定量方法概述

第四節(jié)

分析方法的驗(yàn)證1.驗(yàn)證的目的：證明采用的方法適合于相應(yīng)檢測(cè)要求

2.需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目：鑒別試驗(yàn)、雜質(zhì)檢查、有效成分的含量測(cè)定以及制劑中其它成分的測(cè)定，藥品溶出度、釋放度。一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容（一）準(zhǔn)確度用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度表示方法：用回收率（%）表示取樣量取樣量原料藥可用已知純度的對(duì)照品或供試品進(jìn)行測(cè)定用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。

制劑：考察其他組分和輔料對(duì)回收率的影響①用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定。②可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定（加樣回收率）③用本法所得結(jié)果與已知準(zhǔn)確度的另一個(gè)方法測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較。雜質(zhì)定量測(cè)定的準(zhǔn)確度向原料藥或制劑中加入已知量雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。本法測(cè)定結(jié)果與另一成熟的方法進(jìn)行比較3．?dāng)?shù)據(jù)要求在規(guī)定范圍內(nèi)，至少用9個(gè)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。3個(gè)不同濃度，每個(gè)濃度各分別制備3份供試品溶液3×3，至少9個(gè)測(cè)定結(jié)果（二）精密度同一樣品多次測(cè)量值之間相互接近的程度表示方法：偏差、標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）重復(fù)性在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度中間精密度在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果之間的精密度重現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果之間的精密度（三）專屬性有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能正確測(cè)定出被測(cè)物的特性

鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性（一）鑒別反應(yīng)應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)組分的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。（二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定

①在能獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察對(duì)結(jié)果的干擾。

②在雜質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用已驗(yàn)證方法或藥典方法進(jìn)行對(duì)照。（四）檢測(cè)限指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量(1)非儀器分析目視法(2)信噪比法把已知低濃度試樣測(cè)出的信號(hào)與空白樣品測(cè)出的信號(hào)進(jìn)行比較，算出能被可靠地檢測(cè)出的最低濃度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1時(shí)的相應(yīng)濃度或量確定檢測(cè)限。（五）定量限指試樣中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，常用信噪比法確定定量限。一般以信噪比為10∶1時(shí)相應(yīng)濃度或注入儀器的量確定定量限。（六）線性線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。線性關(guān)系：Y=a+bx（r=0.9999)線性程度：相關(guān)系數(shù)15（七）范圍范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。16

是指在測(cè)定條件有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。典型的變動(dòng)因素有：被測(cè)溶液的穩(wěn)定性、樣品提取次數(shù)、時(shí)間等。實(shí)際工作中?？疾斓囊蛩兀罕粶y(cè)溶液的穩(wěn)定性，流動(dòng)相的組成和pH，商品柱的品牌，柱溫等（八）耐用性一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容①已有重現(xiàn)性驗(yàn)證，不需驗(yàn)證中間精密度②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補(bǔ)充③視具體情況予以驗(yàn)證第五節(jié)

