第6章各類化學(xué)成分分析1

1第六章

各類化學(xué)成分分析2講授內(nèi)容第1節(jié)生物堿類成分分析第2節(jié)黃酮類成分分析第3節(jié)三萜皂苷類成分分析第4節(jié)醌類成分分析第5節(jié)揮發(fā)性成分分析第6節(jié)木脂素類成分分析第7節(jié)其它類型成分分析3第一節(jié)生物堿類成分分析概述理化性質(zhì)鑒別含量測(cè)定4一、概述生物堿是生物界除生物體必需的含氮化合物（如氨基酸、蛋白質(zhì)和B族維生素等）之外的所有含氮有機(jī)化合物，因其結(jié)構(gòu)中氮原子上的未共享電子對(duì)而大多具有堿性。含生物堿成分的常用中藥：山豆根、制川烏、馬錢(qián)子、延胡索、苦參、麻黃、黃連、黃柏、防己等小檗堿麻黃堿烏頭堿水蘇堿6二、理化性質(zhì)物理性狀溶解性紫外光譜特征顯色反應(yīng)7物理性狀液體狀的生物堿及個(gè)別小分子生物堿有揮發(fā)性甚至升華性如：麻黃堿具有揮發(fā)性咖啡因具有升華性生物堿通常無(wú)色，但有長(zhǎng)共軛結(jié)構(gòu)，并有助色團(tuán)的，可顯不同顏色。如：小檗堿黃色8溶解性大多數(shù)生物堿難溶于水，易溶于氯仿、乙醚、乙醇、丙酮及苯等有機(jī)溶劑與酸結(jié)合成鹽生水溶性增加，但酸不同，生成的鹽水溶性有差異季胺型生物堿、有氮氧配位鍵的生物堿易溶于水。9溶解性液體生物堿及一些小分子固體生物堿則既溶于水也可溶于有機(jī)溶劑含有酸性官能團(tuán)或酯鍵的生物堿還可溶于一些堿液或熱苛性堿液10顯色反應(yīng)生物堿在一定pH條件下與一些酸性染料（多為磺酸肽類）生成有色配合物，可被氯仿等有機(jī)溶劑定量提出。結(jié)構(gòu)中具有酯鍵的酯堿，如：烏頭堿可與異羥肟酸鐵試劑反應(yīng)產(chǎn)生紫紅色11紫外光譜特征結(jié)構(gòu)中具有共軛體系的生物堿均有紫外吸收。結(jié)構(gòu)中的氮原子與發(fā)色團(tuán)直接連接或參與發(fā)色團(tuán)的生物堿，其吸收峰位置與測(cè)定時(shí)溶劑的pH值有關(guān)。12三、鑒別沉淀法薄層色譜法氣相色譜法高效液相色譜法一般理化鑒別色譜鑒別131、沉淀反應(yīng)大多數(shù)生物堿在酸性水溶液可與某些試劑生成不溶于水的復(fù)鹽或分子復(fù)合物。酸性aq：KI-I2(棕紅↓)；BiI3·KI(橘紅～黃↓)；HgI2·2KI(類白↓)；硫氰酸鉻銨(雷氏銨鹽NH4[Cr(NH3)2(SCN)4](紅↓)中性：苦味酸(三硝基苯酚)(黃↓)中藥水浸液中蛋白質(zhì)、多肽和鞣質(zhì)等成分，也可與生物堿沉淀試劑生成沉淀，需排除干擾，防止出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。季銨鹽↓劑142薄層色譜法吸附劑：硅膠、氧化鋁展開(kāi)劑：多用氯仿、苯等低極性溶劑，加入其它溶劑調(diào)整展開(kāi)劑的極性。（由于硅膠顯弱酸性，強(qiáng)堿性的生物堿在硅膠板上能形成鹽，使Rf值很小或拖尾，形成復(fù)斑。在硅膠吸附薄層中，常用堿性系統(tǒng)或在堿性環(huán)境下展開(kāi)。）顯色劑：改良碘化鉍鉀試劑，有時(shí)噴碘化鉍鉀試劑后再噴硝酸鈉試劑，可使樣品斑點(diǎn)更清晰；亦可用碘蒸氣、硫酸鈰、碘鉑酸等。15例：三妙丸中黃柏及小檗堿的鑒別

(蒼術(shù)、黃柏、牛膝)

取三妙丸粉末0.1g,加乙醚10ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，棄去乙醚液，殘?jiān)蛹状?ml，超聲處理15分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材0.1g，同制成對(duì)照藥材溶液。再取鹽酸小檗堿對(duì)照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取供試品溶液2ml、對(duì)照藥材溶液與對(duì)照品溶液各1ml，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試劑(12∶6∶3∶3∶1)為展開(kāi)劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(365nm)檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的一個(gè)黃色熒光斑點(diǎn)。