試驗四人毛囊DNA的快速提取及PCR檢測性別M

實驗四人毛囊DNA的快速提取及PCR方法檢測SRY基因判斷性別實驗目的掌握毛囊DNA的快速提取方法及其原理掌握DNA的電泳檢測技術學習PCR擴增DNA的原理，掌握PCR操作步驟掌握利用PCR技術擴增SRY基因判斷性別的原理試驗內容一毛囊DNA的快速提取與檢測二PCR擴增進行性別鑒定前期準備前期處理：挑出毛發(fā)10根，盡量剪短至只剩下毛囊，去除毛根，放入干凈的EP管中。加入PH8.0的滅菌水清洗1-2次，離心后吸出水PCR擴增進行性別鑒定PCR試驗原理聚合酶鏈式反應(polymerasechainreaction，PCR)是當今現(xiàn)代分子生物學的三大主流技術之一。PCR擴增產物檢測用濃度為1-2%的瓊脂糖凝膠對PCR產物（DNA）進行電泳分離。

瓊脂糖凝膠中有很多小孔隙，起一個分子篩的作用，DNA在電場的作用下由負極往正極移動穿過這些孔隙，DNA遷移速率與電場強度成正比，與DNA分子量大小成反比。從而將大小不同的DNA片段分離開來。SRYPCR產物大小：501bpGAPDHPCR產物大?。?65bpPCR擴增體系10ul總體系：H2O7×10=70Buffer1.010Primer-F0.33Primer-R0.33dNTP0.33Taq0.11Template(毛囊DNA)1.0ul

PCR擴增程序95℃,4min;94℃,30s;60℃,30s;72℃,30s;Goto230循環(huán)72℃,5min;4℃,5min.方法一酚仿抽提法試劑：10%SDS、蛋白酶K(20mg/ml)、苯酚、氯仿、異戊醇、乙醇TE10mmol/LTris-Hcl,PH=8.0;1mmol/LEDTA,PH=8.0步驟酚仿抽提法優(yōu)缺點：該方法提取的DNA濃度不是很高，中間步驟過多會損失大量的DNA，所以如果是很細小的毛，并且量不多，不建議使用此方法。但是此方法提取的DNA質量較好，擴增效果好。

酚仿抽提法圖1.酚仿抽提法檢測結果方法二、堿裂解法于裝有毛囊的EP管中加入0.2mol/L的NaOH溶液50μL，煮沸15min后，瞬時離心，吸取上清液至另外一只干凈的離心管中加入PH=6左右的Tris–HCl50μL，13000r離心2min將上清液轉移到另外一只EP管中即可。方法二、堿裂解法優(yōu)缺點：該方法提取步驟較簡單，提取周期短，并且DNA損失量較少，提取效率高。但PH值不容易調節(jié)以至于會影響到后續(xù)PCR擴增。因此如果PCR擴增效率不高的引物，不建議用該方法提取。方法三、PCR擴增法

試劑：10×PCR緩沖液、Mg2+、蛋白酶K(20mg/ml)實驗步驟：按以下體系配制毛囊裂解液：

10×PCR緩沖液100μLMg2+80μL

蛋白酶K(20mg/ml)1μLddH2O819μL方法三、PCR擴增法加入上述裂解液15μL于放有毛囊的EP管中在PCR儀上設置一個單循環(huán)程序:

65℃30min,95℃15min,4℃10min。將上一步驟中的PCR試管放入預熱好的PCR儀中,運行該程序；吸取上清液于干凈的EP管中即可；

方法三、PCR擴增法優(yōu)缺點：該方法提取DNA的效率較高，可獲得較多的DNA，并且需要的毛囊量較少。較細且少量的毛囊建議用此方法提取DNA。但是該方法抽提的DNA質量不是很好，擴增的時候需加大DNA加入量，并且擴增的結果中可能會有大量雜帶。圖2：PCR法抽提檢測結果

電泳檢測制備1%的瓊脂糖凝膠進行電泳檢測DNA具有結合EB分子的能力，在紫外燈下產生熒光的信號二PCR擴增進行性別鑒定性別鑒定原理

人類男性的性染色體組成是XY，女性的性染色體組成是XX，因而通過對一些在Y染色體上所特有的基因（如SRY基因）進行PCR擴增分析，即可對性別進行鑒定。

本試驗通過對毛囊DN