nèi)藥物濃度；Cp為血液中藥物濃度；h為膜的厚度三、實驗原理以消化液中藥物的量的變化率dX/dt表示透過速度，則：-dX/dt=kaX，積分后為根據(jù)回歸方程求得t1/2=0.693/kaXn的求算Xn=Cn×Vn

在小腸吸收過程中，藥物被吸收的同時水分也被吸收，使Vn不斷減少，利用酚紅不被吸收，測定不同時間酚紅的濃度，求算Vn。三、實驗原理四、實驗內(nèi)容1．試劑的配制Krebs-Ringer試劑(pH7.4)（已準備）：稱取NaCl7.8g，KCl0.35g，CaCl20.37g，NaHCO31.37g，NaH2PO40.32g，MgCl20.02g，葡萄糖1.4g，加蒸餾水適量使成l000mL。

1%NaNO2溶液（100mL）0.5%氨基磺酸銨溶液（100mL）0.1%二鹽酸萘基乙二胺溶液（200mL）1mol/L鹽酸（400mL）0.2mol/L氫氧化鈉（400mL）2．供試液與酚紅液的配制（已準備）(1)供試液：精密稱取磺胺嘧啶20mg、酚紅20mg于1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer試劑定容，搖勻。(2)酚紅液：精密稱取酚紅20mg于1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer試劑定容，搖勻。四、實驗內(nèi)容3．循環(huán)實驗的操作(1)蠕動泵流速的調(diào)節(jié)：選擇所需工作方向，按動快、慢檔開關(guān)，調(diào)節(jié)流速為5mL/min和2.5mL／min。(2)恒溫水浴調(diào)節(jié)：水浴溫度調(diào)節(jié)為（37±0.5）℃。(3)供試液的準備：取80mL供試液加入循環(huán)裝置的燒瓶中，見下圖，將燒瓶置恒溫水浴中預熱至（37±0.5）℃。(4)生理鹽水的準備：取生理鹽水適量，預熱至37℃?zhèn)溆?。四、實驗?nèi)容(5)大鼠麻醉：取實驗前禁食一夜、體重約為200g的雄性大鼠一只，按1.2g／kg體重腹腔注射烏拉坦（約0.8mL）麻醉，并固定于固定臺上。四、實驗內(nèi)容(6)小腸兩端插管：沿大鼠腹部中線打開腹腔(約3cm)，在十二指腸上部和回腸下部各切一小口，插入直徑約0.3cm的玻璃管，并用線扎緊。四、實驗內(nèi)容(7)腸管洗滌：用注射器將37℃的生理鹽水緩緩注入腸管，洗凈腸管內(nèi)容物。注意：

先將腸管捋順，確保無死結(jié)；推注時不要太快，以免漲破腸管；充分洗凈后送入空氣使洗滌液盡量流盡。四、實驗內(nèi)容(8)做成回路：將腸管兩端的玻璃管按圖所示與膠管連接，做成回路，開動蠕動泵，其流速為5mL/min。四、實驗內(nèi)容(9)取樣：以5mL/min流速循環(huán)10min后，將流速調(diào)節(jié)為2.5mL/min，立即自供試液燒瓶中取樣兩份(1mL和0.5mL各一份)，分別作為SD和酚紅“0”時間樣品，另向燒瓶中補加酚紅液2mL，其后每隔15min按同法取樣及補加酚紅液，共取樣9次，停止循環(huán)。四、實驗內(nèi)容4．含量測定（1）SD的標準曲線：取供試液2、4、6、8、10mL分別置l0mL容量瓶中，加蒸餾水定容。四、實驗內(nèi)容各取1mL+1mol/LHCl5mL搖勻+0.1％NaNO21mL搖勻放置3min+0.5％氨基磺酸銨1mL搖勻放置3min+0.1％二鹽酸萘基乙二胺2mL搖勻放置20min550nm的波長處測定吸收度空白液：取酚紅1.0mL，加1mol/LHCl5mL，搖勻，余下操作按上法操作（2）酚紅的標準曲線：精密稱取酚紅約25mg置250mL容量瓶中，加蒸餾水定容，分別精密吸取1、2、3、4、5、6mL置10mL容量瓶中，加蒸餾水定容，再分別吸取0.5mL置10mL帶塞試管中，加0.2mol/LNaOH5mL，搖勻。照分光光度法在555nm波長處測定吸收度。以吸收度對濃度回歸，得到酚紅標準曲線方程。四、實驗內(nèi)容空白液：0.2mol/LNaOH

(3)樣品測定①SD的測定：取樣品lmL置l0mL帶塞試管中，加入lmol/L鹽酸5mL，搖勻，以下步驟按SD標準曲線項下操作，在550nm的波長處測定吸收度。②酚紅的測定：取樣品0.5mL置10mL帶塞試管中，加入0.2mol／LNaOH5mL，在555nm波長處測定吸收度。四、實驗內(nèi)容5．操作注意(1)在大鼠麻醉前應做好一切準備工作。如手術(shù)器械、水浴溫度的調(diào)節(jié)，試藥配制并放在近處，蠕動泵流速調(diào)節(jié)等。如果蠕動泵上并未標出流速，可用量筒接流出液（蒸餾水）的方式確定流速。(2)小腸很細，小腸兩端插上玻璃管后再洗滌非常容易堵塞，應先將十二指腸端插上玻璃管，回腸端找好后先用線扎緊，然后在扎線處切個小口。生理鹽水(37℃)從十二指腸端插管處注入，洗滌內(nèi)容物至凈，再在回腸端切口處插上玻璃管。四、實驗內(nèi)容5．操作注意(3)插玻璃管時應注意方向，在十二指腸端向下插，回腸端向上插，以構(gòu)成回路。(4)SD的測定中，加入氨基磺酸鈉后要充分振搖至無氣泡發(fā)生。四、實驗內(nèi)容五、實驗結(jié)果1.分別寫出SD和酚紅的標準曲線回歸方程和相關(guān)系數(shù)。2.SD和酚紅樣品濃度的計算根據(jù)SD和酚紅的標準曲線方程，分別計算出SD和酚紅樣品的濃度，并填于下表中。3.不同時間SD剩余量的計算按下表中公式計算出不同時間的剩余藥量，并求剩余藥量的對數(shù)值。4.ka和t1/2（a）的計算以剩余藥量的對數(shù)對相應的時間作圖，可得一條直線，由直線的斜率求出ka，并計算t1/2（a）。大鼠在體小腸吸收量的計算取樣時間（h）SDASD濃度酚紅A酚紅濃度供試液體積剩余藥量循環(huán)前A0C0A’0C’0V0=80mLP0=80*C00A1C1A’1C’1V1=C’0V0/C’1P1=C1V10.25A2C2A’2C’2V2=[(V1-1.5)C’1+40]/C’2P2=C2V2+1.5C10.5A3C3A’3C’3V3=[(V2-1.5)C’2+40]/C