紙層析法鑒定轉(zhuǎn)氨基作用

紙層析法鑒定轉(zhuǎn)氨基作用2021/5/71[目的]1.驗證氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用

2.掌握紙上層析法分離和鑒定氨基酸的基本原理和方法。

[原理]在轉(zhuǎn)氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α-氨基生成相應的α-酮酸，而另一種α-酮酸得到此氨基生成相應的氨基酸的過程，稱為氨基酸的轉(zhuǎn)氨基作用。2021/5/72層析理論層析法（色譜法）：是利用混合物各組分物理、化學性質(zhì)（如溶解度、吸附能力、電荷和分子量等）的差別，使各組分在支持物上集中分布在不同的區(qū)域，借以將各組分分離。

固定相——濾紙結(jié)合的水流動相——乙醇由于混合物中的有效成分和雜質(zhì)受固定相的阻力和受流動相的推力影響不同，各組分移動速度不同，有效成分和雜質(zhì)在這兩個相中連續(xù)多次地進行分配、吸附和交換作用，最終結(jié)果是使混合物得到分離。2021/5/73[步驟]

1.制備肝勻漿

2.轉(zhuǎn)氨基反應取干凈試管2支，分別標明測定管與對照管，按下表操作。

管號試劑（滴）測定管對照管肝勻漿10d10d37℃水浴10min沸水浴10min丙氨酸10d10dα-酮戊二酸10d10d37℃水浴20min2021/5/743.準備：取直徑15cm圓形濾紙1張，用圓規(guī)在濾紙正中作一半徑為1cm的小圓圈，用鉛筆通過圓心作兩點互相垂直的線，并在兩線外端等距離點4個原點，標明測、對、谷、丙。在濾紙圓心處打一小孔（如鉛筆芯粗細），另取同類濾紙小片1.5cm×3cm，下三分之二剪成須狀。將其卷成圓筒如燈芯狀，插入小孔（略突出于濾紙面）2021/5/75[步驟]4.點樣分別用采血管吸取測定管上清液、對照管上清液、谷氨酸溶液、丙氨酸溶液各1滴，依次點在濾紙上標明測、對、谷、丙的點樣處。注意點樣斑點不可太大。直徑應小于0.5cm。必要時可再點一次，每點一滴，用吹風機吹干后方可再點第二滴，并且點樣量應力求均勻相等。5.層析

將濾紙放在培養(yǎng)皿上，燈芯下端浸入層析液中進行層析。約40分鐘后，去除燈芯，立即用鉛筆劃出溶劑前沿，用吹風機吹干。2021/5/766.顯色

將濾紙平放在培養(yǎng)皿上，用噴瓶向濾紙均勻噴灑0.1%茚三酮溶液，再用吹風機吹干，可見紫紅色的同心弧形斑點。7.計算按下表記錄有關數(shù)據(jù)，計算Rf值?！肮取薄氨薄皩Α薄皽y1、2”點樣處至色斑中心距離(A)點樣處至溶劑前沿距離(B)Rf值(A/B)

將“對”、“測”各色斑的Rf值與已知氨基酸的Rf值進行對比，確定它們各是什么氨基酸。據(jù)此解釋轉(zhuǎn)氨基作用。2021/5/779、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。03-2月-2303-2月-23Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。***2/3/20235:02:29PM11、人總是珍惜為得到。03-2月-23**Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。***Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。03-2月-2303-2月-23**03February202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月2023**03-2月-2315、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月23*03-2月-23*03February202316、業(yè)余生活要有意義，不要越軌。**2/3/202317、一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。***03-2月-23謝謝大家2021/5/789、人的價值，在招收誘惑的一瞬間被決定。2023/2/32023/2/3Friday,February3,202310、低頭要有勇氣，抬頭要有低氣。2023/2/32023/2/32023/2/32/3/20235:02:29PM11、人總是珍惜為得到。2023/2/32023/2/32023/2/3Feb-2303-Feb-2312、人亂于心，不寬余請。2023/2/32023/2/32023/2/3Friday,February3,202313、生氣是拿別人做錯的事來懲罰自己。2023/2/32023/2/32023/2/32023/2/32/3/202314、抱最大的希望，作最大的努力。03二月20232023/2/32023/2/32023/2/315、一個人炫耀什么，說明他內(nèi)心缺少什么。。二月232023/2/32023/2/32023/2/32/3/202316、業(yè)余生活要有意義