標(biāo)準(zhǔn)解讀

GB/T 17999.2-1999是一項(xiàng)中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，全稱(chēng)為《SPF雞血清中和試驗(yàn)》。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了使用SPF（無(wú)特定病原體）雞進(jìn)行血清中和試驗(yàn)的方法，旨在檢測(cè)抗病毒抗體的存在及其滴度，評(píng)估疫苗效果或研究動(dòng)物對(duì)特定病毒的免疫反應(yīng)。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容概覽：

標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)禽類(lèi)疫苗效力及監(jiān)測(cè)動(dòng)物群體中針對(duì)特定病毒的免疫狀態(tài)，通過(guò)測(cè)定SPF雞血清中和病毒的能力來(lái)實(shí)現(xiàn)。

術(shù)語(yǔ)定義

  • SPF雞：指無(wú)特定病原體的雞，用于確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。
  • 血清中和試驗(yàn)：一種生物測(cè)定方法，通過(guò)測(cè)定病毒與特異性抗體在體外反應(yīng)后失去感染力的能力，來(lái)評(píng)估血清中的中和抗體水平。

試驗(yàn)材料與試劑

  • 規(guī)定了所需SPF雞的來(lái)源、飼養(yǎng)條件及血清采集要求。
  • 列出了用于試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)病毒株、細(xì)胞培養(yǎng)條件、維持液及稀釋液的具體要求。

試驗(yàn)步驟

  1. 病毒準(zhǔn)備：詳細(xì)說(shuō)明了病毒的增殖、收獲、滅活及滴定過(guò)程。
  2. 血清準(zhǔn)備：包括血清的收集、處理及稀釋方法。
  3. 中和反應(yīng)：描述了將病毒與不同稀釋度的血清預(yù)混合，然后加入敏感細(xì)胞培養(yǎng)的具體操作步驟。
  4. 觀察與判定：規(guī)定了觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）的時(shí)間點(diǎn)及判定標(biāo)準(zhǔn)，以確定血清的中和效價(jià)。

結(jié)果判定與計(jì)算

  • 介紹了如何根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)的CPE情況，通過(guò)計(jì)算血清的中和指數(shù)或中和滴度（如50%中和滴度，NT50）來(lái)評(píng)價(jià)血清的中和能力。

精密度與準(zhǔn)確度

  • 提供了重復(fù)性與再現(xiàn)性的要求及評(píng)估方法，確保不同實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果的一致性。

試驗(yàn)報(bào)告

  • 要求記錄詳細(xì)的試驗(yàn)條件、所用材料、操作步驟、觀察結(jié)果及最終結(jié)論，確保試驗(yàn)的可追溯性。

注意事項(xiàng)

  • 強(qiáng)調(diào)了生物安全操作的重要性，以及在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中需遵循的無(wú)菌操作規(guī)范。

該標(biāo)準(zhǔn)為SPF雞血清中和試驗(yàn)提供了一套標(biāo)準(zhǔn)化流程，確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和可比性，是獸醫(yī)研究、疫苗開(kāi)發(fā)及動(dòng)物疾病防控領(lǐng)域的重要參考依據(jù)。


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  • 被代替
  • 已被新標(biāo)準(zhǔn)代替，建議下載現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)GB/T 17999.3-2008
  • 1999-11-10 頒布
  • 2000-04-01 實(shí)施
?正版授權(quán)
GB/T 17999.2-1999SPF雞血清中和試驗(yàn)_第1頁(yè)
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TC5.65.020.30B41中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17999.2-1999SPF雞血清中和試驗(yàn)SPFchicken-Serumneutralizationtest1999-11-10發(fā)布2000-04-01實(shí)施國(guó)家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

GB/T17999.2-1999前本標(biāo)準(zhǔn)參照美國(guó)SPAFAS公司的血清中和試驗(yàn)（SN)操作規(guī)程編制而成。SPF雞微生物學(xué)質(zhì)量控制國(guó)家系列標(biāo)準(zhǔn),包括SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測(cè)總則和9種SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法。本標(biāo)準(zhǔn)為《SPF雞血清中和試驗(yàn)》。SPF雞微生物學(xué)檢測(cè)方法還包括以下部分：GB/T17999.1-1999SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn);GB/T17999.3—1999SPF雞血清平板凝集試驗(yàn)：GB/T17999.4-1999SPF雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)：GB/T17999.5—1999SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；GB/T17999.6—1999SPF雞旺敏感試驗(yàn)；GB/T17999.7—1999SPF雞雞白喇沙門(mén)氏菌檢驗(yàn);GB/T17999.8—1999SPF雞試管凝集試驗(yàn)；GB/T17999.9—1999SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部、國(guó)家科學(xué)技術(shù)部提出。本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：農(nóng)業(yè)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心、山東省農(nóng)科院家禽研究所本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：趙立紅、陳德威、張秀美、秦卓明

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17999.2-1999SPF雞血清中和試驗(yàn)SPFchicken--Serumneutralizationtest1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了血清中和試驗(yàn)所用試劑、材料.操作程序及結(jié)果判定等本標(biāo)準(zhǔn)適用于SPF雞感染以下病毒后的中和抗體的監(jiān)測(cè)：禽腦脊髓炎病毒（AvianEncephalomyelitisVirus）、傳染性支氣管炎病毒（InfectiousBronchitisVirus）、傳染性喉氣管炎病毒（In-fectiousLaryngotracheitisVirus）、傳染性法氏襄病病毒（InfectiousBursalDiseaseVirus）。2原理中和試驗(yàn)系指有生物活性的病毒與相應(yīng)的抗體結(jié)合后，可失去原有的生物活性的中和反應(yīng)。中和反應(yīng)不僅有高度特異性.且具有嚴(yán)格的量的關(guān)系。因此可用中和試驗(yàn)鑒定病毒.也可用于相應(yīng)抗體的定量檢測(cè)3試劑和器材3.1試劑3.1.1蛋白際磷酸肉湯、3.1.2青霉素/鏈霉素(雙抗)液3.1.33%碘溶液。3.1.4SPF蛋。3.2器材3.2.1蛋鉆(打孔器)3.2.26針頭。3.2.37*針頭。3.2.4混合器3.2.5照蛋器、3.2.6常規(guī)實(shí)驗(yàn)設(shè)備4操作程序4.1試驗(yàn)準(zhǔn)備4.1.1血清樣品處理被檢血清和陽(yáng)性對(duì)照血清經(jīng)56C30min～45min滅活，保存于－20C條件下備用4.1.2SPF蛋準(zhǔn)備4.1.2.1共需12枚蛋4.1.2.2照蛋檢查胚體活力.試驗(yàn)只用健康胚4.1.2.3根據(jù)

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