酶的基本性質(zhì)實(shí)驗(yàn)

專業(yè)：實(shí)驗(yàn)報(bào)告 姓名：學(xué)號：日期：地點(diǎn)：課程名稱：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)（甲） 指導(dǎo)老師：同組學(xué)生：

成績：__________________一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅ū靥睿┤?shí)驗(yàn)材料與試劑（必填）五、操作方法和實(shí)驗(yàn)步驟（必填）七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析（必填）

二、實(shí)驗(yàn)容和原理（必填）四、實(shí)驗(yàn)器材與儀器（必填）六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄和處理八、討論、心得裝訂線酶的基本性質(zhì)實(shí)驗(yàn)A、底物專一性一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅毫私饷傅膶Ｒ恍?；掌握?yàn)證酶的專一性的基本原理及方法；學(xué)會(huì)排除干擾因素，設(shè)計(jì)酶學(xué)實(shí)驗(yàn)。二、實(shí)驗(yàn)容和原理：酶催化作用的一個(gè)重要特點(diǎn)是具有高度的底物專一性，即一種酶只能對某一種底物或一類底物起催化作用，對其他底物無催化反應(yīng)。酶的專一性

↗相對專一性→絕對專一性↘立體異構(gòu)專一性本實(shí)驗(yàn)以唾液淀粉酶、 蔗糖酶對淀粉、蔗糖水解反應(yīng)的催化作用來觀察酶的專一性。試劑檢測反應(yīng)產(chǎn)物。Benedict 試劑是堿性硫酸銅溶液，具有一定的氧化能力，能與還原性糖

采用

Benedict的半縮醛羥基發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成磚紅色氧化亞銅沉淀。Na2CO3+2H2O → 2NaOH+H2CO3CuSO4+2NaOH →Cu(OH)2+Na2SO4還原糖(—CHOor—C=O)+2Cu(OH)2 →Cu2O↓+2H2O+ 糖的氧化產(chǎn)物↓ ↓ ↓醛基 酮基 磚紅色或紅色在分子結(jié)構(gòu)上，淀粉幾乎沒有，而蔗糖全無半縮醛基，它們均無還原性，因此它們與 Benedict試劑無呈色反應(yīng)。淀粉被淀粉酶水解，產(chǎn)物為葡萄糖；蔗糖被蔗糖酶水解，其產(chǎn)物為果糖和葡萄糖，它們都為具有自由半縮醛羥基的還原糖，與 Benedict試劑共熱，即產(chǎn)生紅棕色 Cu2O沉淀。本實(shí)驗(yàn)以此顏色反應(yīng)觀察淀粉酶、蔗糖酶對淀粉和蔗糖的水解作用。三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑：1、實(shí)驗(yàn)材料⑴蔗糖酶液(樣品Ⅳ1：10稀釋）;⑵新鮮唾液（含唾液淀粉酶）。2、實(shí)驗(yàn)試劑⑴蔗糖酶液(樣品Ⅳ1：10稀釋）；⑵唾液淀粉酶液（唾液1：200稀釋）⑶5%蔗糖（A.R.）溶液；0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）；⑸Benedict試劑。四、實(shí)驗(yàn)器材與儀器：1.漏斗；2.脫脂棉花；3.恒溫水?。?7℃，100℃）；4.量筒；5.試管及試管架；6.燒杯；7.吸量管。五、操作方法和實(shí)驗(yàn)步驟：㈠檢查試劑往1，2，3試管中分別取三支試管，加入蒸餾水、5%蔗糖溶編號1，2，3液、0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液3ml將三支試管搖勻，置于沸水浴記錄觀察結(jié)果中煮沸2~3min（二）淀粉專一性往1，2，3試管中分別加入蒸餾水、5%蔗糖溶液、0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液3ml