定量分析有關(guān)計(jì)算原料藥的含量用百分含量表示：制劑的含量則用標(biāo)示量的百分含量表示：

標(biāo)示量(S)：就是藥品標(biāo)簽上注明，每一單位劑量藥品中主藥的量。表示為g/片、mg/ml等。片劑表示量百分含量：每片實(shí)測(cè)的含量？在分析時(shí)，一般取樣10片或20片，精密稱定其總重量，再取一定量的片粉來(lái)測(cè)量，以平均片重來(lái)代替片重進(jìn)行計(jì)算。取10片，精密稱定重量為2.000g，研磨，精密稱取片粉0.2100g，實(shí)測(cè)量是0.1980g，求平均片重?每片實(shí)測(cè)的含量？注射劑劑表示量百分含量：T(滴定度):1ml滴定液(mmol/L)相當(dāng)于被測(cè)藥物的毫克數(shù)（一）滴定分析法（一）滴定分析法（一）滴定分析法呋塞米原料藥含量測(cè)定取本品0.4988g（干燥品），加乙醇30ml，微溫使溶解，放冷，加甲酚紅指示液4滴與麝香草酚藍(lán)指示液1滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）滴定至溶液顯紫紅色，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）14.86ml；并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正，消耗氫氧化鈉滴定液（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于33.07mg的呋塞米。按干燥品計(jì)算，含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。呋塞米原料藥含量測(cè)定（一）滴定分析法由于98.48%＜99.0%，故本品含量不合格剩余滴定法也稱回滴法，本法先加入定量過(guò)量滴定液A與藥物作用，再用滴定液B與剩余的滴定液A反應(yīng)，然后再進(jìn)行含量計(jì)算滴定液濃度校正因子空白試驗(yàn)消耗滴定液B的體積剩余的滴定液A消耗的滴定液B的體積（一）滴定分析法司可巴比妥鈉原料藥含量測(cè)定取本品0.1041g（干燥品），置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖1min，在暗處?kù)o置15min后，注意微開(kāi)瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當(dāng)于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品計(jì)算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知樣品消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白實(shí)驗(yàn)消耗硫代硫酸鈉滴定液（0.1012mol/L）25.02ml（一）滴定分析法司可巴比妥鈉原料藥含量測(cè)定測(cè)定結(jié)果大于98.5%，故本品含量合格（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片劑（標(biāo)示量0.5g）的含量測(cè)定取甲苯磺丁脲10片，精密稱定為5.948g，研細(xì)，精密稱取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微熱，使其溶解，放冷，加酚酞指示劑3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉紅色，消耗量18.47ml。每1ml氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于27.04mg的甲苯磺丁脲?！吨袊?guó)藥典》現(xiàn)行版規(guī)定本品含甲苯磺丁脲應(yīng)為標(biāo)示量的95.0%～105%。試計(jì)算本品的標(biāo)示量百分含量，并判斷是否符合規(guī)定。（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片劑（標(biāo)示量0.5g）的含量測(cè)定本品含量合格(二）分光光度法供試品溶液的濃度CX供試品溶液的濃度CX1.單位的統(tǒng)一2.樣品有沒(méi)有稀釋3.表示方法(二）分光光度法對(duì)乙酰氨基酚原料藥含量測(cè)定精密稱取對(duì)乙酰氨基酚0.04110g，置250ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50ml，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10ml，加水至刻度，搖勻。依照分光光度法，在257nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸收度為0.582。按C8H9NO2的百分吸收系數(shù)為715計(jì)算對(duì)乙酰氨基酚的百分含量(二）分光光度法對(duì)乙酰氨基酚原料藥含量測(cè)定(二）分光光度法甲氧芐啶注射液（規(guī)格2ml：0.1g）含量測(cè)定精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻。照紫外-可見(jiàn)分光光度法，在271nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度為0.420。另取甲氧芐啶對(duì)照品適量0.05134g，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀釋至刻度，搖勻。在271nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度為0.416，計(jì)算甲氧芐啶標(biāo)示量百分含量。(二）分光光度法甲氧芐啶注射液（規(guī)格2ml：0.1g）含量測(cè)定（三）色譜法供試品溶液的濃度CX（三）色譜法頭孢唑林鈉含量測(cè)定取含量為99.5%的頭孢唑林鈉對(duì)照品25.13mg，配成溶液，取此溶液10μl注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積，3次測(cè)定值分別為：2490189、2492796和2492178；另外稱取頭孢唑林鈉供試品3份，分別為28.13mg、29.35mg和27.10mg，按上法測(cè)定，分別取10μl溶液注入液相色譜儀，測(cè)得峰面積分別為2634858、2763699和2536847，求供試品的百分含量。（三）色譜法頭孢唑林鈉含量測(cè)定第一次測(cè)定：第二次測(cè)定：第三次測(cè)定：對(duì)照品平均峰面積：（三）色譜法復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（10g:7.5mg）醋酸地塞米松標(biāo)示量百分含量色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：固定相：C18

流動(dòng)相：甲醇-水（70∶30）檢測(cè)波長(zhǎng)：240nm理論板數(shù)：按氫化可的松峰計(jì)算不低于2000分離度：地塞米松峰、內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求（三）色譜法復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（10g:7.5mg）醋酸地塞米松標(biāo)示量百分含量?jī)?nèi)標(biāo)溶液：甲睪酮0.0100g，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度測(cè)定法：供試品+內(nèi)標(biāo)記錄色譜圖；測(cè)得數(shù)據(jù)如下：（三）色譜法復(fù)方醋酸地塞米松乳膏（10g:7.5mg）醋酸地塞米松標(biāo)示量百分含量另取醋酸地塞米松對(duì)照品約0.0128