162紙色譜法可用于生物堿鹽或游離堿的鑒別。主要是以水為固定相的正相紙色譜法，分離效果常取決于流動(dòng)相的性質(zhì)。BAW系統(tǒng)顯色劑：基本和薄層色譜法相同，但含硫酸的試劑不適用。173高效液相色譜法依據(jù)：tR條件不同時(shí)，可已知品作內(nèi)標(biāo)，采用峰面積或峰高加大法優(yōu)點(diǎn)：快速，靈敏、微量等18四、含量測(cè)定生物堿的含量測(cè)定方法早期常用酸堿滴定法、沉淀滴定法等經(jīng)典的化學(xué)方法，近年來(lái)多采用分光光度法、薄層色譜法及高效液相色譜法等（一）總生物堿的含量測(cè)定（二）生物堿類單體成分的含量測(cè)定19（一）總生物堿的含量測(cè)定直接測(cè)定法重量分析法酸堿滴定法離子對(duì)萃取比色法酸染料比色法苦味酸鹽比色法雷氏鹽比色法異羥肟酸鐵比色法化學(xué)分析法分光光度法本法適用于處方藥味較少、內(nèi)成分較簡(jiǎn)單的中藥制劑20酸堿滴定分析法強(qiáng)堿滴定生物堿鹽時(shí)，在70％～90％的乙醇介質(zhì)中終點(diǎn)比在水中明顯，因此常將生物堿鹽溶于70％～90％乙醇，再用標(biāo)準(zhǔn)堿-乙醇液滴定。若選擇的溶劑及指示終點(diǎn)方法合適，也可用非水滴定法進(jìn)行。21酸堿滴定分析法指示終點(diǎn)方法電位法指示劑水溶液中非水溶液溴酚藍(lán)甲基紅溴甲酚藍(lán)酚酞溴酚藍(lán)甲基黃結(jié)晶紫凈化-中性氧化鋁；空白試驗(yàn)22例止喘靈注射液中總生物堿的含量測(cè)定—酸堿滴定法處方麻黃洋金花苦杏仁連翹方法精密量取止喘靈注射液10ml，置分液漏斗中，加1mol/L氫氧化鈉溶液0.5ml，用三氯甲烷提取4次，（10ml、10ml、5ml、5ml）合并三氯甲烷液，置具塞錐形瓶中，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）10ml及新沸過(guò)的冷水10ml，充分振搖，加茜素黃酸鈉指示劑1-2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定至淡紅色，并將滴定結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正。每1ml硫酸滴定液相當(dāng)于3.305mg的麻黃堿（C10H15NO）。變色范圍：3.7～5.2黃→紫23重量分析法重量分析法提取重量法沉淀法適用：混合堿、未知結(jié)構(gòu)、M差異大優(yōu)點(diǎn)：簡(jiǎn)便、不用換算因數(shù)無(wú)需知M缺點(diǎn)：揮發(fā)性、堿性條件下可水解生物堿不適用；取樣大、操作易乳化、費(fèi)時(shí)優(yōu)點(diǎn)：取樣少、靈敏度高缺點(diǎn)：計(jì)算復(fù)雜、操作繁瑣24例昆明山海棠片中總生物堿成分的含量測(cè)定—重量法處方昆明山海棠取昆明山海棠片60片，除去糖衣，研細(xì)，取約相當(dāng)于25片的量，精密稱定，置200ml錐形瓶中，加適量硅藻土（每1g中加入硅藻±0.2g），混勻，加乙醇70ml，加熱回流40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾渣再加乙醇50ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，合并濾液，置水浴上蒸干，殘?jiān)欲}酸溶液（1→100）30ml，置水浴上攪拌使溶解，放冷，濾過(guò)，殘?jiān)儆名}酸溶液（1→200）同法提取3次（20ml、15ml、15ml），合并濾液溶于分液漏斗中，加氨試劑使溶液呈堿性，用乙醚振搖提取4次（40ml、30ml、25ml、25ml），合并乙醚液，用水振搖洗滌2次，每次10ml，乙醚液濾過(guò)，濾液置已在100℃干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在低溫水浴上蒸去乙醚，殘?jiān)屑尤肷僭S無(wú)水乙醇，蒸干，在100℃干燥至恒重，稱定重量，計(jì)算，即得。