實驗十一細菌常用生理生化反應(yīng)實驗接種

實驗十一細菌常用生理生化反應(yīng)實驗接種第一頁，共十四頁，2022年，8月28日一實驗?zāi)康模睂W習各種生理生化反應(yīng)實驗的原理２學習鞏固各種生理生化反應(yīng)實驗的接種方式并熟練掌握各種接種方法第二頁，共十四頁，2022年，8月28日二實驗原理１葡萄糖發(fā)酵實驗原理：糖發(fā)酵試驗是常用的鑒別微生物的生化反應(yīng)，在腸道細菌的鑒定上尤為重要。絕大多數(shù)細菌都能利用糖類作為碳源和能源，但是它們在分解糖類物質(zhì)的能力上有很大的差異。有些細菌能分解某種糖產(chǎn)生有機酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和氣體（如氫氣、甲烷、二氧化碳等）；產(chǎn)酸后溴甲酚紫指示劑可由紫色pH(6.8)變?yōu)辄S色（pH5.2），產(chǎn)氣的細菌可使半固體培養(yǎng)基中存有氣泡．

參見課本第109頁第三頁，共十四頁，2022年，8月28日２V.P.反應(yīng)和甲基紅試驗原理：V.P.反應(yīng)：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧通過縮合和脫羧后轉(zhuǎn)變成乙酰甲基甲醇（亦稱三羥基丁酮），然后被還原為2，3－丁二醇，乙酰甲基甲醇在堿性條件下，被空氣中的氧氣氧化成為二乙酰，二乙酰再與蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用生成紅色化合物。此為V．P．正反應(yīng)（若培養(yǎng)基中胍基太少，可加少量肌酸等胍基化合物）。在試管中加入α-萘酚時，可促進反應(yīng)進行。甲基紅反應(yīng)：某些細菌在糖代謝過程中，將培養(yǎng)基中的糖先分解為丙酮酸，丙酮酸再被分解為甲酸、乙酸、乳酸等。有機酸的產(chǎn)生可由加入甲基紅指示劑的變色進行檢測。甲基紅變色范圍為pH4．2（紅）～6．3（黃）。細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，將培養(yǎng)液由原來的橘黃色變?yōu)榧t色，此為M．R．正反應(yīng)。參見課本第113頁和114頁。第四頁，共十四頁，2022年，8月28日３吲哚實驗原理：某些細菌能夠分解培養(yǎng)基內(nèi)蛋白胨中的色氨酸，產(chǎn)主吲哚，吲哚與對二甲基氨基苯甲醛結(jié)合。形成玫瑰吲哚，為紅色化合物，其反應(yīng)如下：參見課本第111頁。第五頁，共十四頁，2022年，8月28日４硝酸鹽還原實驗原理：

某些細菌能將培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽、氨和氮氣等。如果細菌能把培養(yǎng)基中的硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，當培養(yǎng)基中加入格利斯亞硝酸試劑時，則培養(yǎng)液呈粉紅色或紅色，為正反應(yīng)。如果在培養(yǎng)液中加入格利斯亞硝酸試劑后溶液不出現(xiàn)紅色，則有兩種可能性：1）細菌不能還原硝酸鹽，故培養(yǎng)后的培養(yǎng)液中仍有硝酸鹽存在，此為負反應(yīng)。