往三支試管中各加入Benedict試劑2ml取三支試管，往1，2，3試管中各加編號1，2，3入唾液淀粉酶液1ml搖勻，置于往三支試管中各加將三支試管搖37℃水浴中勻，置于沸水浴入Benedict試劑2ml保溫10min中煮沸2~3min記錄觀察結(jié)果（三）蔗糖酶的專一性往1，2，3試管中分別取三支試管，加入蒸餾水、5%蔗糖溶往1，2，3試管中各編號1，2，3液、0.5%淀粉加入蔗糖酶液1ml搖勻，置于（0.3%NaCl）溶液3ml將三支試管搖往三支試管中各加37℃水浴中勻，置于沸水浴入Benedict試劑2ml保溫10min中煮沸2~3min記錄觀察結(jié)果六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：（一）檢查試劑：試劑處理試管編號0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液（ml）5%蔗糖溶液（ml）蒸餾水（ml）Benedict試劑（ml）記錄觀察結(jié)果（二）淀粉酶專一性：試劑處理試管編號0.5%淀粉溶液 （ml）5%蔗糖溶液 （ml）蒸餾水 （ml）唾液淀粉酶溶液 （ml）Benedict試劑 （ml）

123333222搖勻，沸水浴2~3分鐘123333111搖勻，37℃水浴10分鐘222記錄觀察結(jié)果（三）蔗糖酶專一性：試劑處理試管編號0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液（ml）5%蔗糖溶液 （ml）蒸餾水 （ml）蔗糖酶溶液 （ml）Benedict試劑 （ml）記錄觀察結(jié)果