252分光光度法-直接測(cè)定法不經(jīng)過(guò)化學(xué)反應(yīng)，利用生物堿物質(zhì)自身的光吸收直接進(jìn)行比色測(cè)定的方法。一般用于藥味較少，干擾不大的中藥制劑中總生物堿的含量測(cè)定。如：戊己丸26（2）比色法生物堿本身具有的顏色與氧化劑產(chǎn)生顏色因所具有的功能基與試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色根據(jù)生物堿的通性與酸性染料、雷氏鹽、苦味酸鹽等結(jié)合成有色化合物，并能溶于有機(jī)溶劑中的271）酸性染料比色法應(yīng)用本法的關(guān)鍵在于介質(zhì)的pH、酸性染料的種類和有機(jī)溶劑的選擇。常用的酸性燃料：甲基橙溴香草酚藍(lán)（BTB）溴甲酚綠等281）酸性染料比色法-基本原理291）酸性染料比色法pH的選擇：根據(jù)染料的性質(zhì)及生物堿的堿性（pKb

）大小確定。一元5.2～6.4二元3.0～5.8常用的酸性染料：甲基橙、溴香草酚藍(lán)（BTB）、溴甲酚綠等有機(jī)溶劑的選擇原則：根據(jù)離子對(duì)與有機(jī)相能否形成氫鍵以及形成氫鍵能力的強(qiáng)弱，氯仿等是常用的提取溶劑。在提取過(guò)程中，嚴(yán)防水分混入有機(jī)溶劑。30例風(fēng)濕骨痛膠囊中烏頭總生物堿的含量測(cè)定——酸性染料比色法方法對(duì)照品溶液制備精密稱取經(jīng)1050C干燥至恒重的烏頭堿對(duì)照品10mg，至100ml量瓶中，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml中含烏頭堿0.1mg）。31標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分別置于分液漏斗中，依次精密加入三氯甲烷20ml，再精密加入pH3.0醋酸鹽緩沖液（稱取無(wú)水醋酸鈉0.15g，加水使溶解，加冰醋酸5.6ml，用水稀釋至500ml，搖勻，并在pH計(jì)上校正）10ml和0.1%溴甲酚綠（取溴甲酚綠0.2g加0.05mol/L氫氧化鈉溶液3.2ml使溶解，用水稀釋至200ml，搖勻）2ml，強(qiáng)力振搖5分鐘，靜置20分鐘，分取三氯甲烷液，用干燥濾紙濾過(guò)，以相應(yīng)試劑為空白，濾液照分光光度法，分別在412nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。32測(cè)定法取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，研細(xì)，取1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醚-三氯甲烷-無(wú)水乙醇（16∶8∶1）的混合溶液25ml和氨試液1.5ml，搖勻，稱定重量，于快速混勻器上振蕩三次，每次2分鐘，放置過(guò)夜，稱定重量，用上述混合溶液補(bǔ)足減失的重量，再于快速混勻器上振蕩2分鐘，靜置，傾取上清液，精密量取5.0ml，置分液漏斗中，加乙醚5ml，用0.05mol/L的硫酸溶液提取4次，每次10ml，分取硫酸液，濾過(guò)，合并濾液，置另一分液漏斗中，33加濃氨試劑4ml，搖勻，用三氯甲烷提取4次，每次10ml，分取三氯甲烷層，濾過(guò)，合并濾液，蒸干，殘?jiān)?05℃加熱1小時(shí)，取出，放冷，加三氯甲烷分次溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加三氯甲烷至刻度，搖勻，精密量取20ml，置分液漏斗中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“精密加入pH3.0醋酸鹽緩沖液10.00ml”起，依法測(cè)定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中烏頭堿的量（μg/ml）計(jì)算，即得。