2）硝酸鹽被細菌還原為亞硝酸鹽后，亞硝酸鹽繼續(xù)被還原成氨和氮氣，故培養(yǎng)液中也沒有硝酸鹽存在，此反應(yīng)為正反應(yīng)。培養(yǎng)液中硝酸鹽存在與否可用下列方法檢查：在培養(yǎng)液中加入二笨胺試劑，如溶液呈藍色，則說明原來的硝酸鹽未被還原，此系負反應(yīng)。但如果在培養(yǎng)液中加入二苯胺試劑，溶液不呈現(xiàn)藍色，則說明培養(yǎng)液中己不存在硝酸鹽，故為正反應(yīng)。參見課本第119頁。第六頁，共十四頁，2022年，8月28日５檸檬酸鹽實驗原理：腸桿菌科各屬細菌利用檸檬酸的能力不同，有的菌可利用檸檬酸鈉作為碳源，有的則不能。某些菌分解檸檬酸形成CO2、由于培養(yǎng)基中鈉離子的存在而形成碳酸鈉，使培養(yǎng)基堿性增加，根據(jù)培養(yǎng)基中的指示劑變色情況來判斷試驗結(jié)果。指示劑可用1％的溴麝香草酚藍酒精溶液，變色范圍為pH6.3（黃）～7．6（藍）．參見課本第116頁。第七頁，共十四頁，2022年，8月28日６明膠水解實驗：某些細菌能分泌明膠酶分解明膠，產(chǎn)生小分子物質(zhì)。如果細菌具有分解明膠的能力，則平板培養(yǎng)基中的明膠被分解成小分子的物質(zhì)，在平板上加上蛋白凝固劑后，明膠被分解部分的培養(yǎng)基呈現(xiàn)透明的狀態(tài)，可以使菌落周圍出現(xiàn)透明圈。參見課本第108頁。第八頁，共十四頁，2022年，8月28日7淀粉水解實驗原理有些細菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解為麥芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再變藍色,在平板上加上碘液后，有淀粉的部分培養(yǎng)基遇淀粉變?yōu)樘m色,淀粉被分解部分的培養(yǎng)基呈現(xiàn)透明的狀態(tài)，可以使菌落周圍出現(xiàn)透明圈。參見課本第106頁。第九頁，共十四頁，2022年，8月28日8硫化氫產(chǎn)生實驗原理某些細菌能分解含硫氨基酸產(chǎn)生硫化氫，硫化氫遇重金屬鹽如鉛鹽、鐵鹽時則生成黑色硫化鉛或硫化鐵沉淀，從而可確定硫化氫的產(chǎn)生。在培養(yǎng)基中加入檸檬酸鐵銨,培養(yǎng)后觀察是否有黑色沉淀產(chǎn)生。培養(yǎng)基中加入硫代硫酸鈉是為了保持低的氧化還原電位,防止產(chǎn)生的硫化氫被空氣中的氧氧化,采用固體穿刺接種也是為了更好的保持低的氧化還原電位.參見課本第117頁。第十頁，共十四頁，2022年，8月28日三實驗器材1培養(yǎng)基：生理生化反應(yīng)用的各種平板,斜面,液體,半固體培養(yǎng)基.2器材：試管架，酒精燈，火柴，接種環(huán)(針)，牛皮紙,記號筆等.3菌種:大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌,變形桿菌,枯草桿菌,惡臭假單胞菌.第十一頁，共十四頁，2022年，8月28日四實驗操作(一)接種:標記按下表接種實驗名稱培養(yǎng)基接種方式菌種淀粉水解實驗淀粉培養(yǎng)基平板平板點種大腸桿菌,枯草桿菌明膠分解富氏明膠培養(yǎng)基平板點種大腸桿菌,枯草桿菌葡萄糖發(fā)酵葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基半固體穿刺大腸桿菌,惡臭假單胞菌檸檬酸鹽利用檸檬酸鹽培養(yǎng)基斜面接種大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌硫化氫產(chǎn)生實驗硫化氫產(chǎn)生實驗培養(yǎng)基固體穿刺大腸桿菌,變形桿菌吲哚產(chǎn)生實驗蛋白胨水培養(yǎng)基液體接種大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌甲基紅和伏普實驗葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基液體接種大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌硝酸鹽還原實驗硝酸鹽還原實驗培養(yǎng)基液體接種大腸桿菌,惡臭假單胞菌第十二頁，共十四頁，2022年，8月28日(二)培養(yǎng)將接種好的培養(yǎng)基放在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),兩天后觀察.兩天后(