搖勻，沸水浴 2~3分鐘123333111搖勻，37℃水浴10分鐘222搖勻，沸水浴2~3分鐘七、討論、心得：1、設(shè)計(jì)第一組實(shí)驗(yàn)的目的是為了檢測是否存在干擾因素；第二組實(shí)驗(yàn)是為了驗(yàn)證淀粉酶的底物專一性；第三組實(shí)驗(yàn)是為了驗(yàn)證蔗糖酶的底物專一性。2、三組實(shí)驗(yàn)中的蒸餾水都是作為對照用的。3、淀粉溶液中 0.3%NaCl 的作用是為了保證淀粉酶的活性，同時(shí)氯離子作為激活劑，可以增加酶的活性，使反應(yīng)現(xiàn)象更加明顯。4、試管要潔凈，所有試劑加量要準(zhǔn)確，加好試劑后要搖勻。使用試劑時(shí)不要人為造成試劑間的互相污染；試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間的互相污染。以免實(shí)驗(yàn)結(jié)果的錯(cuò)誤。B、影響酶活性的因素——激活劑、抑制劑一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅毫私饧せ顒┖鸵种苿γ复俜磻?yīng)速度的影響；學(xué)習(xí)檢定激活劑和抑制劑影響酶促反應(yīng)速度的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)容和原理：激活劑：能使酶的活性增加的物質(zhì)。抑制劑：不引起酶蛋白變性，但能使酶分子上的某些必需基團(tuán)（主要是指酶活性中心上的一些基團(tuán)）發(fā)生變化，因而引起酶活力下降，甚至喪失，致使酶反應(yīng)速度降低的物質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)利用淀粉被水解的不同階段產(chǎn)物與碘有不同顏色反應(yīng)，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應(yīng)中激活或抑制現(xiàn)象。淀粉經(jīng)酶促水解為葡萄糖的不同階段的產(chǎn)物與碘作用的顏色反應(yīng)如下：淀粉→→→紫色糊精→→→紅色糊精→→→無色糊精→→→麥芽糖→→→葡萄糖加加加加加加碘碘碘碘碘碘顯藍(lán)色顯紫色顯紅色不顯色不顯色不顯色液液液液↓液液↓還原性還原性本實(shí)驗(yàn)中，氯離子為唾液淀粉酶的激活劑；銅離子為唾液淀粉酶的抑制劑。利用淀粉被水解的不同階段產(chǎn)物與碘有不同的呈色反應(yīng)，定性觀察唾液淀粉酶在酶促反應(yīng)中激活和抑制現(xiàn)象。淀粉 +碘→藍(lán)色淀粉 +淀粉酶 Cl-或Cu2+ 水解產(chǎn)物 + 碘液 →顏色變化水解的程度是通過水解混合物遇碘溶液所呈現(xiàn)的顏色之變化來判斷的。三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑：1、實(shí)驗(yàn)材料新鮮唾液（1：200稀釋）2、實(shí)驗(yàn)試劑⑴唾液淀粉酶（自制）0.1%淀粉溶液⑶1.0%氯化鈉溶液⑷1.0%硫酸銅溶液⑸1.0%硫酸鈉溶液⑹碘化鉀-碘液四、實(shí)驗(yàn)器材與儀器：1.試管及試管架2.量筒3.漏斗4.脫脂棉花5.點(diǎn)滴板6.吸量管7.恒溫水浴（37℃）五、操作方法和實(shí)驗(yàn)步驟：取八支試管，往八支試管中分別混勻，分別置于37℃加入3ml0.1%淀粉1，2，3，編號1，2，3，水浴中保溫溶液、1ml蒸餾水和4，5，6，7，84，5，6，7，8分鐘1ml淀粉酶溶液分別滴加記錄觀察結(jié)果滴碘液1號試管呈紫紅色， 2，3，4，5，6，7，8號試管均呈棕黃色，最終確定最佳反應(yīng)時(shí)間為 1min。往1，2，3，4號試管中分取四支試管，編分別加入3ml別加入1ml硫酸銅溶液、號1，2，3，40.1%淀粉溶液1ml氯化鈉溶液、1ml硫酸鈉溶液、1ml蒸餾水分別加入將各管混勻后，1ml置于37℃水浴記錄觀察結(jié)果唾液淀粉酶液中保溫1分鐘六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：試劑處理1234試管編號0.1%淀粉溶液（ml）33331%CuSO4溶液（ml）11%NaCl溶液（ml）11%Na2SO4溶液（ml）1蒸餾水（ml）1唾液淀粉酶溶液（ml）1111混勻，37℃水浴1分鐘KI-I2溶液（滴）1111記錄觀察結(jié)果七、討論、心得：1、本實(shí)驗(yàn)中，試管 1是為了驗(yàn)證抑制劑對酶促反應(yīng)速率的影響；試管 2是為了驗(yàn)證激活劑對酶促反應(yīng)速率的影響；試管 3是為了排除氯離子和硫酸根離子的干擾；試管 4是作為對照的。2、抑制劑和變性劑是不同的。抑制劑不引起酶蛋白變性，僅僅是降低其活性，除去后酶的活性恢復(fù)；而變性劑則會(huì)破環(huán)酶蛋白原有活性，使酶失去活性，是不可逆的。3、試管要潔凈，所有試劑加量要準(zhǔn)確，加好試劑后要搖勻。