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該法為酸性染料分光光度法，其水相pH的選擇是離子對(duì)萃取法取得成功與否的關(guān)鍵，風(fēng)濕骨痛膠囊測(cè)定時(shí)的pH是分別取烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)液以pH2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、5.8、6.0、6.2的緩沖液進(jìn)行試驗(yàn)結(jié)果，表明以pH3.0較為適宜，在該條件下測(cè)定供試液吸收度較大，指示液空白試驗(yàn)吸收度較小，且呈色穩(wěn)定性較好。352）苦味酸鹽比色法在弱酸性或中性溶液中生物堿可與苦味酸定量生成苦味酸鹽沉淀，該沉淀可溶于氯仿等有機(jī)溶劑，也可以在堿性條件下解離釋放出生物堿和苦味酸。363）雷氏鹽比色法雷氏鹽在酸性介質(zhì)中可與生物堿類成分定量地生成難溶于水的有色合物。將沉淀過(guò)濾洗凈后溶于丙酮（或甲醇），直接比色法測(cè)定，換算成生物堿含量。也可精密加入過(guò)量的雷氏鹽試劑，濾除生成的生物堿雷氏鹽沉淀，將濾液在520～526nm（溶于甲醇時(shí)，其λmax為427nm）處進(jìn)行比色，測(cè)定殘存的過(guò)量的雷氏鹽含量，間接計(jì)算生物堿的含量。37硫氰化鉻銨在丙酮中的摩爾吸收系數(shù)ε=106．5（單鹽），故可根據(jù)其吸收值A(chǔ)按下式直接測(cè)定而不需繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

W一被測(cè)物重量（mg）M一被測(cè)物質(zhì)的分子量V一溶解沉淀所用丙酮的ml數(shù)38雷氏鹽比色法注意事項(xiàng)

雷氏鹽的水溶液在室溫可分解，故用時(shí)應(yīng)新鮮配制，沉淀也需在低溫進(jìn)行供試品如為稀的水溶液（如注射劑等），沉淀前應(yīng)濃縮,對(duì)于中藥制劑含有干擾物質(zhì)時(shí)，應(yīng)事先經(jīng)過(guò)純化處理雷氏鹽的丙酮或丙酮一水溶液的吸收值，隨時(shí)間而有變化，故應(yīng)盡快地測(cè)定。39處方益母草當(dāng)歸人參黃芪何首烏桃仁蒲黃熟地黃香附昆布白術(shù)黑木耳對(duì)照品溶液制備取鹽酸水蘇堿對(duì)照品適量，精密稱定，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml含1mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取裝量差異下的內(nèi)容物，研細(xì)，取12g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液25ml，置50ml燒杯中，置水浴上蒸干，精密加入0.1mol/L鹽酸溶液10ml使溶解，即得。

例產(chǎn)婦康顆粒中益母草總生物堿的含量測(cè)定—雷氏鹽比色法40測(cè)定法取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液，各加活性炭0.5g，置水浴上加入1分鐘，攪拌，濾過(guò)，濾液分別置25ml量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液10ml分次洗滌燒杯和濾器，洗滌液并入同一量瓶中；另取0.1mol/L鹽酸溶液20ml置另一25ml量瓶中，作為空白溶液。各精密加新制的2%硫氰酸鉻銨溶液3ml，搖勻，加0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中放置1小時(shí)，用干燥濾紙濾過(guò)，取續(xù)濾液，以0.1mol/L鹽酸溶液為空白，在525nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸收度，用空白溶液的吸收度分別減去對(duì)照品與供試品的吸收度，計(jì)算，即得。414）異羥肟酸鐵比色法含有酯鍵結(jié)構(gòu)的生物堿，在堿性介質(zhì)中加熱，酯鍵水解，產(chǎn)生的羧基與羥胺反應(yīng)生成異羥肟酸，再與Fe3＋生成紫紅色的配合物（異羥肟酸鐵），在一定濃度下符合Beer定律，可用比色法進(jìn)行含量測(cè)定。42（二）生物堿類單體成分的含量測(cè)定1薄層色譜法2高效液相色譜法3氣相色譜法431薄層色譜法生物堿不具有紫外吸收或揮發(fā)性時(shí)可用本法測(cè)定。