標(biāo)準(zhǔn)解讀

《GB/T 19915.9-2005 豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法》是一項由中國發(fā)布的國家標(biāo)準(zhǔn)，旨在為豬鏈球菌2型中特定的溶血素基因提供一種標(biāo)準(zhǔn)化的檢測手段。這份標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了使用聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR）技術(shù)來識別和檢測豬鏈球菌2型中溶血素基因的方法步驟、所需材料、操作條件以及質(zhì)量控制等方面的要求。下面是該標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容的具體闡釋：

  1. 適用范圍：本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬及其相關(guān)產(chǎn)品中豬鏈球菌2型溶血素基因的存在與否及含量的檢測，對豬鏈球菌病的診斷、疫情監(jiān)測及防控具有重要意義。

  2. 檢測原理：利用PCR技術(shù)的高靈敏度和特異性，通過設(shè)計針對豬鏈球菌2型溶血素基因的特異性引物，在體外條件下對目標(biāo)DNA序列進行選擇性擴增，從而實現(xiàn)對該基因的定性或定量檢測。

  3. 試劑與材料：標(biāo)準(zhǔn)明確了實施PCR檢測所需的各類化學(xué)試劑、酶制劑、引物序列以及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)品的具體要求，確保實驗的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

  4. 樣本采集與處理：詳細(xì)說明了如何從豬的組織樣本、血液或其他相關(guān)產(chǎn)品中正確采集樣本，并介紹樣本預(yù)處理、核酸提取和純化的方法，以保證檢測結(jié)果的可靠性。

  5. PCR反應(yīng)條件：具體規(guī)定了PCR擴增的循環(huán)參數(shù)，包括變性溫度、退火溫度、延伸溫度以及每個階段的時間設(shè)置，這些參數(shù)是根據(jù)豬鏈球菌2型溶血素基因的特點優(yōu)化得出的。

  6. 結(jié)果判定：描述了通過凝膠電泳或熒光定量PCR等方法觀察和分析PCR產(chǎn)物，以判斷樣本中目標(biāo)基因是否存在及大致濃度的過程。同時，提供了陽性和陰性對照的標(biāo)準(zhǔn)，以驗證實驗的有效性和排除假陽性或假陰性結(jié)果。

  7. 質(zhì)量控制：強調(diào)了實驗過程中應(yīng)采取的質(zhì)控措施，如使用已知結(jié)果的對照樣本、定期校準(zhǔn)儀器、監(jiān)控實驗過程中的污染風(fēng)險等，以確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

  8. 實驗室要求：對執(zhí)行該檢測方法的實驗室環(huán)境、設(shè)備、人員資質(zhì)等提出了具體要求，確保實驗條件滿足檢測標(biāo)準(zhǔn)的需要。


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  • 現(xiàn)行
  • 正在執(zhí)行有效
  • 2005-09-27 頒布
  • 2005-11-01 實施
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GB/T 19915.9-2005豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法_第1頁
GB/T 19915.9-2005豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法_第2頁
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文檔簡介

ICS07.100.30C53中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T19915.9-2005豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法DetectionmethodofthehemolysingeneforSireptococcussuistype2byPCR2005-09-27發(fā)布2005-11-01實施中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會

中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法GB/T19915.9-2005中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版發(fā)行北京西城區(qū)復(fù)興門外三里河北街16號郵政編碼：100045電話：63787337637874472005年12月第一版2005年12月電子版制作書號：155066·1-26848版權(quán)專有侵權(quán)必究舉報電話：（010)68533533

GB/T19915.9-2005豬鏈球菌2型是鏈球菌屬的成員，其致病菌株可致豬鏈球菌病,引起豬敗血癥、腦膜炎等。近年來隨著我國養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展.該病流行日趨嚴(yán)重.給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大損失。人可通過傷口感染該菌,并導(dǎo)致死亡。溶血素是豬鏈球菌2型一種重要毒力因子。通過檢測豬及其產(chǎn)品中分離菌林是否含有豬鏈球菌2型溶血素基因，可以作為區(qū)分豬鏈球菌2型無毒菌株與致病菌株的一個指標(biāo)，特制定本標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為規(guī)范性附錄本標(biāo)準(zhǔn)由國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會提出本標(biāo)準(zhǔn)由全國動物防疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口本標(biāo)準(zhǔn)主要起草單位：中華人民共和國江蘇出入境檢驗檢疫局、中國檢驗檢疫科學(xué)研究院。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：陳國強、唐泰山、張敬友、姜炭、王凱民、張常印、林祥梅、吳紹強、劉建、韓雪清賈廣樂、梅琳、

GB/T19915.9-2005豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測方法1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬鏈球菌2型溶血素基因PCR檢測的操作方法本標(biāo)準(zhǔn)適用于豬及其產(chǎn)品中分離菌株的豬鏈球菌2型溶血素基因的檢測2規(guī)范性引用文件下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勒誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而，鼓勵根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。GB/T6682—1992分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)3.1褚鏈球菌2型Srreplococcussuistype2豬鏈球菌是屬于鏈球菌屬的一種細(xì)菌,根據(jù)其莢膜多糖抗原的差異.可分為1～34及1/2共35個血清型。豬鏈球菌2型是豬鏈球菌的一個血清型.不僅對豬致病性很強，而且可以感染特定的人群.是·種重要的人畜共患病病原菌?？s略語PCRPolymerasechainreaction·聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)DNAdeoxyribonucleicacid,脫氧核糖核酸dNTPdeoxyribonucleosidetriphosphate.脫氧核苔酸三磷酸bpbasepair·堿基對5測定方法5.1方法提要以可疑細(xì)菌培養(yǎng)物提取的核酸,作為DNA模板進行PCR擴增，瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產(chǎn)物,與標(biāo)準(zhǔn)分子量標(biāo)記比較，來確定擴增產(chǎn)物的大小5.2試劑和材料除另有規(guī)定，所用試劑均為分析純，水為符合GB/T6682-1992的滅菌雙蒸水5.2.1豬鏈球菌2型溶血素基因PCR反應(yīng)混合物：10×PCR緩沖液2.5gL、25mmol/LMgCl2.0gL、2.5mmol/LdNTP2gL、上下游引物各1gL,用雙蒸水補至20L。引物序列如下.其目的片段長度為495bp。slyl:5'CCC.AAG.TTC.A

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