使用試劑時(shí)不要人為造成試劑間的互相污染；試劑用好瓶蓋要立即蓋好，防止試劑間的互相污染。以免實(shí)驗(yàn)結(jié)果的錯(cuò)誤。C、影響酶活性的因素——溫度 最適溫度測定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵螅毫私鉁囟葘γ富盍Φ挠绊懀粚W(xué)習(xí)測定最適溫度的原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)容和原理：酶的催化反應(yīng)受溫度影響很大，每一種酶所催化的反應(yīng)，在一定條件下，僅在某一溫度圍表現(xiàn)出最大的活力，即反應(yīng)速度最大時(shí)的溫度，這個(gè)溫度稱為該酶促反應(yīng)的最適溫度，高于或低于最適溫度時(shí)，反應(yīng)速度逐漸下降。因此，酶促反應(yīng)與溫度的關(guān)系，用酶活力對溫度作圖，通常具有鐘罩形曲線特征。實(shí)驗(yàn)①：利用唾液淀粉酶為試驗(yàn)對象，在0℃～65℃之間選擇不同的溫度，進(jìn)行酶活力測定。根據(jù)淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同，遇碘呈現(xiàn)顏色的變化來判斷酶活力的大小及最適溫度。實(shí)驗(yàn)②：采用蔗糖酶為試驗(yàn)對象，在室溫至75℃之間選擇不同溫度進(jìn)行酶活力測定。蔗糖酶的活力常以其反應(yīng)產(chǎn)物還原糖（葡萄糖）的生成量來表示。本實(shí)驗(yàn)選擇3,5–二硝基水揚(yáng)酸法測定還原糖量。在堿性條件下，3,5–二硝基水酸與還原糖溶液共熱后被還原成紅色氨基化合物，并在一定濃度圍，還原糖的量與反應(yīng)溶液所呈棕紅色物質(zhì)顏色的深淺程度成正比。因此，可以用分光光度法測定酶促反應(yīng)后生成的還原糖量，從而測定蔗糖水解的速度和酶活力。三、實(shí)驗(yàn)材料與試劑：1、實(shí)驗(yàn)材料⑴ 蔗糖酶液(樣品Ⅳ1：10稀釋）；⑵ 新鮮唾液（1：200稀釋）。2、實(shí)驗(yàn)試劑0.2mol/L醋酸緩沖液（pH4.6）⑵5%蔗糖（A.R.）溶液（W/V）⑶3,5—二硝基水揚(yáng)酸（簡稱DNS）試劑0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）⑸IK-I2溶液四、實(shí)驗(yàn)器材與儀器：試管及試管架；2．恒溫水浴(37℃、50℃、65℃、75℃、100℃）；3．吸量管；4．滴管；5．點(diǎn)滴板；6．分光光度計(jì)；7．制冰機(jī)。五、操作方法和實(shí)驗(yàn)步驟：一、溫度對唾液淀粉酶活力的影響1．觀察溫度對酶活動(dòng)的影響：取五支試將1，2，3，4，5號試分別滴加2ml0.5%淀管分別置于冰中、室溫、管，編號1，粉（0.3%NaCl）溶液37℃水浴、50℃水浴、2，3，4，565℃水浴中預(yù)溫5min分別加入經(jīng)分別滴加混勻，分別置于各相過預(yù)溫的淀1ml碘液應(yīng)溫度，保溫1min粉酶液1ml記錄觀察結(jié)果2、繪制溫度-酶活力曲線圖，以反應(yīng)溫度為橫坐標(biāo)，反應(yīng)液顏色的深淺程度（代表酶活力的大?。榭v坐標(biāo)。繪制溫度——酶活力曲線（鐘罩形），確定唾液淀粉酶的最適溫度。二、溫度對蔗糖酶活力的影響1、蔗糖酶最適溫度的測定蔗糖酶液（樣品 IV）稀釋10倍，備用。取六支試管，分別加入1ml0、1號試管置于室溫中，2、3、4、5號試管分別編號0，1，2，0.2mol/L醋酸緩沖液、置于37℃、50℃、65℃、3，4，50.5ml5%蔗糖溶液75℃水浴中保溫3min0號試管中加入0.5ml蒸分別置于相應(yīng)分別加入餾水，1~5號管分別加入溫度環(huán)境中保0.5ml蔗糖酶液。水和蔗1mlDNS溫10min糖酶液均經(jīng)過預(yù)溫混勻，置于沸分別加入5測定在520nm水浴中5minml蒸餾水下的光吸收值2、繪制溫度——酶的活力曲線圖七、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：一、溫度對唾液淀粉酶活力的影響：1．觀察溫度對酶活動(dòng)的影響：試劑處理12345試管編號0.5%淀粉（0.3%NaCl）溶液（ml）22222溫度（℃）0室溫375065搖勻，預(yù)熱5分鐘唾液淀粉酶溶液（預(yù)溫）（ml）11111混勻，置于相應(yīng)溫度中保溫1分鐘I2-IK溶液（滴）11111記錄觀察結(jié)果2.溫度-酶活力曲線圖：二、溫度對蔗糖酶活力的影響：1、蔗糖酶最適溫度的測定：試劑條件012345試管編號反應(yīng)溫度（℃）室溫室溫375065750.2mol/LpH4.6醋酸緩沖液（ml）1111115%蔗糖溶液（ml）0.50.50.50.50.50.5（ml）HO0.5混勻，預(yù)熱3分鐘0.50.5蔗糖酶溶液（預(yù)溫）0.50.50.52混勻，保溫10分鐘DNS（ml）1