吸附劑、展開(kāi)劑及顯色方法與鑒別相似，但要求比鑒別嚴(yán)格。注意：使用改良碘化鉍鉀等作為顯色劑時(shí)，必須完全揮干展開(kāi)劑后（尤其在堿性環(huán)境下展開(kāi)時(shí)）才可噴灑，否則背景深，反差小，影響測(cè)定。44例九分散中士的寧成分的含量測(cè)定—薄層掃描法處方馬錢(qián)子粉麻黃乳香（制）沒(méi)藥（制）取本品約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加三氯甲烷20ml與濃氨試液1ml，輕輕搖勻，稱重，于室溫放置24小時(shí)，再稱重，補(bǔ)足三氯甲烷減失的重量，充分振搖，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液10ml，用硫酸溶液（3→100）分次提取，至生物堿提盡，合并硫酸液，置另一分液漏斗中，加濃氨試液使呈堿性，用三氯甲烷分次提取，合并液，蒸干，放冷，殘?jiān)芯芗尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取士的寧對(duì)照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.4mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲苯一丙酮一乙醇一濃氨試液（16∶12∶1∶4）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。照薄層色譜法進(jìn)行掃描，波長(zhǎng)：λs=254nm，λR=325nm，測(cè)量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算，即得。452高效液相色譜法以反相高效液相色譜法應(yīng)用較多。在反相高效液相色譜中，由于硅膠表面殘留硅羥基的影響，使生物堿分析易產(chǎn)生保留時(shí)間延長(zhǎng)、峰形變寬、拖尾；可采取改進(jìn)流動(dòng)相、固定相等措施以克服游離硅羥基的影響，滿足定量分析的要求。中藥制劑中生物堿成分進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定時(shí)，使用較多的是紫外檢測(cè)器。46例小孩清熱止咳口服液中鹽酸麻黃堿含量測(cè)定—高效液相色譜法處方麻黃、苦杏仁、石膏、甘草等色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0.1%磷酸溶液(含0.1%三乙胺)（3﹕97）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為205nm。理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。對(duì)照品溶液的制備取鹽酸麻黃堿對(duì)照品適量，精密稱定，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml含45μg的溶液，即得。47供試品溶液的制備精密量取本品5ml，加水10ml及濃氨水0.5ml用乙醚提取5次（30ml，30ml，20ml，20ml，20ml），合并乙醚液，加鹽酸乙醇溶液（1→20）2ml，混勻，低溫回收溶劑至干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。483氣相色譜法只適用于有揮發(fā)性、遇熱不分解的生物堿類。生物堿鹽在急速加熱過(guò)程中產(chǎn)生的酸對(duì)色譜柱和檢測(cè)器不利，應(yīng)該注意。制備供試品溶液時(shí)一般采用冷提取，凈化過(guò)程也要避免加熱，以防止成分流失，最后需用氯仿等低極性有機(jī)溶劑為溶劑制備成供試液。49第二節(jié)黃酮類成分分析概述一般性質(zhì)鑒別含量測(cè)定50一、概述黃酮類化合物是指基本母核為2-苯基色原酮類化合物。現(xiàn)泛指兩苯環(huán)通過(guò)中央三碳鍵相互聯(lián)結(jié)而成的一系列化合物。在植物體內(nèi)大部分與糖結(jié)合成苷，一部分以游離形式存在。