標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 19440-2004 禽流感病毒NASBA檢測方法》這一標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了利用核糖核酸酶H（RNase H）缺失的逆轉(zhuǎn)錄酶和T7 RNA聚合酶進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增檢測禽流感病毒的特定方法學(xué)要求、操作步驟、質(zhì)量控制以及結(jié)果判定準(zhǔn)則。然而，您提供的對比項(xiàng)似乎不完整，沒有明確指出要與哪個(gè)具體的標(biāo)準(zhǔn)或方法進(jìn)行比較。不過，基于該標(biāo)準(zhǔn)本身的內(nèi)容，我可以概述其關(guān)鍵特點(diǎn)和可能相對于傳統(tǒng)或先前方法的一些潛在變化方向，盡管無法直接對比某個(gè)未指明的具體標(biāo)準(zhǔn)或方法。

該標(biāo)準(zhǔn)引入的NASBA（Nucleic Acid Sequence Based Amplification，基于核酸序列的擴(kuò)增）技術(shù)，相比于早期的病毒檢測技術(shù)，如常規(guī)PCR（聚合酶鏈反應(yīng)），有以下幾點(diǎn)顯著不同和優(yōu)勢：

  1. 等溫?cái)U(kuò)增：NASBA技術(shù)在恒定溫度下即可完成核酸的擴(kuò)增，通常約為41°C，無需通過變溫循環(huán)來實(shí)現(xiàn)DNA的復(fù)制，這簡化了設(shè)備需求，提高了檢測速度和便捷性。

  2. RNA直接檢測：該方法直接針對病毒RNA進(jìn)行擴(kuò)增，無需先通過反轉(zhuǎn)錄將RNA轉(zhuǎn)換為DNA，這對于快速識(shí)別和應(yīng)對RNA病毒如禽流感病毒尤為重要。

  3. 信號(hào)放大：NASBA過程中，通過T7 RNA聚合酶產(chǎn)生的RNA產(chǎn)物可以作為模板自我復(fù)制，形成大量RNA拷貝，極大增強(qiáng)了檢測靈敏度。

  4. 適用性廣泛：適用于多種樣本類型，包括臨床樣本如咽拭子、組織樣本等，提高了檢測的靈活性和實(shí)用性。

  5. 實(shí)時(shí)監(jiān)測：可與分子信標(biāo)或熒光探針結(jié)合，實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測，快速獲得檢測結(jié)果，減少了人為操作和結(jié)果判讀的時(shí)間。

  6. 質(zhì)量控制嚴(yán)格：標(biāo)準(zhǔn)中包含了詳細(xì)的質(zhì)控措施，確保檢測結(jié)果的可靠性和重復(fù)性。


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  • 2004-02-14 頒布
  • 2004-02-15 實(shí)施
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文檔簡介

ICS11.220B41中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19440—2004禽流感病毒NASBA檢測方法ProtocolofdetectingavianinfluenzavirususingNASBA2004-02-14發(fā)布2004-02-15實(shí)施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)

GB/T19440-2004前禽流感由正粘病毒科流感病毒屬中A型流感病毒引起.其中高致病性禽流感因其傳播快、危害大，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為A類疾病,我國將其列為一類動(dòng)物疫病依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)(NASBA)檢測禽流感病毒的敏感性與經(jīng)典的雞胚病原分離方法相當(dāng).并具有檢測速度快、特異性強(qiáng)、與雞旺病原分離方法符合率高、易于操作的特點(diǎn)。本標(biāo)準(zhǔn)是在綜合我國科研成果的基礎(chǔ)上,參考OIE《診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊》(2000年版)并結(jié)合我國現(xiàn)有動(dòng)物衛(wèi)生法規(guī)及農(nóng)業(yè)部對禽流感的相關(guān)政策和措施制定的。本標(biāo)準(zhǔn)附錄A、附錄B、附錄C為規(guī)范性附錄,附錄D為資料性附錄本標(biāo)準(zhǔn)由上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局和中華人民共和國上海出入境檢驗(yàn)檢疫局提出。本標(biāo)準(zhǔn)由國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中華人民共和國上海出入境檢驗(yàn)檢疫局、上海市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局、香港基因品片開發(fā)有限公司。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：單松華、劉樂庭、倪旦紅、胡永強(qiáng)、李樹清

GB/T19440—2004禽流感病毒NASBA檢測方法范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了NASBA快速檢測禽流感病毒技術(shù)規(guī)范的材料準(zhǔn)備、操作方法和結(jié)果判定本標(biāo)準(zhǔn)適用于禽類、禽肉產(chǎn)品中所有亞型禽流感病毒的快速檢測、診斷。規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn).然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T18936—2003高致病性禽流感診斷技術(shù)原理NASBA（Nueleicacidsequence-basedamplification·NASBA·依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)）是一項(xiàng)連續(xù)、等溫、基于酶反應(yīng)的核酸擴(kuò)增技術(shù)。該技術(shù)使用三種酶(反轉(zhuǎn)錄酶、核糖核酸酶H、喔菌體T7核糖核酸聚合酶)和兩條寡核苷酸引物。上游引物5'末端含有喔菌體T7的依賴于DNA的RNA聚合酶的啟動(dòng)子序列，下游引物的5°末端含有和釘標(biāo)電化學(xué)發(fā)光檢測探針互補(bǔ)的序列。在擴(kuò)增步驃中.兩個(gè)5端都整合進(jìn)擴(kuò)增序列中.這樣既成為產(chǎn)生互補(bǔ)RNA序列的模板.又能特異性結(jié)合檢測步驃中的ECL探針。擴(kuò)增底物與ECL探針形成復(fù)合物，攜帶該復(fù)合物的磁珠被電極的表面磁性捕獲。電極上的電壓引起電化學(xué)發(fā)光(ECL)反應(yīng)。已雜交上的釘標(biāo)磁珠發(fā)出的光和擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)生的RNA擴(kuò)增產(chǎn)物總量成比例對應(yīng)。材料準(zhǔn)備武驗(yàn)環(huán)境干凈的環(huán)境,最好分區(qū)。分為核酸提取、核酸擴(kuò)增和核酸檢測三個(gè)區(qū)4.2器材采用常規(guī)的分子生物學(xué)器材，包括：一次性手套、移液器(量程5L到200L）、槍頭、無RNA酶的1.5mL塑料離心管、1.5mL離心管架、5mL試管架、旋渦振蕩器、計(jì)時(shí)器、高速臺(tái)式離心機(jī)、溫度計(jì)(精度士2C)、加熱器、水浴鍋、5mL聚丙烯試管(VWR)、封口膜如果采用ECL方法，需要NucliSens閱讀器或者其他等同儀器如果采用ELISA方法·需要酶標(biāo)儀4.3物上游引物AATTCTAATACGACTCACTATAGGGAGAAGGACA/GGGCATTCCTTGGACAAA（G/TCGTCTA下游引物GATGCAAGGTCGCATATGAGGAGACTTCTAACCGAGGTCGAAACGTA4.4檢測試劑所有檢測試劑在使用前，使其達(dá)到室溫a裂解緩沖液：5mol/L異硫氰酸

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