GB/T 17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)

TCS.65.020.30B41中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17999.9-1999SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)SPFchicken-Indirectimmunofluorescentassay1999-11-10發(fā)布2000-04-01實(shí)施國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布

GB/T17999.9-1-1999雞傳染性貧血(CIA).是近年來新發(fā)生的雞病，國外均對(duì)其進(jìn)行監(jiān)測。CIA在我國雞群中也有流行，因此·SPF雞微生物學(xué)質(zhì)量控制國家標(biāo)準(zhǔn)將其列入監(jiān)測項(xiàng)目。目前國內(nèi)已建立了SPF雞監(jiān)測CIA的通用方法一-間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)該方法已得到應(yīng)用和驗(yàn)證，在此基礎(chǔ)上制定本標(biāo)準(zhǔn)。SPF雞微生物學(xué)質(zhì)量控制國家系列標(biāo)準(zhǔn).包括SPF雞微生物學(xué)監(jiān)測總則和9種SPF雞微生物學(xué)檢測方法。本標(biāo)準(zhǔn)為《SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)》。SPF雞微生學(xué)檢測方法還包括以下部分：GB/T17999.1—1999SPF雞紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn);GB/T17999.2-1999SPF雞血清中和試驗(yàn)；GB/T17999.3—1999SPF雞血清平板凝集試驗(yàn)；GB/T17999.4—1999SPF雞瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)；GB/T17999.5—1999SPF雞酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn);GB/T17999.6—1999SPF雞胚敏感試驗(yàn)：GB/T17999.7—1999SPF雞雞白沙門氏菌檢驗(yàn)；GB/T17999.8-1999SPF雞試管凝集試驗(yàn)。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國農(nóng)業(yè)部、國家科學(xué)技術(shù)部提出本標(biāo)準(zhǔn)由農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)司歸口，本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：北京市農(nóng)林科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所、農(nóng)業(yè)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：周文平、趙立紅、陳德威

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)SPF雞間接免疫熒光試驗(yàn)GB/T17999.9-1999SPrchicken-indirectimmunofluorescentassay1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了間接免疫熒光試驗(yàn)試劑、材料、操作程序及結(jié)果判定等本標(biāo)準(zhǔn)適用于SPF雞感染雞傳染性貧血病毒(ChickenInfectiousAnaemiaVirus.CIAV)后的抗體監(jiān)測2原理間接免疫熒光試驗(yàn)，以病毒感染細(xì)胞作抗原，與待檢血清中的特異抗體結(jié)合，再與熒光色素標(biāo)記的抗抗體結(jié)合.形成抗原-抗體-抗抗體復(fù)合物。熒光色素在紫外光或藍(lán)紫光的作用下，激發(fā)出可見的熒光因此出現(xiàn)熒光就說明標(biāo)記物的存在，同時(shí)也反映了特異性抗體的存在。常采用已知抗原及熒光色素標(biāo)記的抗抗體檢測相應(yīng)的抗體。3試驗(yàn)和器材3.1試劑3.1.1陰性、陽性血清。3.1.2被檢血清。3.1.3PBS(O.01M、pH7.2)。3.1.4FITC-免抗雞IgG(按說明稀釋使用)3.1.5緩沖廿油。3.2材料3.2.1濕盒。3.2.2培養(yǎng)箱。3.2.3炎光顯微鏡。操作程序4.1感染細(xì)胞的制備用MDCC-MSB-1細(xì)胞制備雞傳染性貧血病毒感染細(xì)胞及未感染細(xì)胞(病毒培養(yǎng)技術(shù)參見有關(guān)文獻(xiàn)）4.2抗原片的制備4.2.1收集培養(yǎng)48h的細(xì)胞培養(yǎng)物,1500r/min離心10min,棄上清液.用PBS洗滌細(xì)胞沉淀物三歡，以少量PBS重懸細(xì)胞。4.2.2取10“L細(xì)胞懸液