槲皮素異槲皮素表兒茶素金絲桃苷52二、一般性質(zhì)溶解度酸堿性紫外光譜特征53溶解度黃酮類化合物的溶解度因結(jié)構(gòu)及存在狀態(tài)（苷或苷元，單糖苷、雙糖或三糖苷）不同而有很大差異。游離苷元難溶或不溶于水，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等有機(jī)溶劑及稀堿液中。黃酮苷一般易溶于水、甲醇、乙醇等強(qiáng)極性溶劑中，但難溶或不溶與苯、氯仿等。54酸堿性酸性：黃酮類化合物因分子中多有羥基，故顯酸性，可溶于堿性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。堿性：氧原子的性質(zhì)：黃酮類化合物分子中γ-吡喃酮環(huán)上的1－位氧原子，因有未共用的電子對(duì)，故表現(xiàn)出微弱的堿性，可與強(qiáng)無(wú)機(jī)酸，如濃硫酸、鹽酸等生成鹽，常表現(xiàn)出特殊的顏色，可用于鑒別。生成的鹽極不穩(wěn)定，加水后即可分解。55顯色反應(yīng)黃酮類化合物的顏色反應(yīng)多與分子中的酚羥基及γ-吡喃酮環(huán)有關(guān)。1還原反應(yīng)2與金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)561還原反應(yīng)常用：與鹽酸-鎂粉（或鋅粉）的反應(yīng)。反應(yīng)時(shí)多數(shù)黃酮、黃酮醇、二氫黃酮及二氫黃酮醇類化合物顯橙紅-紫紅色，少數(shù)顯紫-藍(lán)色，且B環(huán)上有-OH或-OCH3取代時(shí)，顏色即隨之加深。查耳酮、橙酮、兒茶素類則不發(fā)生色變?；ㄇ嗨丶安糠殖韧槎仍趩渭儩恹}酸下也會(huì)發(fā)生色變，須預(yù)先作一對(duì)照，以便排除。572與金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)黃酮類化合物分子中有游離的3-OH、5-OH或鄰二酚羥基時(shí)可與Al3＋、Zr4+、Pb2＋、Sr2+等形成配合物，這些配合物有的產(chǎn)生熒光或顏色加深（如Al3＋、Zr4+），有的產(chǎn)生沉淀（如Pb2＋、Sr2+）。Al3＋：1%AlCl3或Al(NO3)3;黃色(λmax=415nm)，有熒光Pb2＋：1%PbAc2或堿式PbAc2；黃↓～紅↓，有熒光Zr4+：2%ZrOCl2的甲醇溶液；↑枸椽酸，5-OH黃酮的黃色aq顯著褪色；3-OH黃酮的aq呈鮮黃色58紫外光譜特征因有2-苯基色原酮的基本結(jié)構(gòu)，具有特定的紫外吸收峰，兩個(gè)較強(qiáng)的吸收帶：Ⅰ帶在300~400nm范圍內(nèi)，由B環(huán)桂皮?；?。Ⅱ帶在240～285nm范圍內(nèi)，由A環(huán)上的苯甲?；?。黃酮類化合物當(dāng)加入一些移位劑如甲醇鈉、醋酸鈉、氯化鋁等，可使最大吸收波長(zhǎng)發(fā)生位移。選擇性提高，可消除雜質(zhì)的干擾，有利于含量測(cè)定。59三、鑒別（一）顯色反應(yīng)（二）薄層色譜鑒別60（一）顯色反應(yīng)黃酮類化合物的顏色反應(yīng)多與分子中的酚羥基及γ-吡喃酮環(huán)有關(guān)。1還原反應(yīng)2與金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)611還原反應(yīng)-鹽酸-鎂粉（或鋅粉）的反應(yīng)方法為將甲醇或乙醇提取液5~10ml，加入幾滴濃鹽酸，然后加入少許鎂（或鋅）粉（必要時(shí)微熱），如果有黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇存在，數(shù)分鐘后即可出現(xiàn)橙色～紅色。此反應(yīng)要先加鹽酸再加鎂粉，因?yàn)橄窕ㄉ氐瘸煞衷趩渭兗欲}酸后就能產(chǎn)生顏色變化；為避免在該反應(yīng)中供試品液本身顏色的干擾，可注意觀察上升的泡沫(陽(yáng)性)62例牛黃解毒片（黃芩）的鑒別：取本品6片，研細(xì)，加乙醇10ml，溫?zé)?0分鐘，濾過(guò)，取濾液5ml，加鹽酸0.5ml與少量鎂粉，加熱，溶液顯紅色。632與金屬鹽類試劑的絡(luò)合反應(yīng)例銀黃注射液的鑒別：取本品1ml于試管中，加5%亞硝酸鈉溶液、10%硝酸鋁溶液各0.3ml，溶液呈黃色；另取注射液0.1ml，加水10ml，搖勻，取稀釋液2ml，加5%二氯氧鋯溶液1-2滴，溶液呈黃色，再加鹽酸1-2滴，顏色不褪。64（二）薄層色譜鑒別吸附劑：硅膠、聚酰胺、纖維素硅膠色譜分離弱極性化合物較好聚酰胺色譜分離含游離酚羥基的黃酮及其苷為佳纖維素薄層板則適用于分離多糖苷混合物顯色：采用在紫外光下觀察熒光和噴顯色劑相配合的方法。65例二陳丸中橙皮苷的鑒別處方陳皮半夏（制）茯苓甘草取本品5g，加甲醇30ml，置水浴上加熱回流30分鐘，濾過(guò)，濾液濃縮至約5ml，作為供試品溶液。另取橙皮苷對(duì)照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一用0.5%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水（100﹕17﹕13）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距約3cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20﹕10﹕1﹕1）的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距約8cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。66薄層板為氫氧化鈉溶液制備的硅膠G板，可有效地減少黃酮類成分在硅膠板上的拖尾現(xiàn)象；進(jìn)行二次展開(kāi)，可有效地增大極性黃酮類成分在硅膠G板上的分離度；三氯化鋁顯色后檢視熒光，有效地增大其檢測(cè)的靈敏度。67例雙黃連口服液中黃芩苷、綠原酸鑒別

處方金銀花黃芩連翹

取本品1ml，加75%乙醇溶液5ml，搖勻，作為供試品溶液。另取黃芩苷、綠原酸對(duì)照品，分別加75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液。吸取上述三種溶液各1~2μl，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以醋酸為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。68四、含量測(cè)定（一）總黃酮含量測(cè)定（二）黃酮類單體成分含量測(cè)定69（一）總黃酮含量測(cè)定1直接測(cè)定2比色法701直接測(cè)定黃酮類化合物具有特定的紫外吸收峰，含黃酮類化合物的原料藥及部分制劑經(jīng)一定的提取純化后，可直接于最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，以蘆丁等為對(duì)照品計(jì)算其含量。71燈盞細(xì)辛注射液中總咖啡酸酯的測(cè)定處方燈盞細(xì)辛提取物對(duì)照品溶液的制備取1,5-氧-二咖啡?？鼘幩釋?duì)照品適量，精密稱定，加0.1mol/L碳酸氫鈉溶液制成每1ml含總咖啡酸酯以1,5－氧－二咖啡?？鼘幩?0mg的溶液，即得。供試品溶液的制備精密量取本品1ml，置200ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。測(cè)定法分別取對(duì)照品溶液與供試品溶液，照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在305nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，即得。本品每1ml含總咖啡酸酯以1,5－氧－二咖啡?？鼘幩嵊?jì)，應(yīng)為2.0～3.0mg。722比色法黃酮類化合物顯色以后顯色物與背景最大吸收波長(zhǎng)差別較大，可消除背景（即陰性空白）的干擾，以提高本法的選擇性及靈敏度。常用鋁鹽作顯色試劑。73例消咳喘糖漿中總黃酮含量測(cè)定處方滿山紅對(duì)照品溶液的制備精密稱取在120℃減壓干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品30mg，置100ml量瓶中，加60%乙醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置50ml量